Методические указания по определению препарата ЭФ-165 (эфогама) в подсолнечном масле методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 14.07.1988 № 4659-88)

14 июля 1988 г. № 4659-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА ЭФ-165 (ЭФОГАМА) В ПОДСОЛНЕЧНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Б.Е. Бумажным (ТСХА).

Краткая характеристика препарата приведена в МУ № 3193-85.

Принцип метода. Методика основана на прямом газохроматографическом определении эфогама в масле с использованием селективного ТИД после разбавления образца ацетоном и добавлением внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта используют трипропилфосфат (ТПФ).

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел чувствительности детектора по эфогаму 0,2 нг. Нижний предел определения в масле 1 мг/л. Среднее значение определения 99 +/- 1%. Доверительный интервал среднего (при p = 0,95, n = 5) +/- 7,4%.

Реактивы и растворы. Вещества-стандарты ЭФ-165 и ТПФ (хроматографически чистые). Ацетон х.ч. Азот особой чистоты. Гелий газообразный очищенный. Водород из баллона или получаемый генератором водорода. Воздух из баллона или нагнетаемый микрокомпрессором.

Приборы и посуда. Хроматограф марки «Хром-5» или аналогичный с ТИД. Колонка хроматографическая стеклянная (1200 x 3 мм), заполненная инертоном-супер (0,16 — 0,20 мкм) с 3% SP-2100. Микрошприцы на 10 мкл. Микропипетки автоматические на 10 мкл (переменный объем) и 1 мл (переменный объем). Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5 мл.

Подготовка к определению. Приготовление стандартных растворов.

Раствор а: к 0,99 мл ацетона прибавляют 10 мкл (0,01 мл) эфогама. Концентрация раствора а — 10 мг/мл (плотность чистого эфогама 1 г/мл).

Раствор б: к 0,5 мл раствора а добавляют 4,5 мл ацетона. Концентрация раствора б — 1 мг/мл.

Раствор в: к 0,5 мл раствора б прибавляют 4,5 мл ацетона. Концентрация раствора в — 0,1 мг/мл.

Раствор г: к 0,99 мл ацетона прибавляют 10 мкл ТПФ. Объемная доля ТПФ в растворе г равна 1 мкл/мл.

Раствор д: к 50 мл ацетона прибавляют 50 мкл раствора г. Объемная доля -3 ТПФ в растворе д равна 10 мкл/мл.

Сроки хранения стандартных растворов 2 мес.

    Ход  анализа. Построение калибровочного графика  (область  концентраций
      -3             -2
1 x 10    -  2  x  10    мг/мл).  В мерные  пробирки  помещают  1 мл масла,
используемого  в  качестве контроля, и соответственно 10; 50; 100 и 200 мкл

раствора в и по 3 мл раствора д. Содержимое пробирок интенсивно

перемешивают.   Получают   растворы,   соответствующие   образцам  масла  с
                          -3        -3        -2        -2
содержанием эфогама 1 x 10  , 5 x 10  , 1 x 10  , 2 x 10   мг/мл.  Объемная

                                                 -3

доля  внутреннего  стандарта  соответствует  3  x  10    мкл на 1 мл масла.
Готовят  также  образец,  не  содержащий  эфогама  и  ТПФ  (к  1  мл масла,
используемого  в  качестве  контроля,  добавляют  3  мл чистого ацетона), и
образец,  содержащий  только внутренний стандарт (к 1 мл контрольного масла

добавляют 3 мл раствора д). По 2 мкл указанных градуировочных растворов вводят в хроматограф в такой последовательности: образец без эфогама и ТПФ, образец, содержащий только ТПФ, и далее в порядке возрастания концентрации эфогама. Каждый из указанных растворов вводят в хроматограф дважды.

По полученным хроматограммам строят график зависимости отношения высоты пика эфогама (H) к высоте пика ТПФ от концентрации эфогама в пробе (C).

Сразу же после хроматографирования градуировочных растворов приступают к анализу пробы неизвестного образца, предварительно убедившись в полной чистоте микрошприца (отсутствие остатков в нем ЭФ-165 и ТПФ).

Анализ неизвестного образца. В мерную пробирку помещают 1 мл исследуемого образца подсолнечного масла, добавляют 3 мл раствора д и 2 мкл полученного раствора вводят в хроматограф.

Условия хроматографирования. Колонка длиной 1,2 м с внутренним диаметром 3 мм заполнена фазой 3% SP-2100 на инертоне-супер (0,16 — 0,20 мм). Температура (°C): колонки — 125 (газ-носитель азот) или 140 (газ-носитель гелий); испарителя — 200; детектора — 200.

Форколонку (стеклянная трубка длиной 10 см, диаметром 2,5 мм) вставляют в хроматографическую колонку со стороны инжектора и заполняют той же фазой, что и колонку. Расход газа-носителя 40 мл/мин., водорода — 28, воздуха — 250 мл/мин.

---