Методические указания по определению базудина и гетерофоса в почве и табаке методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 14.07.1988 № 4675-88)
14 июля 1988 г. № 4675-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЗУДИНА И ГЕТЕРОФОСА В ПОЧВЕ И ТАБАКЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Ф.Г. Житку (Молдавский НИИ табака).
Краткая характеристика препарата гетерофоса приведена в Унифицированной методике. Препарат применяют в качестве почвенного нематоцида и инсектицида. Краткая характеристика базудина приведена в Унифицированной методике.
Принцип метода. Метод основан на экстракции гетерофоса и базудина из анализируемой пробы почвы смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлорида кальция (1:1), из проб табака смесью ацетона с водой (1:1), очистке экстрактов путем переэкстракции и осаждения восков и пигментов с последующим определением на газожидкостном хроматографе с ТИД.
Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций: базудина — 0,4 — 1,0 мкг, гетерофоса — 2,0 — 5,0 мкг в пробе. Минимально детектируемое количество базудина 1 нг, гетерофоса — 2,5 нг. Остальные параметры приведены в таблице 27.
И БАЗУДИНА В ПОЧВЕ И ТАБАКЕ МЕТОДОМ ГЖХ
| Пестицид | Объект анализа | Внесенное количество анализируемого пестицида, мкг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, +/- % | Относительное стандартное отклонение | Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5, +/- % | Предел определения, мг/кг |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Базудин | Почва Табак | 0,4 0,75 1,0 0,4 0,75 1,0 | 85,8 88,4 93,6 76,5 82,8 83,0 | 3,76 2,78 2,41 4,52 2,52 2,45 | 1,72 1,24 1,07 2,01 1,12 1,09 | 4,42 3,18 2,74 5,16 2,87 2,80 | 0,008 0,016 |
| Гетерофос | Почва Табак | 2,0 3,75 5,0 2,0 3,75 5,0 | 86,2 89,7 94,5 80,5 85,2 89,3 | 3,90 3,24 2,56 4,86 6,06 5,52 | 1,74 1,44 1,14 2,16 2,70 2,46 | 4,47 3,70 2,92 5,55 6,93 6,32 | 0,04 0,08 |
Избирательность метода. Метод селективен. Гетерофос и базудин взаимному определению не мешают. ФОП (метафос, карбофос, фозалон, фосфамид, хлорофос) и гербициды (атразин, симазин, пропазин) определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон особой чистоты. Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Кислота ортофосфорная ч. Хлорид аммония х.ч. Хлорид кальция х.ч. Азот особой чистоты (в баллонах с редуктором). Водород электролитический (системы СГС-2). Хроматон N-супер (0,125 — 0,160 мм) с 5% ПЭГА. Хроматон N-супер (0,125 — 0,160 мм) с 5% XE-60. Гетерофос х.ч. Базудин х.ч.
Стандартные растворы смеси гетерофоса и базудина с содержанием: а) гетерофоса 10, базудина 4 мкг/мл (в ацетоне); б) гетерофоса 2,5, базудина 1 мкг/мл (в ацетоне).
Осаждающий раствор: 5 г хлорида аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды, смешивают с 10 мл 85-процентной ортофосфорной кислоты и доводят водой до 1 л.
Приборы и посуда. Хроматограф «Цвет-106» с ТИД. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Воронки делительные. Колбы: конические и круглодонные нормального шлифа; остродонные; мерные на 100 мл. Микрошприц на 10 мкл. Электромельница. Колонки хроматографические стеклянные длиной 100 мм с внутренним диаметром 3 мм. Холодильник бытовой. Секундомер. Бумажные фильтры. Водоструйный насос КМ 1230.
Подготовка к определению. Подготовка хроматографических колонок и их кондиционирование. Стеклянные колонки моют хромовой смесью, ополаскивают водой, промывают ацетоном, а затем хлороформом и гексаном. Колонку просушивают и заполняют сорбентом, используя водоструйный насос. Заполненную колонку кондиционируют (не подключая к детектору) 20 ч при 200 °C (ПЭГА) и 250 °C (XE-60).
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу почвы (50 г) помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, заливают 100 мл смеси ацетона с 0,05 н хлоридом кальция (1:1) и встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют еще раз. Объединенные экстракты фильтруют через бумажный фильтр и переносят в делительную воронку. Пестициды переэкстрагируют в гексан трижды порциями по 40 мл, каждый раз встряхивая 2 — 3 мин. Гексановые экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,2 — 0,3 мл при 45 — 50 °C и досуха упаривают в токе холодного воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 — 3 мл ацетона и хроматографируют.
Пробу табака (25 г) помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, заливают 80 мл смеси ацетон — вода (1:1) и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Экстракцию повторяют еще дважды той же смесью порциями по 60 мл, встряхивают соответственно 30 и 20 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр.
Из объединенных водно-ацетоновых экстрактов пестициды переэкстрагируют в гексан (трижды порциями по 40 мл), каждый раз встряхивая 2 — 3 мин. Гексановые фракции объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,2 — 0,3 мл при 45 — 50 °C. Остатки растворителя удаляют в токе воздуха.
Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона, прибавляют 25 мл осаждающего раствора и помещают колбу на 1 ч в холодильник при температуре минус 10 — 12 °C. Содержимое колбы отфильтровывают от восков и пигментов через бумажный фильтр. Из водно-ацетонового фильтрата пестициды экстрагируют гексаном трижды по 2 — 3 мин. порциями по 20 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют при 45 — 50 °C до объема 0,2 — 0,3 мл. Последние порции растворителя удаляют в токе воздуха.
Сухой остаток растворяют в 1 — 5 мл ацетона и используют для определения. В колонку вводят 2 — 3 мкл полученного раствора.
Условия хроматографирования. Хроматограф «Цвет-106» с ТИД. -12
Рабочая шкала электрометра 100 x 10 А. Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч. Колонка стеклянная длиной 100 см с внутренним диаметром 3 мм. Носитель - хроматон N-супер (0,125 - 0,160 мм).
Неподвижная фаза — 5% ПЭГА. Температура колонки 185 °C, испарителя
225 °C. Скорость газа-носителя (азота) 70 мл/мин. Скорость водорода 17 - 18 мл/мин., воздуха - 160 мл/мин. Минимально детектируемое количество гетерофоса 2,5 нг, базудина - 1 нг. Линейный диапазон детектирования гетерофоса 2,5 - 25 нг, базудина
- 1 — 10 нг. Время удерживания базудина — 1 мин. 15 с, гетерофоса
- 2 мин. 25 с.
В качестве альтернативной можно использовать стеклянную колонку длиной 100 см с внутренним диаметром 3 мм, заполненную хроматоном N-супер с 5% XE-60.
Условия хроматографирования те же, что и для колонки с ПЭГА (полиэтиленгликольадипинат). При этом время удерживания базудина — 1 мин. 3 с, гетерофоса — 2 мин. 6 с.
Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков. Содержание пестицидов в анализируемой пробе вычисляют как среднее значение из двух параллельных определений. Количество пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
100CH V V
1 ст 2
X = ----------------, H V P (100 — W) ст 1
C — концентрация стандартного раствора пестицида, мкг/мл;
H , H - высота хроматографического пика соответственно 1 ст
исследуемого и стандартного растворов, мм;
V — объем пробы, введенный в хроматограф, мкл; 1
V — объем пробы стандартного раствора, введенный в ст хроматограф, мкл;
V — общий объем исследуемого раствора, мл; 2
P — навеска исследуемого образца табака, г;
W — влажность анализируемой пробы, %.
Требования безопасности. Необходимо выполнять правила безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями, пестицидами и сжатыми газами.