Методические указания по определению промета в растениях, почве и воде методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 04.10.1989 № 4698-88)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
4 октября 1989 г. № 4698-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРОМЕТА В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Л.И. Бублик, Н.В. Федоренко (УкрНИИЗР). Рекомендованы группой экспертов.
Краткая характеристика препарата. Действующее вещество промета - N-(N-бутоксикарбонил-N-метиламиносульфенил)-O-(2,3-дигидро-2,2- диметилбензофурил-7)-N-метилкарбамат. Брутто-формула C H N O S.
18 26 2 5
Молекулярная масса 382,5. Общепринятое название - фуратиокарб. Растворимость в воде при 20 °C - 10 мг/л. Растворим в метаноле, изопропаноле, н-октаноле, ацетоне, циклогексане, метиленхлориде, толуоле,
гексане, хлороформе.
Промет — экспериментальный системный почвенный инсектицид контактного и кишечного действия против комплекса почвообитающих вредителей кукурузы, картофеля и других культур. Обладает нематоцидными свойствами. Промет разлагается в растениях и почве с образованием карбофурана.
Принцип метода. Метод основан на извлечении промета и его метаболитов из исследуемой пробы хлороформом, гексаном или водой, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 3; очистке экстракта путем перераспределения в двух несмешивающихся растворителях и определении препарата методом хроматографии в тонком слое.
Метрологическая характеристика метода. Минимальное детектируемое количество фуратиокарба и карбофурана 0,1 мкг. Предел обнаружения в воде 0,0004 мг/л, почве — 0,001 мг/кг, свекле, озимой пшенице (зеленая масса), зерне — 0,03 мг/кг, картофеле (клубни) — 0,05 мг/кг, свекле (обработанные семена) — 0,5 мг/кг. Среднее значение определения 82 — 95%.
Избирательность метода. Метод специфичен.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан ч. Этиловый спирт ректиф. Хлороформ х.ч. Хлороводородная кислота. Уксусная кислота. Вода дистиллированная. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Гидроксид калия х.ч. Йодид калия х.ч. Перманганат калия ч.д.а. п-Нитроанилин ч.д.а. Нитрит натрия х.ч. Соли диазония: прочный синий Б, прочный красный Б, прочный голубой Б (бис-диазотированный о-дианизидин). о-Толидин х.ч. 2,6-Дибром-N-хлорхинонимин. Пластинки "Силуфол" УФ . Бумага
254
фильтровальная. Фуратиокарб 99,8-процентный. Карбофуран 99,8-процентный. Промет 40-процентный с.п. Стандартные растворы для приготовления стандартных растворов (0,1-процентный) 0,025 г 99,8-процентных препаратов или 0,063 г 40-процентного с.п. растворяют в 25 мл ацетона. В мерную колбу
на 100 мл переносят 10 мл полученного раствора и ацетоном доводят до метки.
Хранят растворы в темных склянках с притертыми пробками в холодильнике 2 мес. Проявляющие реагенты: 15-процентный спиртово-водный раствор гидроксида калия (15 г KOH растворяют в 60 мл этанола и 40 мл воды); 0,01-процентный раствор соли диазония в ацетоне (0,01 г соли диазония растворяют в 100 мл ацетона). Хранят в темной склянке 3 сут.; 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (0,5 г 2,6-дибром-N-хлорхинонимина растворяют в 100 мл гексана); 0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н хлороводородной кислоте (0,1 г п-нитроанилина растворяют в 100 мл 0,1 н раствора хлороводородной кислоты); 4-процентный водный раствор нитрита натрия (4 г NaNO растворяют
2
в 100 мл дистиллированной воды); раствор для хлорирования (смешивают равные
объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлороводородной кислоты). Хранят в холодильнике; 0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида калия - в 2 мл дистиллированной воды.
Растворы смешивают и доводят водой до 200 мл.
Приборы и посуда. Весы аналитические и технические. Аппарат для встряхивания. Вакуумный насос. Хроматоскоп. Электроплитка. Водяная баня. Колбы: мерные на 100 мл; плоскодонные на 250 мл; круглодонные на 250 мл. Мерные цилиндры на 50 мл. Микропипетки на 0,1 мл. Воронки делительные на 200; 500 мл. Эксикатор. Камера для хроматографирования. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Пластинки "Силуфол" УФ .
