Методические указания по определению ниссорана в воде, почве, растительном материале (зеленая масса и плоды винограда, яблоки) методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5039-89)
8 июня 1989 г. № 5039-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИССОРАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ (ЗЕЛЕНАЯ МАССА И ПЛОДЫ ВИНОГРАДА, ЯБЛОКИ) МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Т.М. Петровой, О.К. Остроуховой (ВИЗР); Н.В. Бажановой, Ж.А. Арутюнян, М.Г. Алтунян (АрмНИИЗР).
Краткая характеристика препарата. Ниссоран - инсектицид. Действующее вещество - транс-5-[4-хлорфенил]-N-циклогексил-4-метил-2-оксотиазолидин-3- карбоксамид. Брутто-формула C H ClN O S . Молекулярная масса 352,9. 17 2 2 2 2 Общепринятое название - гексатиазокс. Химически чистое вещество - белый
порошок. Т. пл. 105,5 °C. Растворимость в воде при pH 5,9 — 1 мг/мл. Период полураспада в водном растворе при 22 °C и pH 5 — 7 составляет 7000 ч; при pH 9 — 12 — 12000 ч. Растворяется в большинстве органических растворителей. Ниссоран относится к группе препаратов средней токсичности для теплокровных животных. Применяют в борьбе с клещами на плодовых, цитрусовых насаждениях и на виноградниках.
Принцип метода. Метод основан на экстракции ниссорана из проб органическим растворителем, очистке переэкстракцией и количественном определении методами ТСХ или ГЖХ с ДЭЗ или ДПР.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 129.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (p = 0,95, n = 5)
| Анализируемый объект | Минимально детектируемое количество, мкг | Нижний предел определения, мг/л или мг/кг | Среднее значение определения, % |
| Тонкослойная хроматография | |||
| Вода | 1 | 0,02 | 93,0 +/- 1,8 |
| Почва | 10 | 0,1 | 77,0 +/- 3,7 |
| Яблоки | 5 | 0,2 | 78,0 +/- 3,0 |
| Виноград | 3 | 0,1 | 82,0 +/- 2,2 |
| Газожидкостная хроматография | |||
| Вода | 0,0005 | 94,0 +/- 2,0 | |
| Почва | 0,02 | 76,0 +/- 3,2 | |
| Яблоки | 0,02 | 76,0 +/- 3,6 | |
Избирательность метода. Избирательность метода ГЖХ обеспечивается сочетанием селективных детекторов и неподвижных фаз различной полярности, а ТСХ — выбором систем хроматографирования и проявляющих реагентов. В предлагаемых условиях хроматографирования другие пестициды определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Ацетонитрил ч. н-Гексан х.ч. Двухромовокислый калий х.ч. Йодид калия ч. Марганцовокислый калий х.ч. Сульфат кальция двухводный ч.д.а. (в течение 1 - 2 сут. прокаливают при температуре 180 °C и просеивают через сито размером 100 меш, хранят в склянке с притертой крышкой). Хлорид кальция ч. Крахмал растворимый ч. Едкий натр ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. (предварительно прокаливают до 300 - 400 °C). Хлорид натрия ч.д.а. Петролейный эфир (40 - 70 °C) свежеперегнанный. Хроматографические пластинки "Силуфол" УФ . Серная
254
кислота ч.д.а. Силикатный сорбент КМК-20. Силикагель марки КСК. Хлороводородная кислота особой чистоты. Хлороформ х.ч. Этиловый спирт ректиф. Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,160 - 0,200 мм). Газ-носитель - азот особой чистоты. Стандартный раствор ниссорана в н-гексане - 5 мкг/мл (ГЖХ), 200 мкг/мл (ТСХ). Растворы стабильны в течение 3 мес. при хранении в холодильнике. Проявляющий реагент: 50 мл 1-процентного раствора йодида калия смешивают с 50 мл 3-процентного свежеприготовленного растворимого крахмала и 20 мл
этилового спирта. Готовят перед употреблением.
Приборы, аппаратура и посуда. Аппарат для встряхивания колб. Ротационный вакуумный испаритель. Вата гигроскопическая. Весы аналитические. Весы равноплечие ручные. Воронки делительные; химические. Газовый хроматограф с ДЭЗ или ДПР. Камера для хроматографирования. Колбы мерные и конические со шлифами. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Микрошприц на 10 мкл. Пипетки на 1 и 10 мл. Пульверизатор стеклянный для обработки хроматограмм. Сушильный шкаф. Холодильник бытовой. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Хроматографическая стеклянная колонка длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.
