Методические указания по определению виджила в растительном материале, почве и воде методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5050-89)

8 июня 1989 г. № 5050-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИДЖИЛА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Т.М. Петровой, Т.Ф. Блиновой (ВИЗР); Д.Б. Гиренко (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая  характеристика  препарата.   Виджил - 1-(2,4-дихлорфенил)-4,4-
диметил-2-(1,2,4-триазол-1-ил)-пентан-3-ол.  Брутто-формула   C  H  Cl N O.
                                                               15 19  2 3
Молекулярная   масса   328,3.    Общепринятое  название  -  дихлорбутразол.
Дихлорбутразол   -   белое   твердое   вещество.    Температура   плавления
140 - 143 °C.  Растворимость в воде 9 мг/кг, в метиловом, этиловом спиртах,
в  ацетоне  и  хлороформе  растворяется  до  5%.  Малорастворим  в ксилоле,

диметилформамиде.

Принцип метода. Метод основан на определении виджила методами ГЖХ и ТСХ

после извлечения его из анализируемой пробы органическим растворителем:  из
воды - хлороформом;  растений  -  50-процентным  водным  ацетоном;  почвы -
смесью ацетона с 0,05 н   CaCl  (1:1) и дальнейшем  перераспределении между

                          2

двумя несмешивающимися растворителями.

Метрологическая характеристика методов. Газожидкостная хроматография. Минимально детектируемое количество 0,05 нг; нижний предел определения 0,05 нг/кг; среднее значение определения 78,1 +/- 8,2%; доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 +/- 9,84%. Тонкослойная хроматография. Минимально детектируемое количество 2 мкг; нижний предел определения 0,1 — 0,5 мг/кг; среднее значение определения 70 +/- 10%; доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 +/- 12%.

Избирательность метода. Определению мешают препараты из группы триазолов.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Хлороформ х.ч. Хлорид кальция ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Хлорид натрия ч.д.а. Неподвижные жидкие фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS; 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (фракция 0,125 — 0,160 мм). Основной раствор виджила. Готовят на ацетоне в 1 мг/мл, из него готовят рабочий раствор. Берут 1 мл раствора, доводят до 100 мл гексаном — 0,01 мг/мл. Бромфеноловый синий ч. Лимонная кислота, 2-процентный раствор. Нитрат серебра ч. Пластинки «Силуфол». Подвижная фаза ацетон-хлороформ (1:9). Проявляющий реагент: раствор а — 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона; раствор б — 500 мг нитрата серебра растворяют в 20 мл воды и прибавляют 60 мл ацетона. Растворы а и б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим пластинку обесцвечивают 2-процентным раствором лимонной или уксусной кислоты. Стандартный раствор виджила, содержащий 100 мкг/мл, готовят, растворяя 10 мг препарата в мерной колбе на 100 мл ацетоном (гексаном). Хранят в холодильнике не более 2 мес.

Посуда и приборы. Колбы: конические со шлифами; круглодонные. Воронки: делительные; химические. Аппарат для встряхивания. Микрошприцы на 10 мкл. Секундомер. Хроматографические стеклянные колонки (1 м x 3 мм). Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. Ротационный вакуумный испаритель ИР.

Ход анализа методом ГЖХ. Подготовка газохроматографической колонки. Стеклянную колонку, промытую органическими растворителями, заполняют с помощью вакуумного насоса сорбентом с нанесенной на него фазой. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч. Скорость потока азота 30 — 40 мл/мин.

Экстракция и очистка экстракта. Навеску измельченной зеленой массы, соломы и зерна пшеницы (20 г) заливают 100 мл 50-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч, колбы оставляют на ночь для лучшей экстракции. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Колбу ополаскивают дважды по 30 мл 50-процентного водного ацетона. Объединенные фильтраты помещают в делительную воронку, добавляют 50 мл дистиллированной воды и 1 — 3 г хлорида натрия. Очистку пробы проводят экстракцией виджила в н-гексан. Для этого в колбу приливают 25 — 30 мл н-гексана, встряхивают, гексановую фракцию отделяют. Операцию повторяют еще 2 раза. Гексановые фракции фильтруют через безводный сульфат натрия в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40 °C до 10 мл. Аликвоту в количестве 1 — 3 мкл вводят в хроматограф.

