Методические указания по определению фосэтилалюминия в плодах и растениях огурца и почве газожидкостной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6237-91)
29 июля 1991 г. № 6237-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФОСЭТИЛАЛЮМИНИЯ В ПЛОДАХ И РАСТЕНИЯХ ОГУРЦА И ПОЧВЕ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Фосэтилалюминий — трис (этилфосфит) алюминия является действующим веществом фунгицидов «Альетт», ф. Рон-Пуленк, Франция. Эфаль М, НПО «Каустик». Алюфит, НПО «Каустик».
Эмпирическая формула: C_{6}H_{18}AlO_{9}P_{3} .
Белое кристаллическое вещество, плавящееся с разложением. Растворимость в воде (20 °C) 120 г/л, в ацетонитриле и метилцеллозольве 0,08 г/л. Медленно разлагается в водном растворе: период полуразложения при 20 °C (1 г/л) > 100 дней. Окислители быстро инактивируют препарат, превращая его в производные фосфорной кислоты.
Выпускается в виде 80%-ного с.п., а также в смесях с другими пестицидами. Применяется как системный фунгицид для защиты хмеля и табака от ложной мучнистой росы (2 — 3 г/га), на виноградниках против милдью (3 кг/га, а также на фруктовых деревьях в комбинации с каптаном или фолпетом.
\text{ЛД}_{50} для крыс 5800 мг/кг. Малотоксичен для пчел и других полезных насекомых. МДУ не установлен.
ФОСЭТИЛАЛЮМИНИЯ В ПЛОДАХ И РАСТЕНИЯХ ОГУРЦА И ПОЧВЕ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении фосэтилалюминия из плодов и растений огурца гомогенизацией с 1%-ной серной кислотой, из почвы экстракцией 1%-ным раствором серной кислоты, центрифугировании фильтрата, метилировании фосэтилалюминия диазометаном и определении метилового эфира этилфосфористой кислоты на газовом хроматографе с термоионным детектором.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество 0,05 нг, линейный диапазон детектирования 0,05 — 5 нг. Другие метрологические характеристики приведены в таблице:
2.1.3 Избирательность метода
Пестициды, применяемые совместно с фосэтилалюминием, определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Соляная кислота, ч., ГОСТ 3118-67.
Серная кислота, ч., ГОСТ 4204-66.
Метиламин, 24%-ный водный раствор, МРТУ 6-09-1385-67.
Мочевина, ч.д.а., ГОСТ 6691-67.
Нитрит натрия, ч.д.а., ГОСТ 4168-66.
Диэтиловый эфир, ч., ТУ 6-09-870-78, абсолютированный.
Гидроксид натрия, ч.д.а., ГОСТ 4203-65.
Хроматон N-AW (0,110 — 0,125) +15% карбовакс 20 М.
Стандартные растворы фосэтилалюминия, основной: 100 мкг/мл; рабочие 1,0; 5,0; 10,0 мкг/мл. Срок хранения в холодильнике основного стандарта 1 месяц, рабочих — 1 неделя.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Газовый хроматограф «Цвет-106» или аналогичный с термоионным детектором.
Механический встряхиватель ТУ-64-1-1081-73.
Размельчитель тканей РТ-1, ТУ 64-1-1505-79.
Центрифуга ЦЛС-3, ТУ-5-375-4170-73.
Колба круглодонная ККШ-500, ГОСТ 9737-70.
Воронки химические 70 мм, ГОСТ 9775-77.
Колбы круглодонные ККШ-50, ГОСТ 9737-70.
Пипетки, ГОСТ 20292-77, емк. 5 и 1 мл.
Баня водяная, ТУ 46-22-608-75, или ротационный испаритель ИР-1М.
Холодильник ТИП ХПТ-КШ, ГОСТ 1770-64.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Получение нитрозометилмочевины
В 1 л колбу приливают 200 г (1,5 м) 24%-ного водного раствора метиламина и добавляют концентрированную соляную кислоту до кислой (pH — 1 - 2) реакции среды (около 150 мл). В колбу добавляют до объема 500 мл дистиллированной воды и 300 г (5 м) мочевины. Полученный раствор осторожно кипятят с обратным холодильником при умеренном нагреве в течение 3-х часов. Усиливают нагрев и кипятят еще 15 минут. Раствор охлаждают до комнатной температуры и растворяют в нем 110 г (1,5 м) нитрита натрия. Охлаждают раствор до 0 °C в смеси лед-хлорид натрия.
В 3-литровом стакане готовят смесь из 600 г льда и 100 г (1 м) концентрированной серной кислоты. К раствору при охлаждении стакана в смеси лед-хлорид натрия медленно приливают холодный раствор метилмочевины и NaNO_{2} при перемешивании содержимого механической мешалкой. Нитрозометилмочевина всплывает на поверхность в виде кристаллов. Кристаллы отфильтровывают на воронке Бюхнера под вакуумом. Затем размешивают их с 50 мл холодной воды до образования пасты и снова отфильтровывают. Сушат нитрозометилмочевину в вакуумном эксикаторе до постоянного веса. Выход 105 — 115 г (66 — 72%). Хранить нитрозометилмочевину следует в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием тепла и света она может взрываться. Вещество ядовито! Избегать попадания на кожу. Испытание на чистоту: 0,5 г нитрозометилмочевины растворить в 5 мл метанола. Вещество должно раствориться без осадка. Если остается осадок, вещество дополнительно промыть холодной водой и высушить, как указано выше.
