Временные методические указания по определению раундапа в воде методом хроматографии в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 № 4034-85)
21 ноября 1985 г. № 4034-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РАУНДАПА В ВОДЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1 Действующее вещество — N-(фосфонометил)-глицин.
1.2 Структурная и эмпирическая формулы:
O O
|| ||
HO-C-CH -NH-CH -P-OH C H O NP
3 2 | 3 8 5
OH
1.3. Химически чистое соединение — белое кристаллическое вещество, нелетучее, стабильное при условии хранения. Выше 50 °С разлагается.
Растворимость в воде: 1% при 25°. Нерастворим в большинстве органических растворителей.
Раундап — послевсходовый гербицид, уничтожает однолетние и многолетние злаковые и двудольные сорняки.
2. Методика определения раундапа в воде с помощью хроматографии в тонком слое
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении раундапа, очистке экстрактов на ионообменных смолах и хроматографировании в тонком слое пластинок: целлюлозы, «Силуфол UV-254» и «Фиксион 50х8», с последующим проявлением нингидрином.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Диапазон определяемых концентраций — 0,05 — 0,25 мг/л.
Среднее значение определения стандартных количеств — 85 — 90%.
Стандартное отклонение — 4,6%.
Относительное стандартное отклонение — 5,6%.
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95, n = 6 равен 5,5.
Погрешность определения — 6,9.
2.1.3 Избирательность метода
Определению раундапа мешают соединения, дающие цветную реакцию с нингидрином, — аминокислоты, пептиды, первичные и вторичные амины, однако очистка экстрактов на ионообменных смолах позволяет отнести метод к категории чувствительных с высокой степенью избирательности.
2.2. Реактивы и материалы
Анионообменная смола АВ-17-8, ГОСТ 20301-74.
Катионообменная смола КУ-2-8, ГОСТ 20298-74.
Бутиловый спирт нормальный, чда, ГОСТ 6006-78.
Бикарбонат аммония, чда (0,5 М раствор).
Натрий тетраборнокислый ОС-73-4, ТУ 6-09-3270-75 (0,1 М раствор в воде, рН = 9,18).
Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77.
Нингидрин, чда, ТУ 6-09-10-1384-79.
Проявляющий реактив — 0,5-процентный раствор нингидрина в этиловом спирте с 3 мл уксусной кислоты.
Соляная кислота, хч, ГОСТ 3118-77.
Стандартный раствор раундапа с содержанием 1 мг/мл химически чистого вещества с последующим разбавлением (0,2 мг/мл или 200 мкг/мл) для нанесения маленьких концентраций.
Уксусная кислота ледяная, хч, ГОСТ 18290-72.
Этиловый эфир уксусной кислоты, хч, ГОСТ 22300-81.
Этиловый спирт, хч, ТУ 6-09-1710-77.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Аппарат для встряхивания проб, АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Бумага хроматографическая марки «Б» или «М».
Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Колбы конические на 50, 100 и 500 мл, ГОСТ 10394-72.
Микроразмельчитель тканей РТ-2.
Пипетки на 0,1; 0,2; 2,0; 5,0; 10,0 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Стаканы химические, ГОСТ 10394-72 (на 100 и 250 мл).
Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Приготовление растворов
а) 0,1 М водный раствор натрия тетраборнокислого (38,1 г натрия тетраборнокислого 10-водного растворяют в небольшом количестве воды, а затем доводят ею до 1 л).
б) 0,5% раствор нингидрина (0,5 г нингидрина растворяют в 100 мл этанола и добавляют 3 мл уксусной кислоты).
Для пластинок из целлюлозы можно нингидрин добавлять в подвижный растворитель (50 мг нингидрина на 100 мл раствора), встряхивают его до полного растворения нингидрина, затем ставят пластинки.
Пластинки снимают и без опрыскивания проявителем ставят их в сушильный шкаф при 100 — 110° на 15 минут.
в) 0,5 М раствор бикарбоната аммония (39,5 г бикарбоната аммония растворяют в воде и доводят до 1 литра).
2.4.2 Приготовление целлюлозных пластинок
Получение порошка целлюлозы: берут три листа хроматографической бумаги и режут на мелкие кусочки. В приготовленный раствор концентрированной соляной кислоты с этанолом (140 мл HCl + 600 мл спирта) опускают бумагу и кипятят в течение 2-х часов с обратным холодильником. После кипячения бумагу промывают водой на воронке Бюхнера с вакуумным насосом до исчезновения кислоты в промывных водах. (Проба с метилоранжем: в кислой среде метилоранж розового цвета.)
Затем промывают бумагу чистым спиртом для сушки (500 мл), досушивают в сушильном шкафу при 60 °С в течение 10 часов. Высушенную бумагу измельчают на мельнице и просеивают через капроновое сито.
Для пластинок берут 12,5 г порошка целлюлозы, добавляют 77,5 мл дистиллированной воды и гомогенизируют на аппарате в течение 6 минут. Полученную массу наносят на стеклянные пластинки из расчета 10 мл на пластинку размером 10 х 20 см.
2.4.3 Отбор проб
Отбор проб осуществляется в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Зам. Главного государственного санитарного врача СССР за № 2051-79 от 21.08.79.
2.5. Проведение определения
Вода. К 200 мл предварительно отфильтрованной воды добавляют 25 г анионита, ставят на аппарат для встряхивания на 1 час, отфильтровывают через бумажный фильтр, фильтрат выбрасывают, а из анионита препарат извлекают 0,5 М раствором бикарбоната аммония (3 раза по 25 мл). В собранный элюат вносят катионит (25 — 30 г) и снова ставят на качалку на 1 час. Затем отфильтровывают через бумажный фильтр. Собранный элюат выпаривают в вакууме досуха при температуре не выше 40 °С. Осадок смывают небольшими порциями воды (0,1 — 0,3 мл) и наносят на хроматографические пластинки.
Хроматографирование. Водные растворы препарата наносят микропипеткой на пластинки, отступая на 2 см от нижнего края. Пластинки помещают в хроматографическую камеру. Для пластинок из целлюлозы подвижной фазой является смесь нормального бутанола, уксусной кислоты и воды (50:25:25), для пластинок «Силуфол» — этилацетат с водой (60:40), для «Фиксион» — 0,1 М раствор натрия тетраборнокислого в воде.
После окончания хроматографирования пластинки высушивают на воздухе, опрыскивают 0,5% раствором нингидрина и ставят в термостат на 10 — 15 минут при температуре 110 °С. Раундап и его метаболит на пластинках проявляются в виде малиново-сиреневых пятен.
R раундапа и его метаболита для целлюлозных пластинок — 0,82 и 0,41; f
для "Фиксиона" - 0,85 и 0,70 соответственно. На пластинках "Силуфол" проявляется только раундап (R = 0,55 - 0,60).
f
Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.
2.6. Обработка результатов анализа
Концентрацию раундапа в воде определяют по следующей формуле:
А
Х — содержание раундапа в воде, мг/л;
V — объем воды, взятой для анализа (мл).
3. Техника безопасности
При проведении исследований по данной методике соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с ядовитыми веществами.
4. Настоящие Методические указания составлены по материалам лаборатории биохимии НИИ защиты растений (г. Ереван) с.н.с., к.б.н. Н.В. Бажановой и м.н.с. Ж.А. Арутюнян.
Методические указания апробированы в институте АзНИИРХ, г. Ростов-на-Дону (т. Кишнинова Т.С. и Игнатенко).