Методические указания по определению в одной пробе фосфорорганических и хлорорганических пестицидов, применяемых на томатах, хроматографическими методами

(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 4994-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ В ОДНОЙ ПРОБЕ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ И ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ НА ТОМАТАХ,

---

<*> Методические указания разработаны М.В. Письменной, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).

Краткая характеристика препаратов. На томатах применяют фосфорорганические пестициды (ФОП) — актеллик, базудин, ДДВФ, карбофос, трихлорметафос-3, фозалон, фосфамид, хлорофос, хостаквик, а также хлорорганические пестициды (ХОП) — дилор и кельтан. Физико-химические свойства препаратов приведены в Унифицированной методике.

МДУ актеллика, фозалона, дилора составляет 0,2 мг/кг; базудина, карбофоса — 0,5; хлорофоса, хостаквика — 0,1; фосфамида — 0,4; трихлорметафоса — 3; кельтана — 1,0 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении смеси ХОП и ФОП из единой пробы томатов или томатной пасты водным ацетоном, перераспределении в хлороформ, разделении экстракта на 2 равные части, в одной из которых определяют ФОП, в другой — ХОП путем сочетания методов ТСХЭ, ГЖХ, ТСХ и различных способов очистки экстрактов, как показано на схеме (рис. 13).

Томаты Томатная паста
	Экстракция ацетон — вода (1:1)

                            \/
                       Разбавление
                       водой (1:1)
                            │ Экстракция
                            │ хлороформом
                            \/

                      ┌─────────────────────┐
         ┌────────────┤ Разделение экстракта├────────────┐
<pre class="legal-pre">         │            │     на две части    │            │
         \/           └─────────────────────┘            \/
┌────────────────┐                              ┌────────────────┐
│Определение ФОП │                              │Определение ХОП │
└────────┬───────┘                              └────────┬───────┘
         │                              Концентрирование │
         │                              экстракта досуха │
         \/                                              \/
      ┌──────┐                                 ┌─────────────────┐
      │ ТСХЭ │                                 │   Растворение   │
      └──┬───┘                                 │остатка в гексане│
         │ При наличии                         └─────────┬───────┘
         │ ФОП                                           │</pre>

     \/                                              \/

Очистка экстракта АУ			Очистка раствора концентрированной H SO
			2 4

         \/                                   \/

<pre class="legal-pre">  SE-30┌─────────┐OV-17 + SE-30    OV-17 + SE-30┌─────┐ SE-30
  ┌────┤ГЖХ с ТИД├───────┐        <─────────────┤ ГЖХ ├──────┐
  │    └─────────┘       │                      └─────┘      │
  │                      │                    ┌──────────────┤
  \/                     \/                   \/             \/
┌─────┐               ┌─────┐             ┌─────────┐    ┌───────┐
│ ФОП │               │ ФОП │             │   ДЭЗ   │    │  ТИД  │
└─┬───┘               └──┬──┘             │(кельтан,│    │(ТХМ-3)│
  │                      │                │ дилор,  │    └───┬───┘
  │                      │                │  ТХМ-3) │        │
  │                      │                └───┬─────┘        │
  \/                     \/ Концентрирование  \/             \/</pre>
  └──────────────────────┴───────┬────────────┴──────────────┘

                             \/

ТСХ

Рис. 13. Схема анализа ФОП и ХОП, применяемых на томатах

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 162.

