Методические указания по измерению концентраций трифумина и его метаболитов в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 4990-89)
8 июня 1989 г. № 4990-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТРИФУМИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ
В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны М.В. Письменной, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препаратов приведена в Методических указаниях № 5026-89.
Принцип метода. Определение трифумина и его метаболитов основано на хроматографическом разделении в тонком слое оксида алюминия (пластинки "Алуфол") и обнаружении зон локализации после термического разложения препаратов на пластинке до ароматического амина; диазотирования последнего нитритом натрия и азосочетания образовавшегося производного фенилдиазония с 1-нафтолом. Возможны также хроматографирование в тонком слое силикагеля (пластинки "Силуфол" УФ ) и обнаружение пятен под хроматоскопом. Для
254
обнаружения трифумина может быть применен бромфеноловый реагент.
Пробы отбирают с концентрированием (бумажный фильтр «синяя лента»).
Метрологическая характеристика метода. Предел измерения трифумина и его метаболитов в анализируемом объеме пробы по реакции азосочетания 0,2 мкг (на пластинках "Алуфол"), 3 мкг ("Силуфол"), под хроматоскопом 0,5 мкг ("Силуфол" УФ ). Предел
254
измерения трифумина по реакции с бромфеноловым реагентом 3 мкг
("Силуфол"). Предел измерения в воздухе трифумина и его
метаболитов 0,007 мг/куб. м (при отборе 30 л воздуха). Диапазон
измеряемых концентраций 0,007 - 2 мг/куб. м. Граница суммарной
погрешности измерения трифумина +/- 13,2%, метаболита ФМ-6-1 — +/- 14,5, метаболита ФД-1-1 — +/- 14,8%.
Избирательность метода. Трифумин и его метаболиты разделяются на хроматограмме. Определению по реакции азосочетания мешают гербициды из группы фенилмочевины, имеющие близкие величины R .
f
Определению с бромфеноловым реагентом мешают фосфорорганические и другие пестициды, определяемые этим реагентом и имеющие близкие величины R . Определению под хроматоскопом могут мешать пестициды
f
и другие коэкстрактивные вещества, видимые под хроматоскопом в области 250 - 260 нм и имеющие близкие к трифумину и его метаболитам величины R . Из трех способов обнаружения более
f
специфичен способ по реакции азосочетания. Сочетание трех способов обнаружения позволяет надежно идентифицировать трифумин и его метаболиты в присутствии пестицидов названных групп.
Время измерения (включая отбор проб) около 120 мин.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Безводный сульфат натрия ч. Фильтры бумажные «синяя лента». Нитрит натрия ч.д.а. Кислота хлороводородная х.ч. Кислота уксусная х.ч. Гидроксид калия ч. 1-Нафтол ч.д.а. Бромфеноловый синий, индикатор ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Стандартные пластинки «Алуфол», «Силуфол» (20 x 20 см), «Хемапол». Препарат трифумин. Метаболиты трифумина ФМ-6-1 и ФД-1-1 х.ч. Основные стандартные растворы трифумина и его метаболитов с концентрацией по 1000 мкг/мл готовят растворением н-гексаном навески каждого вещества 25 мг (0,025 г) х.ч. в мерных колбах вместимостью 25 мл. Трифумин в растворе устойчив при хранении в холодильнике в течение 1 мес., метаболиты — 3 мес. Рабочий стандартный раствор (смесь трифумина и его метаболитов) готовят внесением 2,5 мл основного стандартного раствора каждого вещества в мерную колбу на 50 мл и доведением н-гексаном объема раствора до метки. Концентрация каждого вещества в смеси 50 мкг/мл. Растворы устойчивы в холодильнике в течение 10 дней.
№ 1: а — к смеси из 46 мл воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты прибавляют 1 г нитрита натрия; б — к раствору 2,8 г гидроксида калия в 50 мл воды прибавляют 0,1 г 1-нафтола. Проявляющие реагенты применяют свежеприготовленными.
№ 2: а — растворяют 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл 1-процентным водно-ацетоновым (1:3) раствором нитрата серебра; б — 5-процентный водный раствор уксусной кислоты. Реактивы устойчивы в течение 2 мес.
