Методические указания по определению хостаквика в овощах, фруктах, биологическом материале, почве и воде методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 08.07.1987 № 4349-87)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХОСТАКВИКА В ОВОЩАХ, ФРУКТАХ, БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Д.Б. Гиренко, Л.Е. Морару, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).

Хостаквик — О,О-диметил-О-(6-хлорбицикло[3.2.0]гептадиен-1,5-ил)фосфат. Жидкость с т. кип. 90 — 91 °C при 2,7 Па. Давление паров при 25 °C 0,22 Па.

Хорошо  растворим  в н-гексане, метаноле, ксилоле  (при 25 °C до 1000 г/л),
хуже  растворим   в   н-гексане   (130 г/л).   Брутто-формула   C H  ClO P.
                                                                 9 12   4
Молекулярная  масса  250,5. Общепринятое название - гептенофос. ДСД - 0,003

мг/кг, МДУ в огурцах, томатах — 0,1 мг/кг, в яблоках — 0,1 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на определении хостаквика ГЖХ и ТСХ после извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке от коэкстрактивных веществ в системе жидкость — жидкость.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,05 — 0,5 мг/кг. Предел определения 0,05 мг/кг (мг/л). Остальные параметры даны в таблице 43.

Таблица 43

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОСТАКВИКА

Анализируемый объект	Среднее значение определения, %		Доверительный интервал среднего, %
	ГЖХ	ТСХ	ГЖХ	ТСХ
Картофель	69	65	+/- 3,9	+/- 6,2
Свекла	68	67	+/- 2,6	+/- 3,9
Огурцы	68	72	+/- 3,45	+/- 3,9
Томаты	67	64	+/- 4,1	+/- 5,2
Яблоки	70	68	+/- 2,4	+/- 3,9
Мясо	65	64	+/- 2,2	+/- 5,2
Печень	65	64	+/- 3,9	+/- 5,2
Вода	72	73	+/- 3,0	+/- 3,9
Почва	68	62	+/- 2,6	+/- 6,1

    Реактивы  и  растворы.  Ацетон ч.  Бензол ч.  Гексан ч.  Аммиак  водный
25-процентный, ч.д.а.  Нитрат серебра.  Хлороводородная кислота ч.  Сульфат

натрия безводный ч. Хлороформ ч. Хроматон N-AW (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30. Пластинки «Силуфол». Азот особой чистоты, содержание O не более 0,003%. 2 Водород. Воздух.

Подвижная фаза для ТСХ: 1 — бензол; 2 — гексан-ацетон (2:1).

Для приготовления проявляющего реагента (водно-ацетонового раствора нитрата серебра) навеску нитрата серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл аммиака (плотность 0,9 г/куб. см) и доводят объем до 100 мл ацетоном. Срок хранения в холодильнике 5 — 6 дней.

Основной стандартный раствор хостаквика, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Хранят в холодильнике не дольше 2 мес.

Приборы и посуда. Газовый хроматограф с ПФД по фосфору (типа «Цвет-164» или др.). Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей. Лампа ртутно-кварцевая. Посуда мерная. Воронки делительные вместимостью 500 и 1000 мл. Колбы: конические на 100 мл; грушевидные для отгонки растворителей. Камера хроматографическая. Пульверизатор стеклянный. Микрошприц на 10 мкл.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Измельченную пробу растительного материала (25 г) заливают 50 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной подкисленной HCl воды до pH 2 — 3 и дважды экстрагируют хостаквик хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, досуха упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона или гексана и хроматографируют.

Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, подкисляют 0,1 н хлороводородной кислотой до pH 2 — 3, хорошо перемешивают и экстрагируют хлороформом трижды порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 — 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона или гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды, экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 2 — 3, и дважды экстрагируют хостаквик хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, досуха концентрируют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

Пробу биологического материала массой 10 г (мышцы, печень, почки и др.) измельчают и заливают 30 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 500 мл подкисленной до pH 2 — 3 дистиллированной воды и экстрагируют хлороформом дважды порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона (гексана) и хроматографируют.

    Идентификация  и количественное определение хостаквика. При определении
методом   ГЖХ  используют  носитель  хроматон  N-AW  с  5%  SE-30.  Колонка
стеклянная  длиной  1  м,  диаметром  3 мм. Расход газа-носителя (азота) 50
мл/мин.; водорода  65  +/-  5  мл/мин.;  воздуха  120  +/-  5 мл/мин. Шкала

               -8

электрометра 2 x 10   А. Температура (°C): колонки - 180, испарителя - 220.
Вводимый  объем  4  мкл.  Линейный  диапазон  детектирования  0,6  - 50 нг.

Минимально детектируемое количество 0,6 нг. Время удерживания при указанных условиях 45 с.

При определении методом ТСХ пробу, сконцентрированную до 0,3 мл, количественно переносят на пластинку с сорбентом. Параллельно наносят серию

стандартных  растворов  с  содержанием  препарата 2; 5 и 10 мкг хостаквика.
Хроматографируют  первоначально  в  бензоле, просушивают, а затем в системе
гексан-ацетон   (2:1).    После    высушивания    пластинку    обрабатывают
водно-ацетоновым  раствором  нитрата  серебра  и  подвергают УФ-облучению в
течение  30  мин. Хостаквик проявляется в виде пятен черного цвета на белом
фоне (R  0,5 +/- 0,05).

   f

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества стандартного вещества (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты. Расчет количества препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) ведут по формуле:

                                 C  V S
                                  ст 2

X = ------, S V P ст 1

где:

C — содержание препарата во введенном в хроматограф стандарте, нг; ст

S — площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

S — площадь пика стандартного раствора препарата, введенного в ст хроматограф, кв. мм;

V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 1

V — общий объем экстракта после упаривания, мл; 2

P — навеска анализируемой пробы, г.

При определении методом ТСХ содержание хостаквика в исследуемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                                  A

X = -, P

где:

A — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

---