Методические указания по определению комманда в бобовых хроматографическими методами

(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5006-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КОММАНДА В БОБОВЫХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>

---

<*> Разработаны В.Ф. Демченко, Е.И. Давидюк, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая   характеристика   препарата.   Комманд   -   гербицид
избирательного   действия,  эффективное  средство  для  борьбы  со
злаковыми     двудольными    сорняками.    Действующее    вещество

2-(2-хлорфенил)метил-4,4-диметил-3-изоксазолидинон. Брутто-формула

C  H  ClNO .   Молекулярная  масса  239,7. Общепринятое название -
 12 14    2
кломазон.   Светло-коричневая  вязкая  жидкость  с  запахом  рыбы,

                                                  -2

плотность  1,192  при  20 °C, давление паров 1,92 x 10   Па при 25
°C.  Хорошо  растворим  в  хлороформе,  гептане, ацетоне, гексане,
метаноле,  ацетонитриле,  диоксане,  хлористом  метилене  и других
органических   растворителях.   Растворимость   в  воде  1,1  г/л;
коэффициент  распределения  в системе октанол - вода 350. Устойчив

при хранении: при комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °C — в течение 3 мес. Препаративная форма -

0,75 — 1,0 кг/га по д.в.

Принцип метода. Метод основан на экстракции комманда из пробы органическим растворителем (н-гексан) с последующим определением методом ГЖХ или ТСХ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 16.

Таблица 16

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОММАНДА

Параметры	ГЖХ		ТСХ
	вариант I	вариант II
Нижний предел определения, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, +/- % Доверительный интервал среднего, +/- %	0,005 82,6 18,6 23,6	0,005 81,5 13,6 16,9	0,05 81,0 14,6 18,2

Избирательность метода. Метод избирателен в присутствии загрязнителей окружающей среды: хлорпроизводных циклопарафинов (изомеров ГХЦГ), соединений дифенилметанового ряда (ДДТ и его производных).

Реактивы и растворы. Азот газообразный особой чистоты. Аммиак водный 25-процентный ч.д.а. Ацетон х.ч. н-Гексан ч., перегнанный. Сульфат натрия безводный ч. (прокаленный). Нитрат серебра х.ч.

Проявляющий реагент. В мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 — 10 мл водного 25-процентного аммиака. Полученный раствор разбавляют ацетоном до 100 мл. Хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой. Годен в течение 1 мес.

Носитель инертный: хроматон N-AW-HMDS (0,125 — 160 мм). Насадка готовая: хроматон N-AW-DMCS (0,125 — 0,16 мм), содержащий 5% SE-30. Фазы неподвижные: фенилметилсиликоновое масло OV-17, трифторпропилметилсиликоновый каучук OF-1. Стандартный раствор комманда в н-гексане с концентрацией 100 мкг/мл.

    Приборы  и  посуда.  Аппарат  для  встряхивания. Баня водяная.
Испаритель    ротационный   вакуумный.   Мельница   электрическая.
Облучатель   ртутно-кварцевый.   Установка   компрессорная.   Шкаф
сушильный.  Воронки  химические. Камеры хроматографические. Колбы:
конические  на  100  мл,  грушевидные на 100 мл, мерные на 100 мл.
Микрошприцы   вместимостью   10   мкл,   тип  МШ-1И.  Микропипетки
вместимостью  0,1  мл. Пробирки мерные. Пульверизаторы стеклянные.
Цилиндры  мерные. Фильтры "синяя лента". Хроматограф газовый с ДЭЗ
("Цвет-106",  "Кристалл-2000"  и др.). Колонки хроматографические:
1)  длиной  1  м, диаметром 3 мм, содержащая 5% SE-30 на хроматоне
N-AW-DMCS  (0,12  -  0,16  мм);  2)  длиной  2  м, диаметром 3 мм,

содержащая 1,5% OV-17 + OF-1 на хроматоне N-AW-HMDS (0,125 — 0,160 мм). Спектроденситометр для чтения тонкослойных хроматограмм (типа «Оптон»). Пластинки хроматографические «Силуфол» УФ размером 20 254 x 20 см.

Ход анализа. Экстракция. Измельченную в порошок на электрической мельнице пробу (10 г) помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 75 — 100 мл на шлифе, заливают 20 — 25 мл н-гексана и непрерывно перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. После отстаивания экстракт отфильтровывают в грушевидную колбу вместимостью 75 — 100 мл на шлифе через складчатый фильтр «синяя лента», содержащий безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют, пробу количественно переносят на фильтр и, ополоснув коническую колбу н-гексаном, промывают растворителем (5 — 10 мл).

Объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе под вакуумом при 40 °C до объема 1 — 2 мл. Концентрат тщательно переносят в мерную пробирку и при комнатной температуре упаривают в токе азота особой чистоты до объема 0,1 — 0,2 мл.

    Идентификация   и  количественное  определение  комманда.  При
определении  методом  ТСХ  аликвотные  части экстракта (0,01 и 0,1
части   конечного  объема)  наносят  при  помощи  микрошприца  или
микропипетки  на  хроматографическую  пластинку  "Силуфол"  УФ   .

                                                          254

Рядом  с пробой наносят различные количества стандартного раствора
гербицида  (по  0,5;  2  и 5 мкг). Пластинку помещают в камеру для
хроматографирования,  содержащую подвижную фазу (смесь н-гексана с
ацетоном  в соотношении 4:1). Время насыщения камеры 30 мин. После
хроматографирования   (длина   пробега   15  -  17  см)  пластинку

высушивают в горизонтальном положении в вытяжном шкафу до удаления запаха растворителя, а затем обрабатывают проявляющим реагентом с помощью пульверизатора, подсоединенного к воздушному компрессору.