Таблица 162

МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОП И ХОП, ПРИМЕНЯЕМЫХ НА ТОМАТАХ

Пестицид	Томаты			Томатная паста
	предел определения, мг/кг		% определения	предел определения, мг/кг		% определения
	ТСХ	ГЖХ		ТСХ	ГЖХ
Актеллик	0,05	0,0075	82 +/- 4,0	0,25	0,05	72 +/- 1,9
Базудин	0,02	0,0005	72 +/- 3,7	0,10	0,003	73 +/- 5,2
ДДВФ	0,05	0,0025	79 +/- 6,7	0,25	0,012	72 +/- 3,8
Карбофос	0,02	0,03	78 +/- 3,9	0,10	0,15	71,5 +/- 5,0
Трихлорметафос-3	0,05 (0,02 <*>)	0,006	94,5 +/- 6,6	0,25 (0,1 <*>)	0,03	78 +/- 6,0
Фозалон	0,05	0,004	84,5 +/- 5,2	0,25	0,02	79 +/- 1,3
Фосфамид	0,02	0,02	84 +/- 4,3	0,10	0,10	79 +/- 10,1
Хлорофос	0,02	0,0025	82 +/- 5,0	0,10	0,012	72 +/- 4,3
Хостаквик	0,02	0,0005	97,5 +/- 3,2	0,10	0,003	82,5 +/- 6,6
Дилор <*>	0,01 <*>	0,0002	92 +/- 4	0,05 <*>	0,001	94,5 +/- 2
Кельтан <*>	0,01 <*>	0,0002	93 +/- 3	0,05 <*>	0,001	94,5 +/- 1,7

--------------------------------

<*> Проявление реагентом на основе AgNO , для остальных 3 4-(п-нитробензилпиридин) с ТЭПА.

Избирательность метода. Применение различных способов очистки экстрактов, а также сочетание хроматографических методов с использованием различных фаз, детекторов и проявляющих реагентов позволяют идентифицировать при совместном присутствии ФОП и ХОП, применяемые на томатах.

Реактивы и растворы. Ацетон ч. н-Гексан ч., х.ч. Четыреххлористый углерод х.ч., ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. Безводный сульфат натрия ч.д.а. свежепрокаленный. Вата гигроскопическая, обезжиренная эфиром. Фильтры бумажные «красная лента». Серная кислота концентрированная. Уголь активированный ОУ-А. Реактивы для ТСХЭ см. в Унифицированной методике.

Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм); 3% OV-17 на хромосорбе WHP (100 — 120 меш); 1,5% OV-17 + 1,95% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм). Азот особой чистоты. Водород из баллона. Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором. Пластинки «Силуфол». Нитрат серебра х.ч. Водный аммиак 25-процентный ч.д.а. 4-(п-нитробензил) пиридин ч. Тетраэтиленпентамин ч. (ТЭПА).

Проявляющие реагенты: № 1: а — 1-процентный раствор 4-(п-нитробензил) пиридина в ацетоне; б — 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне; № 2 — 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 0,5 мл аммиака и доводят ацетоном до 100 мл. Все реагенты готовят перед употреблением.

Фосфорорганические пестициды: актеллик, базудин, ДДВФ, карбофос, хостаквик, трихлорметафос-3, фозалон, фосфамид, хлорофос х.ч. Хлорорганические пестициды: дилор, кельтан х.ч.

Основные стандартные растворы каждого пестицида в ацетоне 1000 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение 6 мес.

Из основных стандартных растворов готовят рабочие смеси ФОП и ХОП для ТСХ и ГЖХ:

№ 1 — рабочая смесь ФОП для ТСХ — 2,5 мл из основного стандартного раствора каждого пестицида вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки ацетоном. Содержание каждого пестицида в смеси 100 мкг/мл;

№ 2 — рабочая смесь ФОП для ГЖХ — к 0,5 мл рабочей смеси ФОП № 1 добавляют 0,5 мл ОСР фосфамида, 0,5 мл основного стандартного раствора карбофоса и доводят объем смеси растворов ацетоном до 100 мл. Содержание в смеси актеллика, базудина, ДДВФ, трихлорметафоса-3, фозалона, хлорофоса — 0,5 мкг/мл каждого, содержание фосфамида и карбофоса — 5,5 мкг/мл каждого;