254
Ход анализа. Экстракция. В делительную воронку помещают 250 мл воды. Экстрагируют промет и его метаболиты хлороформом (2 раза порциями по 50 мл) или гексаном (3 раза по 50 мл), встряхивая каждый раз по 5 мин. Растворитель сливают через фильтр с 15 г безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и отгоняют на ротационном испарителе или водяной бане при температуре воды в ней 30 °C до объема 0,2 — 0,5 мл.
Почва (чернозем). Навеску (50 г) воздушно-сухой почвы (чернозема) растирают в фарфоровой ступке, переносят в коническую колбу и заливают 100 мл воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 3. Встряхивают 20 мин. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку и дважды проводят реэкстракцию хлороформом порциями по 50 мл или трижды гексаном порциями по 50 мл. Далее поступают так же, как и при экстракции воды.
В коническую колбу помещают 20 г измельченного образца сахарной или кормовой свеклы (зеленая масса, корнеплоды), озимой пшеницы (зеленая масса, зерно урожая) и заливают 200 мл воды, подкисленной до pH 3. Встряхивают 20 мин. Экстракт отфильтровывают в делительную воронку. Проводят реэкстракцию, как описано выше. Экстрагируемые примеси не мешают определению.
В коническую колбу помещают 0,2 г обработанных семян сахарной или кормовой свеклы и заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают 20 мин. Экстракт переносят через воронку с бумажным фильтром с 10 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу и отгоняют хлороформ на ротационном испарителе или на водяной бане до 0,2 — 0,5 мл. Остаток переносят через воронку в мерную пробирку, промывают колбу хлороформом и доводят объем экстракта до 5 мл. Аликвоту наносят капилляром (5 — 10 мкл) на пластинку.
В коническую колбу переносят 50 г измельченного образца клубней картофеля, заливают 100 мл хлороформа или гексана (2 x 100 мл), экстрагируют при встряхивании 20 мин. Полученный экстракт переносят через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу, отгоняют растворитель на водяной бане и остаток сушат досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл дистиллированной воды, переносят в делительную воронку и проводят реэкстракцию дважды по 30 мл хлороформа. Дальнейшие операции проводят, как описано выше.
Хроматографирование. После отгонки растворителя остаток наносят капилляром в центр пластинки с силуфолом на расстоянии 1,5 см от нижнего края. Слева и справа микрошприцем или микропипеткой наносят стандартные растворы промета с содержанием 0,5 - 20 мкг. Затем пластинку помещают в
хроматографическую камеру с подвижной фазой, которой служит смесь н-гексана
с ацетоном в соотношении 3:2 или хлороформ. Когда фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают и сушат на воздухе. Пластинку облучают УФ-светом 2 - 3 мин., после чего на белом фоне сорбента проявляются желтые пятна промета и метаболитов, затем опрыскивают проявляющим реагентом N 1, подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентом N 2 (цвет пятен малиновый) или N 3 (цвет пятен синий) либо смесью реагентов N 4 и N 5 в соотношении 10:1 (цвет пятен бордовый). Обработав пластинку парами хлора (реагент N 6), проветрив ее, опрыскивают реагентом N 7. Промет и карбофуран при этом проявляются в виде сине-фиолетовых пятен на сером фоне. В подвижной фазе гексан-ацетон (3:2) для промета R 0,65,
f
для карбофурана R 0,50. В хлороформе R промета 0,50, а карбофурана 0,30.
f f
Обработка результатов анализа. Содержание промета (X, мг/кг или мг/л)
определяют сравнением площади пятен стандартов и проб и рассчитывают по
формуле:
AS
2
где:
A — количество препарата в анализируемой пробе, мкг;
P — масса анализируемой пробы, г;
S и S - площади пятен соответственно стандартного и анализируемых 1 2
растворов, кв. мм.
Требования безопасности. Необходимо выполнять все требования безопасности работы с токсичными веществами, кислотами и щелочами.