Методические указания по определению акрекса, диносеба в крови и моче методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 04.10.1988 № 4709-88)

4 октября 1988 г. № 4709-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКРЕКСА, ДИНОСЕБА В КРОВИ И МОЧЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны: А.М. Шмигидиной, М.А. Клисенко, Н.И. Ревой, Н.В. Суперсон (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая     характеристика     препаратов.   Акрекс (талан,    МС-1053,
изофен) - 2-(бутил-2)-4,6-динитрофеноло-изопропилкарбонат.   Брутто-формула
C  H  O N . Молекулярная масса 326,31. Общепринятое название - динобутон.

14 18 7 2

В чистом виде — кристаллическое вещество светло-желтого цвета, т. пл. 61 — 62 °C. Препарат плохо растворим в воде, хорошо растворим в большинстве органических растворителей. Устойчив к кислотам, под действием щелочей гидролизуется с образованием диносеба. Выпускается в виде 50-процентного смачивающегося порошка. Применяют как контактный акарицид и фунгицид на цитрусовых культурах, огурцах и хлопчатнике.

    Диносеб   (гебутокс)  -  2-(бутил-2)-4,6-динитрофенол.   Брутто-формула
C  H  O N .   Молекулярная   масса   240,2.   В   чистом   виде   -  желтое

10 12 5 2 кристаллическое вещество, т. пл. 38 — 42 °C. Растворимость в воде при 20 °C 50 мг/л, в этаноле — 480 г/л, хорошо растворим и в других органических растворителях.

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов диэтиловым эфиром из подкисленной минеральной кислотой анализируемой пробы и последующем определении тонкослойной хроматографией на пластинках «Силуфол».

Метрологическая характеристика метода. Предел обнаружения пестицидов в пробе 2,0 мкг. Среднее значение определения 72%. Стандартное отклонение +/- 8,0%.

Избирательность метода. Определению акрекса может мешать каратан, имеющий близкое значение R , однако совместно эти пестициды не применяют. f

Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Диэтиловый эфир х.ч. Гексан х.ч. Бензол х.ч. Этиловый спирт ректиф. Хлороводородная кислота ч., разбавленная дистиллированной водой (1:1). Муравьиная кислота ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Гидроксид калим ч.д.а. Дистиллированная вода. Пластинки «Силуфол» (15 х 15 см). Универсальная индикаторная бумага. Вата гигроскопическая. Стандартные растворы акрекса и диносеба в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы стабильны в течение 3 — 4 мес. при хранении в холодильнике. Для приготовления проявляющего реагента в мерную колбу на 100 мл помещают 5 г гидроксида калия, растворяют в этиловом спирте и доводят до метки этиловым спиртом.

Приборы и посуда. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный прибор. Водяная баня. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Сушильный шкаф. Делительные воронки на 250 мл. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Пипетки на 1 и 5 мл. Колбы: конические на 100 мл; круглодонные на 100 мл; мерные на 100 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Воронки химические диаметром 6 см. Ступка фарфоровая с пестиком. Камера хроматографическая. Пульверизатор стеклянный. Палочки стеклянные.

Подготовка к определению. Хроматографическую камеру за 20 — 30 мин. до начала хроматографирования заполняют смесью растворителей гексан-диэтиловый эфир-муравьиная кислота (90:10:2) или гексан-бензол (2:3).

Ход анализа. Пробу мочи (10 мл) помещают в делительную воронку на 250 мл, разбавляют до 50 мл дистиллированной водой, затем подкисляют до pH 1 — 2 разбавленной (1:1) хлороводородной кислотой и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (20; 20 и 20 мл). При образовании эмульсии к каждой порции экстракта прибавляют 5 — 7 мл этилового спирта.

Объединенный эфирный экстракт пропускают через безводный сульфат натрия (7 г) в круглодонную колбу и отгоняют эфир с помощью ротационного испарителя до объема 2 — 3 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха до объема 0,2 — 0,3 мл.

Пробу крови (2 мл) помещают в фарфоровую ступку, прибавляют 0,5 мл разбавленной (1:1) хлороводородной кислоты и растирают с 30 — 35 г безводного сульфата натрия до сыпучей массы (сульфат натрия прибавляют постепенно, по 8 — 10 г).

Полученную массу помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 35 — 40 мл диэтилового эфира и экстрагируют пестициды в статических условиях, периодически перемешивая содержимое колбы, в течение 15 — 20 мин. Экстракт пропускают через безводный сульфат натрия в круглодонную колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют дважды свежими порциями эфира. Растворитель отгоняют с помощью ротационного испарителя до объема 2 — 3 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха до объема 0,2 — 0,3 мл.

Концентрат в колбе количественно с помощью микропипетки переносят на пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартов с содержанием 2; 5; 10 мкг пестицидов в пятне (равные количества акрекса и диносеба наносят в одну точку). Пластинку в течение 30 мин. выдерживают на воздухе и помещают в вытяжной шкаф для удаления растворителя, орошают проявляющим реактивом и помещают на 5 — 7 мин. в сушильный шкаф с температурой 100 — 105 °C. При наличии пестицидов на хроматограмме проявляются ярко-желтые пятна.

Величина R акрекса в подвижных растворителях: в смеси гексан-бензол f

(2:3)  -  0,25;  в  смеси  гексан-эфир-муравьиная кислота (90:10:2) - 0,29.
Величины  R  диносеба в этих подвижных растворителях составляют 0,53 и 0,51

       f

соответственно.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят сравнением площади и интенсивности окраски пятен пробы и стандартов. Содержание пестицидов в анализируемой пробе (X, мкг/мл) вычисляют по формуле:

                                   A

X = -, P

где:

A — количество пестицида, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;

P — объем анализируемой пробы, мл.

---