2.4.2 Получение диазометана
В круглодонную колбу емкостью 500 мл помещают 30 мл 50%-ного водного раствора гидроксида калия и 100 мл абсолютированного серного эфира. Смесь охлаждают льдом до 5 °C, после чего при взбалтывании через химическую воронку небольшими порциями добавляют 10,3 г (0,1 м) нитрозометилмочевины. Колбу соединяют с холодильником и стеклянным алонжем, конец которого погружают в приемную колбу с 40 мл диэтилового эфира. Приемную колбу погружают в емкость со смесью соли и льда. Реакционную колбу нагревают в водяной бане до 40 °C и перегоняют образующийся диазометан совместно с серным эфиром. Отгонку прекращают, как только дистиллят станет бесцветным. Нельзя отгонять весь эфир, так как оставшиеся на дне колбы перекисные соединения взрывоопасны. Раствор диазометана хранят в колбе с притертой пробкой в холодильнике не более пяти дней.
2.4.3 Приготовление стандартов
В пробирки или грушевидные колбы вносят 0,1; 0,2; 0,5 мл стандартного раствора с концентрацией 1 мкг/мл, добавляют по 2 — 3 мл ацетона, осушают на водяной бане током сухого воздуха досуха. После охлаждения пробирок до комнатной температуры приливают к сухому остатку по 3 мл эфирного раствора диазометана и закрывают притертыми пробками, через 15 минут избыток диазометана нейтрализуют, прибавляя в пробирку по каплям муравьиную кислоту. Концентрации стандартных растворов соответствуют 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. Хроматографируют 3 мкл раствора. Метилирование стандартов проводят в день анализа.
2.4.4 Отбор проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. № 2051-79.
2.4.5 Подготовка проб к анализу
Лабораторную пробу плодов или растений огурца измельчают ножом, перемешивают и отбирают навески: плодов 100 г, растений 50 г. Почву растирают в ступке; просеивают и отбирают навеску 25 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция
Аналитическую пробу помещают в стакан гомогенизатора или измельчителя тканей, прибавляют 50 мл 1%-ного раствора серной кислоты для плодов и 100 мл этого экстрагента для растений, смесь гомогенизируют в течение 10 минут. Гомогенизат фильтруют через ватный фильтр, промывают фильтр 30 мл 1%-ной H_{2}SO_{4} , отбирают 10 мл фильтрата в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 минут при 5 тыс. об/мин. (R = 10 см). Навеску почвы помещают в коническую колбу, приливают 50 мл 1%-ного раствора серной кислоты и фосэтилалюминий экстрагируют на механическом встряхивателе в течение 1 часа. Содержимое колбы фильтруют через ватный фильтр и 10 мл фильтрата центрифугируют.
В круглодонные колбы емкостью 50 мл отбирают пипеткой из центрифужных пробирок по 0,5 мл экстракта, прибавляют 2 — 3 мл ацетона и отдувают воздухом воду и ацетон при нагревании на водяной бане. К сухому остатку после охлаждения до комнатной температуры прибавляют 3 мл эфирного раствора диазометана и колбу закрывают пробкой. Колбу периодически встряхивают. Через 15 минут в колбу по каплям добавляют муравьиную кислоту для нейтрализации избытка диазометана (до обесцвечивания желтой окраски). В хроматограф вводят 3 мкл раствора.
2.5.2 Условия хроматографирования
Колонка стеклянная 1 м x 3 мм, заполнена хроматоном N-AW 0,100 — 0,125 мм с 15% карбовакса 20 М. Температура термостата колонок 150 °C, испарителя 160 °C. Расход газа-носителя 40 мл/мин (азот), воздуха 300 мл/мин, водорода 20 мл/мин. Время удерживания метилэтилфосфита — 3,8 мин.
2.6. Обработка результатов
Содержание фосэтилалюминия в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:
H = \frac{H_{\text{х}} \cdot \text{С}_{\text{ст}} \cdot \text{У}_{\text{ст}} \cdot \text{У}_{\text{к}} \cdot \text{У}_{\text{н}}}{\text{Н}_{\text{ст}} \cdot \text{У}_{\text{х}} \cdot a \cdot A \cdot \text{У}_{a}} ,
где H_{\text{х}} — высота пика рабочей пробы, мм,
\text{Н}_{\text{ст}} — высота пика стандарта, мм;
\text{С}_{\text{ст}} — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
\text{У}_{\text{ст}} — объем стандартного раствора, вводимого в испаритель, мкг;
\text{У}_{\text{х}} — объем экстракта, вводимого в испаритель, мкг;
\text{У}_{\text{к}} — конечный объем метилированного экстракта, мл;
\text{У}_{a} — объем экстракта, взятого для метилирования;
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Соблюдать требования техники безопасности, принятые для работы с пестицидами, ЛВЖ и взрывоопасными веществами.