№ 3 — рабочая смесь ХОП для ТСХ — 0,5 мл основного стандартного раствора дилора и кельтана вносят в мерную пробирку и доводят объем раствора до 10 мл н-гексаном. Содержание каждого пестицида 50 мкг/мл;

№ 4 — рабочая смесь ХОП для ГЖХ — 0,2 мл смеси ХОП № 3 и доводят до 100 мл н-гексаном. Содержание каждого пестицида 0,1 мкг/мл;

№ 5 — стандарт ТХМ-3 (для ТСХ анализа ХОП) — 0,5 мл основного стандартного раствора ТХМ-3 и доводят объем раствора до 10 мл н-гексаном, переносят в мерную пробирку.

Приборы и посуда. Хроматограф марки «Цвет» или аналогичный с ДПР (ДЭЗ) и ТИД. Прибор для отгонки растворителей — ротационный вакуумный испаритель. Аппарат для встряхивания колб. Колбы: мерные вместимостью 25, 50, 100 мл; конические на 50, 100, 250 мл; грушевидные на 50 мл. Воронки: химические; делительные на 50, 250, 500 мл. Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5 мл. Пипетки на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл. Микрошприцы на 10 мкл.

Ход анализа. Экстракция. К 100 г измельченных томатов (20 г пасты) прибавляют 100 или 50 мл смеси ацетон — вода (1:1) и экстрагируют в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракт сливают в делительную воронку, фильтруя через вату, остаток в колбе дважды промывают смесью ацетон — вода (1:1) порциями по 20 мл и присоединяют к экстракту. К экстракту добавляют 50 мл воды и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 40 мл, осторожно встряхивая. Хлороформные экстракты сливают через фильтр «красная лента» с насыпанным на него слоем безводного сульфата натрия. Экстракт разделяют на две равные части. Одна служит для определения ФОП, другая — ХОП.

Определение фторорганических пестицидов. Предварительная идентификация. Экстракт (1/2 часть) упаривают до 0,5 мл под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Остаток растворяют в 5 мл ацетона и предварительно идентифицируют ФОП хроматоэнзимным методом. Если хроматоэнзимным методом установлено наличие ФОП, анализ проводят далее.

Очистка экстракта. Ацетон (5 мл) из экстракта упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 2 мл смеси бензол — ацетон (1:3) и 0,1 г угля ОУ-4, встряхивают 2 — 3 мин., отфильтровывают через фильтр «красная лента», промывают уголь несколько раз смесью растворителей бензол — ацетон (1:3), общий объем 30 мл. Экстракт упаривают до 0,5 мл и доводят объем раствора точно до 1 — 5 мл ацетоном.

Метод ГЖХ при определении ФОП. Условия хроматографирования. -10 Детектор термоионный (ТИД). Шкала электрометра 2 x 10 А. Скорость движения бумаги 240 мм/ч. Стандартный раствор — смесь ФОП

N  2  (2 - 5 мкл). Вводимый объем пробы 2 - 5 мкл. Длина колонки 1
м.  Диаметр  колонки  3 мм. Скорость потока газа-носителя азота 23
мл/мин.  Скорость  потока водорода 14 - 17 мл/мин. Скорость потока
воздуха   400  мл/мин.  Фаза  5%  SE-30  на  хроматоне  N-AW-HMDS:
температура  колонки 190 °C, испарителя - 210 °C. Фаза 3% OV-17 на

хромосорбе WHP: температура колонки 180 °C, испарителя — 210 °C.

Для определения фозалона — ДПР, колонка стеклянная 0,5 м, фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS: температура колонки 220 °C, испарителя — 230, детектора — 240 °C.

Для всех ФОП время удерживания относительно метафоса при различных условиях хроматографирования приведено в таблице 163.

