Методические указания по определению примицида в растительном материале и в почве с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 № 4028-85)
21 ноября 1985 г. № 4028-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРИМИЦИДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ И В ПОЧВЕ
С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1 Примицид, пиримифос-этил, ПП 211
Контактный инсектицид. Предложен для борьбы с обитающими в почве вредителями, в том числе с проволочниками на картофеле и кукурузе; мухами на луке, моркови и капусте; долгоносиками на сахарной свекле.
1.2. Активное вещество: 0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-0,0-диэтилтиофосфат.
1.3 Структурная формула:
CH
S / 3 (C H O) P -O-// \\N C H N PO S 2 5 2 \ ___ / 13 24 3 3
N ───
1.4. Технический продукт — бесцветная с желтым оттенком маслянистая жидкость. Растворимость в воде при 30 °С 1 мг/куб. м, смешивается со многими органическими растворителями. Устойчив в нейтральной среде, сравнительно быстро разрушается при нагревании с растворами щелочей и минеральных кислот. Выпускается в виде 30% с.п., 50-процентного э.к., 5 и 10-процентных гранул и 20-процентного порошка для обработки семян.
ЛД для крыс при оральном введении 140 — 200 мг/кг, при аппликации на 50 кожу 1000 — 2000 мг/кг. Токсичен для пчел и большинства других полезных
насекомых.
2. Методика определения примицида в растительном материале и в почве хроматографией в тонком слое и газожидкостной хроматографией
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении примицида из растительных проб 50-процентным водным ацетоном. Из почвы экстрагируют инсектицид смесью ацетона с 0,05 н раствором CaCl в соотношении 1:1. Очистка экстрактов -
2
способом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями. Количественное определение проводят методами газожидкостной хроматографии и хроматографией в тонком слое.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
ГЖХ ТСХ Минимально детектируемое количество 1 мг 0,5 мкг Нижний предел определения 0,001 мг/кг 0,1 мг/кг
в растениях 89 - 95 85 - 90 в почве 94 - 98 90 - 95
С — среднее значение определения, %
в растениях 32,2 87,5 в почве 95,8 92,5
в растениях 4,56 3 в почве 2,16 3
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5, %
для растений 92,2 -/+ 12,6 87,5 +/- 8,3 для почвы 95,8 +/- 5,9 92,5 +/- 8,3
2.1.3 Избирательность метода
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Кальций хлористый, ч., ГОСТ 4161-77.
Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а, ГОСТ 4166-76.
Уголь активированный марки Кад-молотый или ОУ-А.
Хроматографические пластинки «Силуфол-UV-254», ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% SE-30 (0,125 — 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% XE-60 (0,125 — 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 5% OV-17 (0,125 — 0,160 мм), ЧССР.
Хроматон N-супер, пропитанный 2% ПЭГС (полиэтиленгликольсукцинат) (0,125 — 0,160 мм), ЧССР.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
1. 0,5% раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (ч., ТУ 6-09-05-63-74), после опрыскивания пластинки нагревают при 110 °С в течение 5 мин.
2. 2% раствор 4-(р-нитробензил)пиридина (ч., ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, после нагревания хроматограммы при 110 °С в течение 5 мин. и вновь опрыскивают 10% раствором тетраэтиленпентамина (ч., ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.
3. 0,05% раствор бромфенолового синего (ч.д.а., ТУ 6-09-3719-74) в 0,5% раствора азотнокислого серебра (х.ч., ГОСТ 1277-75), приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 — 40 °С вновь опрыскивают 5% раствором уксусной кислоты (х.ч., ГОСТ 18290-72) или лимонной кислоты (х.ч., ГОСТ 3652-69).
Основной стандартный раствор примицида в ацетоне или в гексане — 100 мкг/куб. см.
Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора — 10 мкг/куб. см, 1 мкг/куб. см, 0,1 мкг/куб. см.
2.3. Приборы и аппаратура, посуда
Газовый хроматограф «Цвет-106».
Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм.
Ротационный вакуумный испаритель, ТУ 25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.
Колбы конические со шлифами и пробирками на 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные для отгонки растворителей, ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки на 250 куб. см, ГОСТ 8613-75.
Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Микропипетки 0,1 — 0,2 куб. см, ГОСТ 20292-74.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.
Пробирки с притертыми пробками на 10 куб. см, ГОСТ 1770-74.
2.4. Подготовка к определению
Растительную пробу измельчают на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву естественной влажности или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.
Отбор проб растений и почвы проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб с/х продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. № 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов
Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 куб. см.