Подготовка к определению. Приготовление пластинок для ТСХ. Стеклянные пластинки перед нанесением на них сорбента тщательно моют сначала в хромовой смеси, затем промывают водой до нейтральной реакции. Далее их протирают спиртом и высушивают на воздухе. Нанесение сорбента КМК-20: для приготовления одной пластинки (9 x 12 см) берут 0,7 г сорбента КМК-20, прибавляют 5 мл воды и 10% от массы сорбента гипса. Готовят их сразу в количестве 10 — 20. Смесь тщательно растирают и однородную массу наносят на пластинку легким покачиванием для растекания по всей поверхности. Сушат пластинки в течение 24 ч на воздухе. Хранят в эксикаторе над хлоридом кальция. Сорбент КМК-20 можно наносить на пластинку и без закрепляющей основы — гипса. Нанесение силикагеля: 30 г силикагеля, 5 г гипса и 100 мл воды тщательно размешивают и наносят на пластинку так, как описано выше.
Подготовка хроматографической колонки (ГЖХ). Стеклянную колонку промывают смесью органических растворителей ацетон — этиловый спирт — петролейный эфир (1:1:1). Для этого смесь заливают на 1 ч в колонку, а затем промывают 300 мл ацетона. Колонку сушат в токе азота и заполняют сорбентом с нанесенной на него фазой с помощью вакуумного насоса. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч. Скорость потока азота 30 — 40 мл/мин.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Навеску листьев (25 г) измельчают, а яблоки и плоды винограда гомогенизируют, заливают 150 — 200 мл 75-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч и оставляют на ночь. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток промывают дважды по 30 мл 75-процентным водным ацетоном. Фильтраты объединяют, помещают их в делительную воронку, добавляют 70 — 90 мл дистиллированной воды и 1 — 3 г хлорида натрия. Очистку проводят переэкстракцией ниссорана в н-гексан тремя порциями по 25 — 30 мл. Гексановые фракции отделяют, осушают путем фильтрования через безводный сульфат натрия, переносят в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40 °C до 1 — 5 мл (ГЖХ) или до 0,1 — 0,3 мл (ТСХ).
Навеску почвы (25 г) заливают 70 мл смеси ацетон — 0,05 н CaCl (1:1), 2
встряхивают 1 ч и оставляют на ночь. Далее анализ ведут так, как описано для растительных проб, но остаток промывают смесью ацетона и раствора
хлорида кальция.
К 200 мл анализируемой пробы воды прибавляют 25 — 30 мл петролейного эфира, закрывают колбу стеклянной притертой пробкой и встряхивают на аппарате 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Слои с петролейным эфиром отделяют, высушивают фильтрованием через слой безводного сульфата натрия. Объединенные экстракты концентрируют на ротационном испарителе при температуре 40 °C до 1 — 5 мл (ГЖХ) или до 0,1 — 0,3 мл (ТСХ).
Условия хроматографирования. Условия определения методом ТСХ: На стартовую линию пластинки микропипеткой количественно наносят пробу, рядом с пробой - стандартные растворы ниссорана - 5 и 10 мкг. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до этого наливают подвижный растворитель: для силикагелевых пластинок используют гексан - ацетон (4:1), а для пластинок с КМК-20 - гексан - ацетон (9:1). После хроматографирования пластинку высушивают на воздухе, помещают в камеру с газообразным хлором на 10 мин., который получают, смешивая равные объемы 1,5-процентного раствора калия марганцовокислого и 10-процентного раствора хлороводородной кислоты. После этого пластинку оставляют на воздухе до полного исчезновения запаха хлора. Затем пластинку опрыскивают проявляющим реагентом. Ниссоран проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на сероватом фоне пластинки. В предлагаемых условиях хроматографирования R ниссорана на
f
пластинках силикагеля — 0,50, а на КМК-20 — 0,45.
Условия определения методом ГЖХ. Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. При работе с колонкой, заполненной 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 — 0,160 мм). Температура, °C: колонки — 240, испарителя и детектора — 270. Скорость газа-носителя (азота) 35 мл/мин. Время удерживания ниссорана в этих условиях 2 мин. 7 с. Минимально детектируемое количество 0,5 нг. Диапазон линейности 0,5 — 10,0 нг. При работе с колонкой, заполненной 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,160 — 0,200 мм). Температура, °C: колонки — 250, испарителя и детектора — 270. Скорость газа-носителя 40 мл/мин. В этих условиях время удерживания составляет 3 мин. 25 с. Минимально детектируемое количество 0,4 нг. Диапазон линейности 0,5 — 15,0 нг.
Обработка результатов анализа. Метод ТСХ. Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и проб. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией соблюдается в пределах 1 — 20 мкг. Концентрацию ниссорана (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:
A
A — количество препарата, найденное в пробе, мкг;
P — навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
Метод ГЖХ. Содержание ниссорана в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) определяют методом соотношения пиков стандарта и проб и рассчитывают по формуле:
H CV
2
где:
C — количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, нг;
H , H - высоты пиков соответственно стандарта и пробы, мм; 1 2 V - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;
1
V — объем анализируемой пробы, мл.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.