    Зоны  локализации комманда на хроматограммах проявляются после
облучения УФ-светом в виде серо-бурых пятен с величиной R  0,35.

                                                     f

    Количество   комманда   в   пробе   оценивают   визуально  или
денситометрически   на  приборе  типа  "Оптон".  Оставшуюся  часть
экстракта  при  необходимости также подвергают хроматографированию

по описанной методике.

    Для   идентификации  и  количественного  определения  комманда
методом    ТСХ    могут    быть   использованы   также   пластинки
хроматографические:   пластинки  для  ВЭТСХ  (СССР),  величина  R

                                                             f

комманда   0,85;   "Силуфол"  -  0,35;  "Алюграм"  (ФРГ)  -  0,37;
"Полиграм" (ФРГ) - 0,38; "Кизельгель 60" F    (ФРГ) - 0,43.

                                      254

При определении комманда методом ГЖХ анализ 5 мкл конечного гексанового экстракта проводят по одному из двух вариантов.

В варианте I используют хроматографическую колонку длиной 1 м, содержащую 5% SE-30. Температура (°C): колонки — 190, детектора — 230, испарителя — 220. Скорость потока газа-носителя (азота) через колонку 60 мл/мин., скорость потока азота на продувку детектора 160 мл/мин. Время удерживания комманда относительно альдрина 0,48, абсолютное время удерживания 59 с.

В варианте II используют хроматографическую колонку длиной 2 м, содержащую 1,5% OV-17 и 1,95% QF-1. Температура (°C): колонки — 190, детектора — 240, испарителя — 220. Скорость потока газа-носителя (азота) через колонку 50 мл/мин., скорость потока азота на продувку детектора 160 мл/мин. Время удерживания комманда относительно альдрина 0,68, абсолютное время удерживания 5 мин. 40 с.

Дополнительные способы идентификации комманда. Для повышения надежности идентификации комманда в пробе могут быть рекомендованы дополнительные способы или их сочетание.

Перераспределение в системе н-гексан — концентрированная серная кислота. После проведения ГЖХ-анализа по описанной методике к гексановому экстракту в пробирке прибавляют 1 — 2 капли концентрированной серной кислоты. Смесь перемешивают путем встряхивания; после разделения фаз из экстракта, который находится над слоем кислоты, с помощью микрошприца (аккуратно, не касаясь стенок пробирки и кислоты!) отбирают аликвоту (5 мкл) и повторно анализируют в идентичных условиях. Сравнение хроматограмм позволяет вычислить вклад комманда в сигнал детектора. Комманд в результате обработки серной кислотой удаляется из раствора, а ХОП, в том числе и имеющие близкое по величине время удерживания гамма-ГХЦГ, количественно сохраняются.

Капиллярная газожидкостная хроматография. Хроматограф газовый отечественного производства «Кристалл-2000», снабженный диалого-вычислительным комплексом с программным обеспечением и автоматической дозировкой жидких проб. Кварцевая капиллярная хроматографическая колонка длиной 24 м с внутренним диаметром 0,2 мм, неподвижная фаза OV-1. Температура (°C): колонки — 175, испарителя — 250, детектора — 250. Газ-носитель — азот, скорость потока азота на колонку — 30 мл/мин., на поддув детектора — 20 мл/мин. В этих условиях обеспечивается селективность определения комманда в присутствии ХОП, производных циклопарафинов (изомеры ГХЦГ), диенового синтеза (альдрин, гептахлор, дильдрин), дифенилметанового ряда (ДДТ, его 2,4'-изомер и метаболиты), основных компонентов смесей родственных им полихлорированных бифенилов. Время удерживания относительно альдрина 0,81.

Высокоэффективная жидкостная хроматография. Хроматограф жидкостный микроколоночный отечественного производства «Милихром», детектор спектрофотометрический, лямбда = 200 нм. Микроколонка длиной 5 см с внутренним диаметром 2 мм, неподвижная фаза «Силасорб 600», 5 мкм. Элюент гептан или смесь гексана с ацетоном в объемном соотношении 6:1. Скорость элюирования 200 мкл/мин. Поддиапазон чувствительности 3,2 А, время измерения 0,6 с, скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч. В таких условиях достигается избирательность определения в присутствии ХОП. Объем удерживания комманда 295 мкл.

Идентифицировать комманд при газохроматографическом анализе можно с помощью азот-селективного детектора, повышающего предел обнаружения препарата в пробе на порядок по сравнению с ДЭЗ.

Обработка результатов анализа. Содержание комманда в анализируемых объектах (X, мг/кг) при определении методом ТСХ рассчитывают по формуле:

                             AV
                               2

X = ---, V P 1

где:

A — количество препарата, обнаруженное в аликвоте экстракта, взятой для хроматографирования, мкг;

V — объем аликвоты экстракта, нанесенной на 1 хроматографическую пластинку, мл;

V — конечный объем экстракта, мл; 2

P — масса пробы, г.

Для количественной оценки результатов, полученных методом ГЖХ, используют формулу:

                           H V
                            х 2

X = ----, KV P 1

где:

H — высота хроматографического пика комманда в пробе, мм; х

V — объем аликвоты экстракта, введенный в испаритель 1 хроматографа, мкл;

V — конечный объем экстракта, мл; 2

P — масса пробы, взятой для анализа, г;

K — калибровочный коэффициент, рассчитанный из результатов серии анализов стандартного раствора по формуле:

                        H    H          H
                     1   1    2          n

K = — (-- + -- + ... + --), n CV CV CV

где:

---