Приборы и посуда. Электроаспиратор для отбора проб воздуха. Фильтродержатели. Ротационный вакуумный испаритель. Баня водяная. Колбы: мерные на 25, 50 и 100 мл; конические на 100 мл; грушевидные на шлифах вместимостью 50 мл. Стаканы химические на 50 и 100 мл. Пипетки вместимостью 0,1; 1,5; 10 мл. Хроматографическая камера. Пульверизаторы стеклянные. Лампа УФ-света типа «Хроматоскоп» или аналогичная с диапазоном светового излучения 250 — 260 нм.
Отбор проб. Воздух со скоростью 1 л/мин. аспирируют через фильтр «синяя лента», вложенный в фильтродержатель. Рекомендуется отбирать три параллельные пробы. Максимально отбираемый объем воздуха 30 л (в течение 30 мин.). Отобранные пробы хранить в холодильнике не более 3 дней.
Ход анализа. Бумажный фильтр помещают в стакан и заливают 20 мл н-гексана (ацетона). Экстрагируют, перемешивая стеклянной палочкой в течение 5 мин., сливают растворитель через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют. Упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани 45 °C) до объема около 0,3 мл и хроматографируют. При использовании в качестве экстрагента ацетона остаток экстракта упаривают при комнатной температуре досуха, растворяют в 0,3 мл н-гексана и хроматографируют.
Определение методом ТСХ. На пластинку "Алуфол" с помощью капилляра или микропипетки наносят пробу, ополаскивая колбу 3 - 4 раза небольшими количествами (около 0,1 мл) н-гексана. На эту же пластинку наносят 0,05 - 0,2 мл рабочего стандартного раствора смеси трифумина и его метаболитов. Пластинку хроматографируют в подвижной фазе гексан - ацетон (2:1). После подъема фронта
растворителя на 10 см пластинку вынимают из камеры, отмечают линию
фронта и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку помещают в сушильный шкаф с температурой 160 - 170 °C и выдерживают в течение 1 ч. После охлаждения пластинку помещают в камеру для опрыскивания и
опрыскивают проявляющим реагентом № 1: сначала реактивом а и сразу
же реактивом б. Трифумин и его метаболиты проявляются в виде красных пятен. Величины R трифумина, ФМ-6-1 и ФД-1-1
f
соответственно 0,23; 0,49; 0,82. Для этой реакции можно также использовать пластинки «Силуфол».
Для обнаружения трифумина и его метаболитов под хроматоскопом используют пластинки "Силуфол" УФ . В этом случае пробу с
254
н-гексаном наносят на пластинку «Силуфол» УФ . Развивают 254
хроматограмму в подвижной фазе гексан - ацетон (2:1), дают растворителю испариться с пластинки и рассматривают ее под хроматоскопом. Величины R трифумина, ФМ-6-1 и ФД-1-1
f
соответственно 0,35; 0,61; 0,93. Далее эту же хроматограмму можно проявить бромфеноловым реагентом (реагент N 2). Сначала опрыскивают реактивом а, затем 5 мин. прогревают при 100 °C и опрыскивают реактивом б. Бромфеноловым реагентом обнаруживается
только трифумин, метаболиты не обнаруживаются.
Количественное определение трифумина и его метаболитов проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы с пятнами стандартных растворов на одной пластинке. Площадь пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Прямая пропорциональная зависимость площади пятен от концентрации препаратов наблюдается в пределах 0,2 — 15 мкг (проявляющий реагент № 1), 0,5 — 20 мкг (обнаружение под хроматоскопом), 3 — 25 мкг (проявляющий реагент № 2). При больших концентрациях анализируют аликвотную часть экстракта (0,1 — 0,2 мл) параллельной пробы.
Обработка результатов анализа. Концентрацию трифумина в воздухе (X, мг/куб. м) вычисляют по формуле:
GV
2
G — количество пестицида в хроматографируемом объеме пробы, мкг;
V — объем пробы, взятый для хроматографирования, мл; 1
V — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к 20 стандартным условиям, л.
Требования безопасности. Следует соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями, кислотами и щелочами.