Таблица 163

ПРИ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЯХ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

Пестицид	Термоионный детектор				Детектор постоянной скорости рекомбинации
	фаза 5% SE-30, длина колонки 1 м, температура 190 °C		фаза 3% OV-17, длина колонки 1 м, температура 180 °C		фаза 5% SE-30, длина колонки 1 м, температура 190 °C <***>		фаза 1,5% OV-17 + 1,9% SE-30, длина колонки 2 м, температура 100 °C
	t уд.отн. (а)	линейный диапазон, нг	t уд.отн. (б)	линейный диапазон, нг	t уд.отн. (в)	линейный диапазон, нг	t уд.отн. (г)	линейный диапазон, нг
Хлорофос	p <*>	-	0,07 <**>	0,5 — 8	p <*>	-	-	-
ДДВФ Хостаквик	p <*> 0,38	0,02 — 1	0,07 <**> 0,27	0,5 — 8 0,2 — 8	p <*> 0,56	- 2 — 20	- -	- -
Базудин	0,71	0,02 — 1,0	0,53	0,1 — 2,5	0,76	0,05 — 2	-	-
Фосфамид	0,84	0,5 — 10	0,72	5 — 80	0,91	10 — 250	-	-
Актеллик Трихлорметафос-3	1,36 1,37	1 — 15 0,02 — 1	1,05 1,04	3 — 30 0,1 — 4	- 0,95	- 0,05 — 2	- 1,93	- 0,5 — 9
Карбофос	1,47	0,5 — 10	1,38	10 — 300	1,6	1 — 10	4,2	5 — 80
Фозалон Дилор	5,5 -	10 — 100 -	- -	- -	3,02 1,04	4 — 90 0,01 — 0,3	- 0,75	- 0,05 — 2
Кельтан Метафос	- 1,0	- 0,1 — 3	- 1,0	- 1 — 10	1,04 1,0	0,01 — 0,4 0,5 — 10	1,07 1	0,1 — 3 0,2 — 7

---

<*> p — пик выходит с растворителем.

<**> Для идентификации и количественного определения хлорофоса и ДДВФ оптимальная температура колонки 130 °C, испарителя — 180 °C.

    <***>  С  ДПР  на  0,5-м  колонке  с  5% SE-30 при температуре
колонки  220  °C  пики  анализируемых  пестицидов, кроме фозалона,
выходят  вместе  с  растворителем; t   фозалона 2,8 мин., линейный

                                уд

диапазон 0,1 — 2 нг.

    Примечание.  Время  удерживания  указано  относительно времени
удерживания  метафоса: а - 4,6 мин.; б - 16,6 мин.; в - 2,15 мин.;

г — 7 мин.

    Метод   ТСХ   при  определении  ФОП.  После  очистки  экстракт
упаривают  до  0,3  мл.  Слой  на пластинке "Силуфол" разделяют на

полосы шириной 20 мм вдоль линии движения растворителя. На одну из полосок в точку на расстоянии 1,5 см от нижнего края количественно

наносят  пробу.  Слева  и  справа  от  пробы  наносят РС ФОП N 1 в
количестве  0,05 - 0,2 мл. Пластинку помещают в камеру, содержащую
смесь   растворителей   гексан  -  ацетон  (3:1).  После  развития
хроматограммы  и  высушивания  на  воздухе  пластинку обрабатывают
проявляющим  реагентом  N  1,  сначала  раствором  а,  прогревая в
сушильном  шкафу  при 150 °C в течение 10 мин., затем реагентом б.

красный) на белом фоне. Величины R приведены в таблице 164. f

Таблица 164

ВЕЛИЧИНЫ R ИССЛЕДУЕМЫХ ФОП И ХОП F В РАЗЛИЧНЫХ ПОДВИЖНЫХ ФАЗАХ

Пестицид	Хлороформ	CCl 4	Гексан — ацетон (3:1)	н-Гексан
Хлорофос	0,09	0	0,08	0
Фосфамид	0,15	0	0,15	0
ДДВФ	0,27	0	0,16	0
Базудин	0,30	0	0,51	0
Хостаквик	0,34	0	0,24	0
Карбофос	0,43	0	0,34	0
Актеллик	0,58	0	0,55	0
Фозалон	0,69	0	0,36	0
Трихлорметафос	0,95	0,45	0,74	0,06
Кельтан	0,86	0,20	-	0,05
Дилор	1,0	0,85	-	0,3

Примечание. (-) — опыты в этой системе растворителей не проводили.