Растительные пробы экстрагируют трижды, заливая 50 куб. см смеси ацетон - вода (1:1) и встряхивая в течение 30 мин. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник, после охлаждения фильтруют через стекловату. Далее экстракты в делительных воронках экстрагируют трижды по 20 мл гексаном. Гексановый слой сливают в конические колбы с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1 куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С. При необходимости экстракты подвергают дополнительной очистке. После
концентрирования под вакуумом до 1 куб. см остаток растворителя испаряют на воздухе. К сухому остатку приливают 30 куб. см смеси ацетона с 0,05 н CaCl 2
(соотношение компонентов 1:1), пробу переносят в делительную воронку, фильтруя через бумажный фильтр, колбу споласкивают еще 20-ю куб. см смеси ацетона с хлористым кальцием. В воронку добавляют 30 куб. см гексана для извлечения токсиканта. Гексановую фракцию отделяют, водосолеацетоновую дважды промывают 20-ю куб. см гексана. Объединенный гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и концентрируют до 0,5
- 1,0 куб. см.
Почва. 10 г пробы экстрагируют трижды, заливая 50-ю куб. см смеси ацетон - 0,05 н водный раствор CaCl (1:1) и встряхивая в течение 30 мин.
2
Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды 20-ю куб. см гексана. Гексановый слой сливают в конические колбы на 100 куб. см с безводным сернокислым натрием (30 — 50 г) с добавлением незначительного количества активированного угля (20 — 50 мг) для очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1 куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С.
2.5.2 Хроматография в тонком слое
Экстракт после определения ГЖХ доупаривают до 0,2 куб. см и наносят при помощи капиллярной пипетки на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки «Силуфол-UV-254». Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы и наносить экстракт в 3 — 5 точек диаметром не более 0,5 см. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 5, 10, 20 мкг действующего вещества препарата в зависимости от количества препарата в пробе. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования со смесью растворителей гексан:ацетон в соотношении 4:1. Край пластинки должен быть погружен в смесь растворителей на 0,5 см. Когда фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают, подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из проявляющих реагентов (2.3). Необходимо отметить, что наиболее чувствительным проявителем является 2,6-дибром-N-хлорхинонимин, а также 4-(р-нитробензил)пиридин.
Пластинки «Силуфол-UV-254» можно смотреть под хроматоскопом без предварительной обработки проявителем.
R примицида в системе гексан — ацетон (4:1) составляет 0,6 +/- 0,05. f
2.5.3 Определение методом газожидкостной хроматографии
После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 — 2 куб. см гексана, колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (1 — 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.
УСЛОВИЯ ГАЗОЖИДКОСТНОГО ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ПРИМИЦИДА <*>
<*> Хроматограф «Цвет-106» с ТИД, скорость движения ленты самописца 0,2 см/мин.
| Насадка колонки | 5% SЕ-30 на хроматоне N-супер (0,125 — 0,160 мм) | 5% ХЕ-60 на хроматоне N-супер (0,125 — 0,160 мм) | 5% OV-17 на хроматоне N-супер (0,125 — 0,160 мм) | 2% ПЭГС на хроматоне N-супер (0,125 — 0,160 мм) |
|---|---|---|---|---|
| Длина колонки и внутренний диаметр, см х мм | 100 х 3,0 | 100 х 3,0 | 100 х 3,0 | 100 х 3,0 |
| Рабочая шкала электрометра, А | -10 2 х 10 | -10 2 х 10 | -10 0,4 х 10 | -10 0,4 х 10 |
| Скорость потока азота, мл/мин. | 27 | 27 | 27 | 27 |
| Скорость потока водорода, мл/мин. | 16 | 16 | 16 | 16 |
| Скорость потока воздуха, мл/мин. | 312 | 312 | 312 | 312 |
| Температура колонки, °С | 205 | 205 | 230 | 210 |
| Температура испарителя, | 230 | 230 | 230 | 230 |
| °С | ||||
| Время удерживания | 4 мин. | 3 мин. | 3 мин. | 2 мин. |
| примицида | 26 сек. | 2 сек. | 15 сек. | 22 сек. |
2.6. Обработка результатов анализа
Содержание примицида в исследуемом объекте в случае тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:
А
Х — содержание препарата в пробе, мг/кг;
А — количество препарата, обнаруженное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;
Р — навеска исследуемой пробы, г.
Содержание примицида в пробе в случае газожидкостной хроматографии определяют методом стандартов и рассчитывают по формуле:
S х Y х С х Y
2 1 1 3
S х Y х Р
1 2
где:
Х — количество препарата в пробе, мг/кг;
С — количество препарата в стандартном растворе, мкг/куб. см; 1
S — площадь пика стандартного раствора, кв. мм; 1
S — площадь пика анализируемого раствора, кв. мм; 2
Y — объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, куб. мм; 1
Y — объем анализируемого раствора, введенный в хроматограф, куб. мм; 2
3
3. Техника безопасности
Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.
4. Разработчики
Петрова Т.М., Хамнаева Е.И. — Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.