Временные методические указания по определению оксима дикамбы в воде, почве, зеленой массе и зерне зерновых культур методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6091-91)
29 июля 1991 г. № 6091-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОКСИМА ДИКАМБЫ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Химическое название: N-циклогексанон-0-(2-метокси-3,6-дихлорбензоил) оксим. Один из компонентов смесевого препарата чистолан, НИТИГ, Башкирия.
Эмпирическая формула: C_{14}H_{15}NO_{3}Cl_{2} .
Физико-химические свойства: белое кристаллическое вещество, Т. пл. 56 — 60 °C. Растворим в хлороформе, ацетоне, этилацетате, циклогексаноне, бензоле, четыреххлористом углероде, гексане. Практически нерастворим в воде. При температуре выше 155 °C автокаталитически разлагается.
Применяется в качестве гербицида в посевах зерновых культур.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИМА ДИКАМБЫ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции пестицида из воды гексаном, из почвы ацетоном, из зеленой массы и зерна ацетонитрилом, очистке экстрактов и хроматографическом определении в тонком слое силикагеля при обнаружении зон локализации обработкой 0,5%-ным спиртовым раствором дифениламина и экспозиции в УФ-свете.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
2.1.3 Избирательность метода
Метод селективен. Определению не мешают хлорорганические пестициды, симмтриазины.
2.2. Реактивы и растворы
Оксим дикамбы с содержанием основного вещества не менее 96%.
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74.
Спирт этиловый технический ректификованный, ГОСТ 18300-87. Хлороформ, ч.д.а., ГОСТ 20015-74.
Алюминия оксид нейтральный для хроматографии Л 40/250 производства ЧСФР.
Силикагель для хроматографии ЛС 5/40 с 13% гипса, производства фирмы «Хемапол» (ЧСФР).
Дифениламин, ч.д.а., ГОСТ 5825-70.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Пластинки «Силуфол» размером 150 x 150 мм производства фирмы «Хемапол».
Стандартный раствор № 1 оксима дикамбы с концентрацией 1000 мкг/мл готовят в мерной колбе вместимостью 100 мл растворением навески 0,1000 г в гексане.
Стандартные растворы NN 2 — 7 оксима дикамбы с концентрациями 5; 10; 25; 50; 100; 150 мкг/мл готовят в мерных колбах вместимостью 100 мл разбавлением 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10,0 и 15,0 мл стандартного раствора № 1 гексаном.
Стандартные растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив — 0,5%-ный спиртовой раствор дифениламина. Раствор устойчив длительное время.
2.3. Приборы и посуда
Весы лабораторные аналитические, ГОСТ 24101-80.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25211-917-74.
Монохроматор КФ-4 или аналогичный источник УФ-света.
Штатив лабораторный, ТУ 64-1-707-76.
Воронки делительные, ГОСТ 10054-82, вместимостью 250 и 500 мл.
Воронки химические конусообразные, ГОСТ 25336-82Е.
Камера хроматографическая стеклянная типа СП-4,0 или СЦ-4,0 ГОСТ 25336-82Е.
Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.
Колонка хроматографическая стеклянная размером 30 x 0,8 см.
Колбы конические на шлифах, ГОСТ 25336-83Е, вместимостью 250 мл.
Колбы грушевидные для отгонки растворителя на шлифах, ГОСТ 25336-82Е, вместимостью 100 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74Е, вместимостью 100 мл.
Мельница лабораторная (кофемолка).
Пипетки различной вместимости с ценой деления 0,01 и 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Цилиндры различной вместимости, ГОСТ 1770-74Е.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Приготовление подвижной фазы
В хроматографической камере за 30 мин до хроматографирования смешивают гексан с хлороформом в объемном соотношении 1:1 в таком количестве, чтобы высота слоя растворителей не превышала 0,5 см.
2.4.2 Подготовка хроматографической колонки
Стеклянную колонку размером 30 x 0,8 см заполняют оксидом алюминия на высоту 2 см (низ) и силикагелем на высоту 2 см (верх) при уплотнении сорбента легким постукиванием по колонке.