Определение хлорорганических пестицидов. Очистка экстракта. Экстракт (1/2 часть) упаривают под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Сухой остаток переносят в делительную воронку с помощью 10 мл н-гексана, в воронку добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты и осторожно встряхивают несколько раз. Органический слой отделяют и повторяют обработку серной кислотой до тех пор, пока кислота не станет бесцветной. Экстракт дважды промывают дистиллированной водой по 10 мл. н-Гексановый экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей, сливая через слой безводного сульфата натрия на воронке. Дважды слой промывают на воронке н-гексаном порциями по 5 мл, смывы присоединяют к экстракту. Растворитель упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C до 0,5 мл, доводят точно до 1 — 2 мл н-гексаном. Из исследуемых ФОП после очистки серной кислоты остается в экстракте ТХМ-3.

    Метод  ГЖХ  при  определении ХОП. Условия хроматографирования.
Детектор  ДПР (ДЭЗ). Ввод проб в хроматограф через самоуплотняющую

                                     -12

мембрану.  Шкала  электрометра  20  x  10     А. Скорость движения
бумаги  240  мм/ч.  Скорость потока газа-носителя азота 60 мл/мин.
Скорость  потока продувочного газа 150 мл/мин. Стандартный раствор

• смесь ХОП № 4 (2 — 5 мкл). Объем вводимой пробы 2 — 5 мкл. Длина колонки 1 м, диаметр 3 мм. Фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS. Температура колонки 190 °C, детектора — 230, испарителя — 210 °C.

Фаза смешанная: 1,5% OV-17 + 1,95% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS. Длина колонки 2 м, диаметр 3 мм. Температура колонки 190 °C, детектора — 230, испарителя — 210 °C.

Для ХОП и ФОП, определяемых при этом способе очистки, время удерживания относительно альдрина (ХОП) и метафоса (ФОП) приведено в таблице 163.

Метод ТСХ. После очистки экстракт упаривают до 0,3 мл. На пластинку «Силуфол» наносят пробу. Справа и слева от пробы наносят рабочую смесь ХОП № 3 в количестве 0,05 — 0,2 мл и в эти же точки

• стандартный раствор ТХМ-3 (раствор № 5 0,05 — 0,2 мл). Пластинку

помещают  в  камеру,  содержащую подвижную фазу - четыреххлористый
углерод.  После  развития хроматограммы и высушивания пластинки на
воздухе   пластинку  обрабатывают  проявляющим  реагентом  N  2  и
помещают  на 10 мин. под УФ-свет (лампа ПРК-4) на расстоянии 20 см
от  источника. Исследуемые пестициды появляются в виде темно-серых

пятен на светлом фоне. Величины R приведены в таблице 164. f

Обработка результатов анализа. Метод ГЖХ. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте хроматографических пиков. Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                          C  V H  V
                           ст с пр 2

X = ----------, H V P ст 1

где:

C — концентрация пестицида в стандартном растворе, вводимом ст в хроматограф, нг;

V — объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, с мкл;

    H  ,   H     -  высоты  пиков  соответственно  стандартного  и
     ст     пр

исследуемого растворов, мм;

V — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл; 1

V — объем анализируемого экстракта, мл; 2

P — масса образца, взятого для анализа, г.

Метод ТСХ. Идентифицируют обнаруженные пестициды по величинам R (см. табл. 164). Количественное определение проводят сравнением f размера и интенсивности окраски пятен пестицида в пробе и в стандартном растворе. Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                              A

X = -, P

где:

---