Методические указания по определению фенпиклонила в зерне, почве и воде методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6175-91)
Утверждено Министерством здравоохранения СССР 29 июля 1991 г. № 6175-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНПИКЛОНИЛА В ЗЕРНЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Разработчики: Скурьят А.Ф., Бунякина Е.М., Кивачицкая М.М., Карченя Г.К., БелНИИЗР, г. Минск.
Фенпиклонил, 4-(2,3-Дихлорфенил)-1H-пиррол-3-карбонитрил (ИЮПАК).
Бесцветные кристаллы, температура плавления 152,9 °C. Растворимость г/100 мл: ацетон — 36, метанол — 8,3, изопропанол — 7,7, октанол — 3,6, метиленхлорид — 2,5, Н-гексан — 0,004, вода — 0,0002.
Летучесть при 20 °C 4,1·10-5 мг/м3. Давление паров при 20 °C — 3,2·10-9, при 30 °C — 1,6·10-8, при 40 °C 7,3·10-8 мм рт. ст.
Берет — протравитель семян пшеницы и ячменя для борьбы с твердой и каменной головней и снежной плесенью. Применяется при норме расхода 1 — 2 кг/т.
Фенпиклонил обладает средней токсичностью. ЛД50 для крыс и мышей 5000 — 3000 мг/кг.
2.1 Основные положения.
2.1.1 Принцип метода.
Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на пластинках «Силуфол», последующим определением газожидкостной хроматографией с термоионным детектором.
2.1.2 Избирательность метода.
Другие препараты по сфере применения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций 0,0005 — 0,01 мкг.
Нижний предел детектирования — 0,0005 мкг.
Чувствительность определения: зерно — 0,02 мг/кг, почва — 0,01 мг/кг, вода — 0,008 мг/л.
Среднее значение определения %: зерно — 74,2, почва — 82,1, вода — 92,3.
Размах варьирования: зерно — 70,0 — 90,0%, почва — 72,0 — 95,0%, вода — 90 — 98%.
Стандартное отклонение: зерно +/- 2,67%, почва +/- 2,84%, вода +/- 3,95%.
Доверительный интервал среднего при n = 5, p = 0,95: зерно — 74,2 +/- 5,6; почва — 82,1 +/- 6,7; вода — 92,3 +/- 7,5.
2.2 Реактивы и растворы.
Этиловый спирт, х.ч., ТУ 6-09-7710-77.
Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.
Этилацетат, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
2.3 Приборы и посуда.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 64-1-8-77.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1087-73.
Микрошприц МШ № 10, ТУ Е-2.833.0.24.
Микропипетки, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические со шлифом на 250, 500 и 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.
Воронки конические, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Грушевидные колбы емкостью 50 мл.
Камера для хроматографирования.
Пластины «Силуфол» — UV-254 (ЧССР).
Стеклянная макрокапиллярная колонка с фазой Е-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.
2.4 Отбор, хранение и подготовка проб.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1970 г. за № 2051-79.
2.5 Подготовка к определению.
2.5.1 Приготовление стандартного раствора.
Стандартный раствор берета в ацетоне (50 мкг/мл).
2.6 Описание определения.
2.6.1 Экстракция и очистка экстрактов.
2.6.1.1. Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку с притертой пробкой, заливают 150 мл этилацетата и встряхивают в течение 3 — 5 мин. Экстракт фильтруют через плотный фильтр и безводный сернокислый натрий. Затем повторно экстрагируют 50 мл этилацетата в течение 3 мин. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе (t 69 °C) до объема 0,2 — 0,3 мл (остаток высушивают в токе воздуха). Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и аликвоту вводят в хроматограф.
2.6.1.2. Почва. 100 г почвы экстрагируют 100 — 150 мл этилацетата при встряхивании в течение 1,5 часов. Растворитель фильтруют через фильтр с безводным сернокислым натрием. Экстракцию повторяют еще раз в течение 30 мин. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе (t 60 °C) до объема 0,2 — 0,3 мл и проводят очистку.
2.6.1.3. Зерно. 10 — 20 г измельченного зерна экстрагируют 100 — 150 мл этилацетата при встряхивании в течение 1,5 часов. Далее определение проводится согласно пункту 2.6.1.2.
На пластинку «Силуфол» UV-254, предварительно разогнанную в камере с ацетоном, в виде полосы наносят сконцентрированный экстракт, рядом наносят пятно стандартного раствора. Пластину хроматографируют в смеси бензол:этанол (11:1). Если грязь находится близко от места нанесения полосы пробы, то пластину тщательно вентилируют, затем хроматографируют повторно в той же смеси. Нельзя допускать перегрузки стартовой полосы. В случае, если экстракт сильно насыщенный, его необходимо нанести на несколько пластин.
Под УФ-светом отмечают место расположения стандартного пятна и на том же уровне Rf, с некоторым запасом, отмечают зону пробы. Полосу с зоной пробы вырезают, измельчают ножницами и помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 100 мл ацетона и встряхивают в течение 1 часа. Раствор фильтруют через фильтр, предварительно промытый ацетоном. Экстракцию повторяют еще 2 раза с 50 мл ацетона в течение 30 минут. Объединенный экстракт упаривают, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и аликвоту вводят в хроматограф.
2.6.2 Условия хроматографирования.
Определение проводят на хроматографе «Цвет-106» с термоионным детектором. Используют макрокапиллярную колонку с фазой E-301, толщина пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м. Температура испарителя — 270 °C, температура колонки — 250 °C. Расход газа через колонку — 30 мл/мин. Время удерживания — 2 мин. 45 сек. Рабочая шкала электрометра — 5·10-10 А. Скорость движения ленты самописца — 600 мм/час. При работе на хроматографе «Цвет-106» с ДПР-1, используют колонку с фазой OV-210, на хроматоне N-AW-DMCS, диаметром 3 мм, длиной 1,5 м. Температурные режимы: испарителя — 270 °C, колонки — 250 °C, детектора — 270 °C. Время удерживания — 3 мин. 35 сек.
2.6.3 Обработка результатов анализа.
Для количественного определения фенпиклонила измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе рассчитывают по формуле:
\text{Х } = \frac{\text{М}_{\text{ст}} \cdot \text{Н}_{\text{пр}} \cdot V_{\text{к}} \cdot V_{\text{ст}}}{\text{Н}_{\text{ст}} \cdot V_{\text{х}} \cdot \text{М}}
где: X — содержание фенпиклонила в пробе, мг/кг или мг/л;
Mст — содержание берета в стандартном растворе, мкг;
Hст — высота пика стандартного раствора, мм;
Vк — объем конечного экстракта, мл;
Vст — объем стандартного раствора берета, введенный в хроматограф, мкл;
Vх — объем экстракта пробы, введенный в хроматограф, мкл;
3. Требования техники безопасности.
При анализе необходимо соблюдать требования техники безопасности, рекомендованные для работ с органическими растворителями, кислотами и сжатыми газами.