Временные методические указания по определению тифенсульфурон-метила в растительном материале, зерне, воде, почве хроматографическими методами
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6092-91)
29 июля 1991 г. № 6092-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТИФЕНСУЛЬФУРОН-МЕТИЛА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ЗЕРНЕ, ВОДЕ, ПОЧВЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Тифенсульфурон-метил-метил 3-[[[[4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил) амино] карбонил] сульфонил]-2-тиофенкарбоксилат.
Белое, твердое вещество. Температура плавления 186 °C, степень чистоты 95%. Растворимость в ацетонитриле при 25 °C 7,3 мг/мл, в этилацетате при 25 °C 2,6 мг/мл, в воде при pH 6,0 — 2400 мг/мл.
\text{ЛД}_{50} для крыс 5000 мг/кг.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХАРМОНИ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы раствором гидрокарбоната натрия, очистке экстрактов реэкстракцией хлороформом и количественном определении хроматографическими методами (ГЖХ, ТСХ).
2.1.2 Метрологическая характеристика метода (табл. 1)
Диапазон определяемых концентраций 0,01 — 0,5 мг/кг (мг/л).
2.1.3 Определению не мешают наполнители технического препарата
2.2. Реактивы и растворы
Тифенсульфурон-метил, аналит. стандарт, фирма Дюпон.
Соляная кислота, х., ГОСТ 3118-77, 0,1 н водный раствор.
Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 4201-79, 0,1 М водный раствор.
Стандартный раствор хармони, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Хранят в холодильнике не более 6 месяцев.
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30.
Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76.
Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-77.
Едкое кали, ч., ГОСТ 9285-78.
Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.
В реакционную колбу на 500 мл помещают 6 г едкого кали, 3 мл гидразингидрата, 3 мл метанола. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 кап. за 1 — 2 с. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, конец которого снабжен газоотводной трубкой, которая погружена в слой эфира на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.
Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.
После окончания насыщения диэтилового эфира диазометаном (желтый цвет раствора), прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.
Нитрат серебра, ч., ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий, ч., ТУ 6-09-3719-83.
Лимонная кислота, ос.ч., ТУ 6-09-584-75, 2% раствор.
Пластинки «Силуфол» (Хемапол, ЧССР).
Проявляющий реактив: Раствор А: 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 20 мл дистиллированной воды и прибавляют 60 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф, снабженный ДПР (Цвет, Газохром или др.).
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-77.
Колбы конические на шлифе емкостью 250 — 500 мл, ГОСТ 10394-74.
Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.
Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки, ГОСТ 23336-82.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1081-73.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.
Прибор для получения диазометана:
- колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
- холодильник Либиха на шлифах;
- делительная воронка на шлифе (капельница);
- П-образный переходник на шлифах;
Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.
2.4. Отбор проб
2.4.1. Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за № 2051-79.
Хранят пробы в морозильной камере (-14 — 20 °C).
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов
50 г зерна (50 г воздушно-сухой почвы, 10 г измельченной зеленой массы) помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, приливают 50 мл 0,1 М раствора натрия углекислого, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Отделяют раствор. Колбу и фильтр дважды промывают 20 мл раствора натрия углекислого. Объединяют экстракты, доводят pH до 3,5 с помощью соляной кислоты и реэкстрагируют препарат хлороформом (3 x 50 мл). Объединенные экстракты выпаривают при температуре не более 35 °C до 0,3 — 0,5 мл.
2.5.2 Определение методом ГЖХ
Удаляют остаток растворителя на воздухе. К сухому остатку приливают небольшими порциями раствор диазометана в диэтиловом эфире до прекращения обесцвечивания. Затем взбалтывают и выпаривают на воздухе досуха. Растворяют сухой остаток в 1 мл гексана. Хроматографируют по 5 мкл пробы. Одновременно с пробой готовят и метилируют диазометаном контрольную пробу и стандартные растворы хармони с концентрацией 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл.
Колонка стеклянная, длина 3 м, d = 3 мм.
Носитель — Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм).
Температура: испарителя — 230 °C, детектора — 230 °C, колонки — 170 °C.
Скорость газа-носителя — 32 мл/мин (через колонку) - 100 мл/мин (на продувку).
Минимально детектируемое количество 3 нг.
Содержание хармони в пробе рассчитывают по формуле:
X = \frac{C_{\text{ст}} \cdot V_{1} \cdot H_{2} \cdot V_{3}}{V_{2} \cdot H_{1} \cdot M} , где
X — количество препарата в пробе, мг/кг, мг/л;
C_{\text{ст}} — содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
V_{1} — объем стандарта, введенного в колонку газового хроматографа, мкл;
V_{2} — объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового хроматографа, мкл;
V_{3} — общий объем анализируемой пробы, мл;
H_{1} — высота пика стандарта, мм;
H_{2} — высота пика анализируемой пробы, мм;
2.5.3 Определение методом ТСХ
Пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием хармони (2, 5, 7 и 10 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования и хроматографируют. Хроматограмму развивают в смеси ацетона с гексаном (1:1). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу и дают возможность испариться растворителям, после чего обрабатывают пластинку из пульверизатора вначале раствором бромфенолового синего, затем раствором лимонной кислоты. Хармони проявляется на пластинках в виде синих пятен на желтом фоне с R_{f} 0,5 +/- 0,03.
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.
Содержание хармони в анализируемой пробе X мг/кг:
A — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
3. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.