Методические указания по определению фюзилада в семенах и листьях сои методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 14.07.1988 № 4669-88)
14 июля 1988 г. № 4669-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЮЗИЛАДА В СЕМЕНАХ И ЛИСТЬЯХ СОИ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Л.И. Микадзе, Н.П. Лисецкой (ГрузНИИЗР).
Краткая характеристика препарата. Фюзилад - 2-[4-(5-трифтор- метилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты н-бутиловый эфир. Брутто- формула C H F NO . 19 20 3 4
Принцип метода. Метод основан на извлечении фюзилада из пробы органическим растворителем, гидролизе препарата (флуазифон-бутила) до кислоты флуазифона и определении последней методом ТСХ.
Метрологическая характеристика метода. Предел определения 0,5 мг/кг. Предел обнаружения 5 мкг в пробе. Среднее значение определения фюзилада, %: в листьях сои 82 +/- 9,2, в семенах 80 +/- 8,2 (n = 10, p = 0,95).
Реактивы и растворы. Ацетон. н-Гексан. Диэтиловый эфир. Четыреххлористый углерод. Сульфат натрия безводный. Силикагель АСК. Хлорид аммония х.ч. Ортофосфорная кислота. Хлороводородная кислота х.ч. Двууглекислый натрий х.ч., 0,5 н раствор. Муравьиная кислота концентрированная х.ч. Стандартный раствор фюзилада с содержанием 100 мкг/мл; стандартный раствор флуазифона 100 мкг/мл. Раствор для осаждения (коагуляции): 6,25 г хлорида аммония и 10 мл ортофосфорной кислоты помещают в колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Приборы и посуда. Делительные воронки. Аппарат для встряхивания. Ротационный испаритель. Вакуумный насос. Водяная баня. Мерные колбы на 100 мл. Микропипетки на 0,1; 0,2 мл. Камера для хроматографирования. Пластинки «Силуфол». Опрыскиватель стеклянный. Электромельница лабораторная. Мерные пипетки на 0,1 мл.
Ход анализа. Экстракция. Мелкоизмельченную пробу семян (10 г) заливают 20 мл хлороводородной кислоты, оставляют на 3 — 4 ч, затем заливают 50 мл н-гексана и оставляют на ночь.
Пробу измельченной зеленой массы сои (10 г) заливают смесью 50 мл н-гексана и хлороводородной кислоты (98:2), гомогенизируют и оставляют на ночь. Фильтруют через фильтровальную бумагу. Концентрируют экстракт до полного испарения гексана, оставляя только водный раствор. Температура водяной бани не должна превышать 40 °C. Для гидролиза фюзилада добавляют 20 мл раствора концентрированной хлороводородной кислоты и, закрыв колбу неплотно пробкой, помещают ее на водяную баню, нагретую до 60 °C, выдерживают при этой температуре 1 ч при периодическом помешивании, после чего колбу вынимают и охлаждают.
Полученный раствор осторожно переливают в делительную воронку, доводят pH раствора до 1, добавляют 100 мл диэтилового эфира и экстрагируют флуазифон путем встряхивания в течение 2 мин. Водный слой выливают, раствор диэтилового эфира выпаривают до сухого состояния. Растворяют остаток в 10 мл ацетона, добавляют 50 мл свежеприготовленного раствора для осаждения и 2 г силикагеля АСК, встряхивают в течение 30 с и оставляют на 10 мин., после чего раствор фильтруют в делительную воронку, промывают колбу 100 мл раствора для осаждения. Доводят pH раствора до 1. Экстрагируют флуазифон четыреххлористым углеродом (50 мл), водный слой отбрасывают. К полученному экстракту приливают 100 мл 1-процентного бикарбоната натрия. Встряхивают в течение 2 мин., раствор четыреххлористого углерода выливают. Водную фазу подкисляют раствором концентрированной хлороводородной кислоты до pH 1. Экстрагируют встряхиванием с четыреххлористым углеродом. Полученный раствор концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха.
Хроматографирование и проявление хроматограмм. Сухой остаток растворяют
несколькими каплями гексана и наносят на пластинку, отступив 1 см от нижнего края, рядом с пробой на линию старта наносят стандартные растворы
фюзилада (флуазифон-бутила) и флуазифона. Пластинку с нанесенными пробами и
стандартным раствором помещают в хроматографическую камеру, в которую заливают 60 мл диэтилового эфира, 40 мл н-гексана и 2 мл муравьиной кислоты, что и служит подвижным растворителем. Хроматографическую камеру подготавливают предварительно следующим образом: в колонку для
хроматографии помещают фильтровальную бумагу (диаметр 20 см) в вертикальном
положении, затем закрывают камеру крышкой и ждут, пока растворитель не поглотится бумагой. Прежде чем поместить пластинку в камеру, следует подождать 10 мин. После разгона подвижного растворителя до 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку помещают под источник УФ-света. Препараты проявляются в виде желтых пятен на белом фоне. Величина R флуазифона 0,6.
f
Минимальное количество обнаруженного препарата 0,5 мг/кг.
Обработка результатов анализа. Количество гербицида определяют при сравнении интенсивности окраски и площади пятна пробы и стандарта. Пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Содержание препарата (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
AS
2
где:
A — количество препарата, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
S , S - площадь пятен соответственно стандартного раствора и пробы, 1 2
кв. мм;
P — масса анализируемой пробы, г.
Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, рекомендованные при работе с химическими реактивами.