Методические указания по определению дефолианта хлопчатника бутифоса в хлопковой шелухе методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5027-89)
8 июня 1989 г. № 5027-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕФОЛИАНТА ХЛОПЧАТНИКА БУТИФОСА В ХЛОПКОВОЙ ШЕЛУХЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Р.И. Шейниной, О.И. Панченко, Я.А. Коневой (СредазНИКИпищепром).
Бутифос (ДЕФ) - S,S,S-трибутилтритиофосфат. Брутто-формула C H OPS . Молекулярная масса 314,29. Светло-коричневая жидкость 12 27 3 с неприятным резким запахом, т. кип. 154 °C при 66,66 Па, хорошо растворим в органических растворителях (бензол, спирт, хлороформ, метиловый спирт), летучесть препарата 1 мг/куб. м при 20 °C. Препарат высокотоксичен, ЛД для белых мышей 170 - 250 мг/кг,
50
обладает кумулятивными свойствами. Предельно допустимая концентрация бутифоса в кормах для молочного скота и яйценосной
птицы, а также для откормочных животных и птицы — 3,0 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на экстракции бутифоса из хлопковой шелухи парами органических растворителей, взятых в определенном соотношении, очистке экстракта методом колоночной хроматографии, концентрировании его и последующем хроматографировании в тонком слое силикагеля в системе н-гексан — ацетон (4:1).
Количественно бутифос определяют на хроматограмме, сравнивая интенсивность окраски пятен проб и модельных экстрактов.
Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций бутифоса 0,01 — 10 мкг. Предел обнаружения в хлопковой шелухе 0,1 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств бутифоса 91,8%. Доверительный интервал (p = 0,95 и n = 5) 91,8 +/- 8,8%.
Реактивы и растворы. Бутифос 70-процентный к.э. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности (фракция частиц 0,15 мм). Петролейный эфир (40 — 70 °C). Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Нитрат серебра х.ч. Бромфеноловый синий х.ч. Кислота уксусная х.ч.
Приборы и посуда. Аппарат Нааба. Прибор для отгонки растворителя или ротационный вакуумный испаритель. Пульверизатор стеклянный. Колонки хроматографические длиной 18 см, диаметром 15 мм. Камера для хроматографирования. Набор пипеток и микропипеток. Пластинки для хроматографии «Силуфол». Пробирки мерные на 5 мл. Цилиндры мерные.
Подготовка к определению. Стандартный раствор бутифоса с концентрацией 3 мг/мл готовят, растворяя 0,043 мл 70-процентного к.э. в 10 мл ацетона или н-гексана. Раствор хранят в холодильнике не дольше 1 мес.
Проявляющий реагент. Бромфеноловый синий (0,05 г) растворяют в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором нитрата серебра (к 0,5 г нитрата серебра приливают 75 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном). Раствор готовят перед использованием.
Подвижная фаза для развития хроматограмм. Смешивают в мерном цилиндре на 100 мл 80 мл н-гексана и 20 мл ацетона. Подвижную фазу заливают в камеру для хроматографирования не менее чем за 30 мин. до погружения хроматографической пластинки. Смесь готовят перед использованием.
Хроматографические колонки. Заполняют стекловатой на высоту 1 см, затем на высоту 4 см смесью силикагеля и оксида алюминия (в соотношении 2:3), тщательно перемешанной в ступке. Перед пропусканием экстракта колонку промывают 30 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4).
Хроматографические пластинки «Силуфол». Перед использованием пластинку помещают в камеру с дистиллированной водой на глубину 0,5 см и вынимают после поднятия фронта воды на 145 мм, сушат при температуре 25 — 30 °C в течение 20 — 30 мин.
Ход анализа. Из пробы шелухи методом диагонального деления выделяют 100 г. Затем прощупыванием тонкого слоя шелухи выбирают все семена и взвешивают с точностью до 0,001 г. На анализ берут 10 г шелухи, содержащей десятую часть выделенных и измельченных семян; помещают в патрон из фильтровальной бумаги и заряжают аппарат Нааба.
Экстракцию проводят в течение 2 ч 50 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4). Скорость экстракции регулируют с таким расчетом, чтобы в верхней части экстракционного патрона над слоем анализируемого материала всегда находился растворитель и его уровень не опускался ниже чем на 5 мм над поверхностью экстрагируемого объекта. Затем экстракт охлаждают до комнатной температуры и пропускают через предварительно подготовленную колонку. Колбу и колонку промывают 50 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4). Очищенный экстракт концентрируют путем отгонки растворителя до 1 мл.
Параллельно с анализируемой пробой готовят два модельных экстракта, каждый из них получают из 1 г шелухи, в которую внесены определенные количества стандартного раствора бутифоса.
Хроматографирование. 0,1 мл экстракта пробы и модельных экстрактов наносят на хроматографическую пластинку. Диаметр каждого пятна не должен превышать 10 мм. После высыхания пятен пластинку помещают в камеру для хроматографирования, куда налита смесь н-гексана и ацетона (4:1). Пластинку вынимают после поднятия фронта растворителя на высоту 10 — 11 см, сушат в вытяжном шкафу 3 — 5 мин. для удаления паров растворителя и опрыскивают раствором проявителя. Через 15 — 20 мин. пластинку опрыскивают 40-процентным водным раствором уксусной кислоты для более четкого проявления пятен дефолианта. При этом на желтом фоне ясно видны сине-голубые пятна бутифоса.
Обработка результатов анализа. Содержание бутифоса в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
AV
2
A — количество бутифоса, найденное на хроматограмме путем сравнения пятен проб и модельных экстрактов, мкг;
V — объем экстракта, нанесенный на хроматографическую 1 пластинку, мл;
V — общий объем экстракта, мл; 2
P — навеска хлопковой шелухи, г.
Техника безопасности. Соблюдают правила безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами и токсичными веществами.