Навеску почвы (25 г) заливают 50 мл смеси ацетона с 0,05 н CaCl 2 (1:1), встряхивают в течение 1 ч (колбы можно оставить на ночь для лучшей экстракции). Далее анализируют так, как описано выше для растительных проб.

Пробу воды (0,5 л) помещают в делительную воронку вместимостью 1,5 л. Добавляют 5 — 7 г хлорида натрия и 50 мл хлороформа. Воронку встряхивают в течение 15 мин. После разделения слоев хлороформную фракцию сливают в колбу на 200 мл и процедуру повторяют еще 2 раза. Объединенные хлороформные фракции сушат безводным сульфатом натрия путем фильтрования или настаивания экстракта с 10 — 12 г соли. Экстракт концентрируют в круглодонной колбе на 50 мл небольшими порциями до объема 1 — 2 мл. Остаток хлороформа удаляют струей воздуха. К сухому остатку добавляют 0,5 мл ацетона и доводят объем до 5 — 10 мл ацетоном. Аликвоту 1 — 3 мкл вводят и хроматограф.

    Условия  хроматографирования.  Хроматограф  с  ДЭЗ  или  ДПР.   Колонка
стеклянная  (1 м x 3 мм),  заполненная 5%  SE-30 или 5%  XE-60 на хроматоне
N-AW-DMCS  (0,125 - 0,160 мм).  Температура колонки, детектора и испарителя
при  работе  на  5%  XE-60-210, 220, 270 °C;  при работе на 5% SE-30 - 230,
240,  270  °C   соответственно.   Скорость  потока  газа-носителя   (азота)

                                         -12

20 — 25 мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10 А. В указанных условиях хроматографирования время удерживания виджила на 5% SE-30 — 2 мин. 60 с, на 5% XE-60 — 3 мин. 30 с.

Обработка результатов анализа. Содержание виджила в пробе определяют путем сравнения пиков стандарта и анализируемых проб. Количество виджила (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                                H CV
                                 2

X = -----, H V P 1 1

где:

C — количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, нг;

    H , H  - высоты пиков соответственно стандарта и пробы, мм;
     1   2

V — объем анализируемой пробы, мл;

V — объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл; 1

P — масса пробы, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», то готовят более разбавленные растворы. Это учитывают при расчете.

Ход анализа методом ТСХ. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют препарат хлороформом порциями по 30 мл. Органический слой объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 — 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сконцентрированную пробу наносят на хроматографическую пластинку.

Пробу зерна, яблок, ягод (25 г) помещают в коническую колбу, приливают 40 мл смеси ацетон-вода (7:3), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, приливают 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают. Из водного раствора препарат дважды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C до объема 0,3 — 0,5 мл и наносят на хроматографическую пластинку.

Идентификация и количественное определение виджила. Пробу, сконцентрированную до объема 0,3 — 0,5 мл, количественно наносят при помощи

капиллярной  пипетки  на  хроматографическую  пластинку так,  чтобы диаметр
пятна  не  превышал 1 см.  Центр  пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от
нижнего  края  пластинки.  Колбу с экстрактом  2 - 3 раза  смывают порциями
хлороформа,  который  также  наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы
наносят  серию  стандартных растворов препаратов,  содержащих 2; 5 и 10 мкг
препарата.  Пластинку  хроматографируют  в  системе хлороформ-ацетон (9:1).
После  хроматографирования  пластинку  высушивают  на  воздухе,  после чего
обрабатывают  из  пульверизатора проявляющим бромфеноловым реагентом. После
высушивания  пластинку  обесцвечивают  раствором  лимонной кислоты.  Виджил
проявляется в виде пятна ярко-голубого цвета. Величина R  0,5 +/- 0,05.

                                                    f

Содержание виджила (X, мг/кг или мг/л) в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

                                  A

X = -, P

где:

A — количество препарата, найденное на хроматограмме, при сравнении со стандартом, мкг;

---