Временные методические указания по определению регулятора роста растений ЭБФ-5 в воде, растительном материале методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 № 4031-85)
21 ноября 1985 г. № 4031-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕГУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ ЭБФ-5 В ВОДЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
ЭБФ-5 — ди(бета-хлорэтил)-бета-[1-(2-бензилбензимидазолил)]-этилфосфонат.
OCH CH Cl
│ 2 2
CH -CH -P-OCH CH Cl
<pre class="legal-pre"> │ 2 2 ││ 2 2
N ││
// \ / \ O ───
│ ││ C-CH ──// \\</pre>
\\ / \ // 2 \ ___ /
N ───
Эмпирическая формула C H Cl N O P.
20 23 2 2 3
Химически чистый препарат представляет собой белое кристаллическое вещество с точкой плавления 179 — 181 °С, хорошо растворимое в ацетоне, этаноле, хлороформе, тетрагидрофуране, диметилсульфоксиде и малорастворимое в воде.
Лабораторный образец гигроскопичен и кроме основного продукта (97%) содержит небольшое количество воды (1,1%), исходного 2-бензилбензимидазола (0,3%) и продуктов дегидрохлорирования винифоса и целевого продукта (1,6%).
ЭБФ-5 рекомендуется для применения в качестве эффективного регулятора роста растений на посевах моркови, свеклы, томатов, огурцов.
2. Методика определения ЭБФ-5 в воде, растительном материале
Метод основан на извлечении ЭБФ-5 из пробы хлороформом, очистке экстракта в кислой среде, реэкстракции препарата в щелочной среде и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Для дополнительной очистки применяют ступенчатую хроматографию. Первой подвижной фазой служит бензол, второй — смесь бензол — ацетон (1:1). Зоны локализации ЭБФ-5 обнаруживаются в виде ярко-розовых пятен после обработки пластинки 0,2% водным раствором эозина. Пределы обнаружения составляют 0,02 — 0,15 мг/кг (л). Аналитическая открываемость 93,1 — 85,6%.
2.1.2 Метрологическая характеристика методики (при n = 5, р = 0,95)
| Анализируемый | Метрологические параметры | |||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг (л) | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (л) | Среднее значение % обнаружения при n = 5 | Стандартное отклонение, S | Доверительный интервал среднего результата | Относительное стандартное отклонение, S , % 2 |
| Вода Томаты Огурцы Свекла Морковь | 0,02 0,15 0,15 0,15 0,15 | 0,02 — 3,3 0,15 — 1,5 0,15 — 1,5 0,15 — 1,5 0,15 — 1,5 | 93,1 87,2 88,0 85,6 86,0 | 1,13 1,95 0,88 1,93 0,63 | +/- 2,37 +/- 5,44 +/- 2,47 +/- 5,37 +/- 1,75 | 1,21 2,23 1,00 2,25 0,73 |
2.1.3 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии ХОП, а также близких по области применения таких регуляторов роста растений, как гидрел, дигидрел, кампозан, ГМК, ДЯК.
2.2. Реактивы и материалы
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.
Азотнокислое серебро, х.ч., ГОСТ 1277-75.
Аммиак водный, ч.д.а., ГОСТ 3760-79.
Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 3118-77, 0,5 н водный раствор.
Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77, 20% водный раствор.
Эозин Н индикатор, ч.д.а., ТУ 6-09-183-70, 0,1% водный раствор.
Пластинки «Силуфол» UV-254 (ЧССР).
Фильтры бумажные «синяя лента», ТУ 6-09-1678-77.
Стандартный раствор ЭБФ-5 в хлороформе с содержанием 100 мкг/мл.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.
Аппарат для встряхивания жидкости в лабораторной посуде, ТУ 64-1-1081-73.
Прибор для отгонки растворителя, ТУ 25-11-917-74.
Водоструйный вакуумный насос стеклянный, ГОСТ 10696-75.
Колба круглодонная короткогорлая со шлифом, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные на 100 мл, ГОСТ 8613-75.
Воронки химические, ГОСТ 8513-75.
Колбы конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Проявляющий реактив — аммиакат серебра
0,85 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких мл дважды дистиллированной воды, прибавляют 2,0 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранят раствор в темной склянке не более 3-х месяцев.
2.4.2 Проявляющий реактив — 0,1% раствор эозина
0,1 г эозина растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Хранят раствор не более 3-х месяцев.
2.5. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва, 1980 г., № 2051-79 от 21.08.1979).
Отобранные пробы хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в сухом и защищенном от света месте.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Экстракция и очистка
Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды порциями по 50 мл. Объединенные экстракты высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 55 — 60 °С. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку.
Растительный материал (томаты, огурцы, свекла, морковь). 20 г измельченной пробы экстрагируют хлороформом на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр. Пробы трижды промывают хлороформом. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55 — 60 °С. К сухому остатку прибавляют 10 — 15 мл 0,5 н соляной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят в делительную воронку. Колбу еще 2 раза промывают 10 — 15 мл 0,5 н соляной кислоты. Объединенный кислотный экстракт промывают дважды по 15 — 20 мл гексана. Гексановые экстракты отбрасывают, а раствор кислоты подщелачивают 20% раствором едкого натра до рН = 8 — 9 и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды по 15 — 20 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сернокислым натрием, растворитель отгоняют при температуре 55 — 60 °С, остаток наносят на пластинку.
2.6.2 Хроматографирование
После отгонки растворителя пробы с помощью хлороформа количественно наносят на пластинки «Силуфол» на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки
(размеры пластинки 15 х 15 см). Хроматографирование проводят восходящим способом. Сначала хроматографируют в бензоле. При этом ЭБФ-5 остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. После подсушивания пластинки на воздухе проводят вторичное хроматографирование в
смеси бензол — ацетон (1:1). После хроматографирования пластинку высушивают и опрыскивают проявляющим реактивом — 0,1% раствором эозина. Зоны локализации препарата обнаруживаются в виде темно-розовых пятен с величиной R = 0,6 +/- 0,01. f
Альтернативные условия хроматографирования: подвижная фаза - гексан - ацетон (10:7), проявитель - водный раствор аммиаката серебра. Пластинку до
и после обработки проявляющим реактивом подвергают УФ-облучению в течение 1
часа до обработки и 5 - 10 минут после обработки. В этих условиях ЭБФ-5 проявляется в виде бурых пятен на светло-сером фоне с величиной R = 0,45 +/- 0,01.
f
2.7. Обработка результатов анализа
Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора.
Содержание ЭБФ-5 в анализируемой пробе определяют по следующей формуле:
А
А — количество ЭБФ-5, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
Р — масса или объем исследуемой пробы, г или л.
3. Требования техники безопасности
При работе с ЭБФ-5 необходимо выполнять все требования техники безопасности, необходимые при работе с ядовитыми и легковоспламеняющимися веществами.
4. Разработчики
1. Бунятян Юрий Андраникович — филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.
2. Петросян Маргарита Суреновна — филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.
3. Джагацпанян Сусанна Арутюновна — филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.