Методические указания по определению аланапа в воде, почве и огурцах методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5031-89)
8 июня 1989 г. № 5031-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АЛАНАПА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И ОГУРЦАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны А.А. Красных, Л.Г. Булавиной (ВНИИЗР).
Краткая характеристика препарата. Аланап - N-(нафтил-1)-фталаминовая кислота. Брутто формула C H NO . Молекулярная масса 291,3. Синоним - 18 13 3 нафталам. Химически чистое вещество представляет собой кристаллы с т. пл.
185 °C. Растворимость в воде 200 мг/л при 20 °C, лучше растворим в бензоле, ацетоне, хлороформе и других органических растворителях. Со щелочами дает хорошо растворимые соли. Растворимость натриевой соли при 20 °C — 300 мг/л.
При pH более 9 легко гидролизуется с расщеплением амидной связи. Выпускается в виде водного раствора натриевой соли. Применяют в качестве предвсходового гербицида для борьбы с однолетними и двудольными сорняками на огурцах, дыне, картофеле и некоторых других культурах. Препарат малотоксичен для теплокровных животных, ЛД для крыс 8200 мг/кг.
50
Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися жидкостями с последующим определением тонкослойной хроматографией.
Избирательность метода. Другие гербициды (пирамин, базагран, производные сульфанилмочевины) определению не мешают.
Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,5 — 10 мкг аланапа в анализируемой пробе. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг или 0,0025 — 0,025 мг/кг (мг/л). Среднее значение определения 79,8 +/- 4,8%. Доверительный интервал среднего (при p — 0,95 и n = 10) +/- 5,7%.
Реактивы и растворы. Хлорид аммония х.ч. Ацетон ч.д.а. и водный раствор ацетона (1:1). н-Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч. Нитрит натрия х.ч. Сульфаниловая кислота х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Хлороформ х.ч. Уксусная кислота ледяная. Ортофосфорная кислота ч. Стандартный раствор аланапа в ацетоне с содержанием препарата 100 мкг/мл. Готовят растворением 10 мкг х.ч. аланапа в мерной колбе на 100 мл. Раствор устойчив в течение 2 мес. при хранении в холодильнике.
Приготовление проявляющего реагента. Раствор а: 0,24 г нитрита натрия растворяют в 100 мл 0,01 н гидроксида натрия. Раствор б: 1 г сульфаниловой кислоты растворяют при нагревании в 100 мл 30-процентной уксусной кислоты. Использовать нужно только прозрачный раствор. За 5 мин. до использования растворы а и б смешивают в соотношении 1:2 по объему. Смешанный реагент со временем медленно желтеет. Если желтый цвет не появляется через 5 мин., значит один из реактивов разложился. Исходные растворы можно хранить в течение 1 мес.
Приготовление коагулирующего раствора. Хлорид аммония (5 г) растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85-процентной ортофосфорной кислоты и доводят объем раствора до 1 л дистиллированной водой.
Приборы и посуда. Пластинки «Силуфол». Ротационный испаритель. Шкаф вытяжной. Шкаф сушильный. Аппарат для встряхивания. Колбы конические с притертыми пробками на 100 и 250 мл. Воронки делительные и конические. Цилиндры мерные на 10; 50 и 100 мл. Пипетки. Микропипетки. Стаканы химические. Камеры хроматографические. Пульверизаторы стеклянные.
Хранение проб. Пробы хранят в холодильнике не дольше 2 недель.
Ход анализа. Экстракция. Пробу анализируемой воды (200 мл) помещают в делительную воронку, подкисляют 2 н раствором хлороводородной кислоты до pH 1. Аланап экстрагируют тремя порциями хлороформа по 50 мл в течение 5 мин. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2 — 0,3 мл при температуре воды в бане около 50 °C. Остаток удаляют в токе воздуха.
Пробу почвы (50 г) помещают в коническую колбу на 250 мл. Аланап экстрагируют 150 мл водного ацетона путем встряхивания в течение 1 ч 30 мин. Экстракт отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр. Колбу и фильтр промывают тремя порциями водного ацетона, объединенный экстракт подкисляют 2 н хлороводородной кислотой до pH 1. Из водно-ацетоновой смеси препарат экстрагируют тремя порциями хлороформа по 50 мл в течение 5 мин. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2 — 0,3 мл при температуре воды в бане около 50 °C. Остаток удаляют в токе воздуха.
Пробу измельченных огурцов (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 80 мл хлороформа, препарат экстрагируют путем энергичного встряхивания в течение 1 ч 30 мин. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр со слоем безводного сульфата натрия (8 — 10 г). Колбу и фильтр промывают двумя порциями хлороформа по 15 мл. Хлороформный экстракт концентрируют до объема 0,2 — 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.
Очистка экстракта. Сухой остаток растворяют в 5 мл охлажденного ацетона и приливают 50 мл охлажденной в холодильнике коагулирующей смеси. Колбу на 50 мин. ставят в морозильную камеру холодильника. После этого водно-ацетоновую смесь фильтруют через плотный бумажный фильтр. Аланап экстрагируют тремя порциями хлороформа по 40 мл. Объединенный экстракт концентрируют под вакуумом до объема 0,2 — 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.
Хроматографирование. Сухой остаток растворяют в небольшом количестве хлороформа или ацетона (0,1 - 0,2 мл) и наносят на пластинку "Силуфол" на расстоянии 2 см от ее нижнего края. Стенки колбы тщательно смывают несколькими каплями растворителя, который наносят в центр пятна. Справа наносят серию стандартных растворов. После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования с системой подвижных растворителей гексан-ацетон (1:1). После подъема фронта подвижного растворителя на 10 см хроматограмму вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и помещают на 5 мин. в сушильный шкаф, предварительно нагретый до 150 °C. После охлаждения пластинку опрыскивают проявляющим реагентом. Аланап проявляется в виде розовых пятен. Величина R аланапа в данных условиях
f
хроматографирования составляет 0,62 +/- 0,03.
Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен проб и стандартных растворов. Содержание препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:
A
A — количество препарата, найденное на хроматограмме путем сравнения со стандартом, мкг;
P — навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. Следует соблюдать правила безопасности, принятые при работе в химических лабораториях.