2.4.3 Приготовление стандартной шкалы
На хроматографической пластинке «Силуфол» на расстоянии 15 см от нижнего края намечают линию старта. Справа и слева от центра на расстоянии 15 мм друг от друга наносят серию стандартных пятен — по 0,2 мл стандартных растворов NN 2 — 7. Диаметр пятен не должен превышать 10 мм. Содержание оксима дикамбы в пятнах стандартной шкалы соответствует 1; 2; 5; 10; 20 и 30 мкг.
2.5. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.1979 г. № 2051-79.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Экстракция и очистка экстрактов
Вода. Пробу воды объемом 20 — 200 мл приливают в делительную воронку и препарат экстрагируют тремя порциями гексана по 50 мл. Гексановые экстракты последовательно пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г), помещенный на бумажный фильтр в конусообразную воронку. Фильтрат концентрируют с помощью ротационного испарителя при температуре бани не выше 40 °C до объема 0,5 — 1 мл, а затем в слабом токе воздуха до 1 — 2 капель. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
Почва. 30 — 50 г воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой и препарат экстрагируют дважды ацетоном порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз по 30 мин. Почву отфильтровывают под вакуумом. Объединенный фильтрат концентрируют до 5 — 7 мл, разбавляют 25 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают в течение 2 — 3 мин. Выпавшие хлопья отфильтровывают через бумажный фильтр, помещенный в коническую воронку. Фильтр промывают смесью ацетона (1 мл) и воды (5 мл). Оксим дикамбы дважды экстрагируют из фильтрата гексаном порциями по 50 мл. Гексановый экстракт пропускают через безводный сернокислый натрий (50 г), концентрируют с помощью ротационного испарителя до 0,5 — 1 мл, а затем в слабом токе воздуха до 1 — 2 капель. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
Зеленая масса и зерно. 30 — 100 г измельченной на кофемолке пробы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 80 мл смеси ацетонитрила и дистиллированной воды (10:1), встряхивают в течение 30 мин и фильтруют под вакуумом. Пробу на фильтре тщательно отжимают и промывают 30 мл той же смеси. Фильтрат переливают в делительную воронку и экстрагируют гексаном порциями по 10 мл до тех пор, пока гексановый экстракт не станет бесцветным (5 — 7 экстракций). Гексановые вытяжки отбрасывают. Ацетонитрильный слой разбавляют 110 мл хлороформа и осушают пропусканием через безводный сернокислый натрий (50 г), образец концентрируют с помощью ротационного испарителя при температуре бани не выше 40 °C до 0,5 — 1 мл, а затем — в слабом токе воздуха до 1 — 2 капель. Остаток с помощью гексана количественно переносят в колонку с сорбентом и коэкстрактивные вещества элюируют под вакуумом 50 мл гексана со скоростью 40 — 80 капель в мин, оксим дикамбы собирают в другой приемник при элюировании 20 мл смеси гексана:ацетон (50:1). Элюат, содержащий препарат, осторожно концентрируют при указанных выше условиях. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
2.6.2 Хроматографирование
Раствор исследуемой пробы в гексане с помощью стеклянного капилляра наносят в центр линии старта хроматографической пластинки, на которую нанесена стандартная шкала. Пластинку помещают в наклонном положении в хроматографическую камеру с подвижной фазой, элюируют на высоту поднятия фронта растворителя 10 см, после чего пластинку вынимают из камеры и подсушивают на воздухе в вытяжном шкафу.
Пластинку обрабатывают из пульверизатора проявляющим реактивом и, не подсушивая, помещают под источник УФ-света на 5 — 10 мин. Оксим дикамбы проявляется в виде фиолетовых пятен на светлом фоне с R_{f} 0,23 +/- 0,02.
2.7. Обработка результатов анализа
Количественное определение оксима декамбы проводят путем измерения площадей пятен пробы и соответствующего ему по интенсивности окраски стандартного пятна с помощью прозрачной миллиметровой бумаги.
Содержание оксима дикамбы в пробе (X) в мг/кг (мг/л) вычисляют по формуле:
X = \frac{A \cdot S_{\text{пр}}}{S_{\text{ст}} \cdot P} ,
S_{\text{пр}} , S_{\text{ст}} — площади пятен пробы и стандарта соответственно, мм2;
P — навеска или объем анализируемой пробы, г (мл).
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Соблюдать все необходимые требования техники безопасности при работе в химических лабораториях, правила производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава СССР (N 2455-81 от 20.10.81 г.).