Временные методические указания по определению актеллика и базудина в чае с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3888-85)
22 мая 1985 г. № 3888-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА И БАЗУДИНА В ЧАЕ С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препаратов
1.1.1 Актеллик.
1.1.2. 0,0-диметил-0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-тиофосфат.
1.1.3 Структурная формула:
CH
CH O S ── / 3
3 \ || // \\
P -O-\ __ /N Мол. масса 305,35.
/ N ── \
CH O N(C H )
3 2 5 2
1.1.4 Пиримифос-метил, ПП-511.
1.1.5 Химически чистое вещество актеллика представляет собой жидкость
светло-желтого цвета. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей, слабо растворим в воде - 5 мг/л при температуре 30 °С.
-4
Удельный вес — 1,157 при 30 °С, давление пара — 1 х 10 . Разрушается в сильнокислых и щелочных средах.
Препарат малотоксичен для теплокровных животных — при оральном введении
ЛД для мышей составляет 1180 мг/кг. Препарат опасен для птиц (ЛД 30 - 50 50
60 мг/кг) и рыб.
1.2.1 Базудин.
1.2.2. 0,0-диэтил-0-(2-изопропил-4-метилпиримидил-6) тиофосфат.
1.2.3 Структурная формула:
CH
| 3
C H O S // \ CH
| 2 5 \ / | P -O- | // | \N / 3 -CH Мол. масса 304,36. \ |
|---|
C H O \\ / CH
2 5 \\ / 3
N
1.2.4 Алоксон, алфатокс, диазинон, дицид, экзодин.
1.2.5 Действующее вещество базудина — бесцветная маслянистая жидкость
с температурой кипения 89 °С при 0,1 мм рт. ст. Давление паров при 20 °С -5 составляет 8,4 х 10 мм рт. ст. Летучесть — 1,39 мг/куб. м при 20 °С. Инсектицид нестабилен в кислой и щелочной средах. Растворимость в воде — 40 мг/л, хорошо растворим в большинстве органических растворителей.
Препарат токсичен для теплокровных животных - при оральном введении ЛД для мышей составляет 50 - 135 мг/кг, для крыс - 100 - 250 мг/кг.
50
2. Методика определения фосфорорганических пестицидов в чае
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции фосфорорганических пестицидов из чая водным ацетоном, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан и анализе содержания фосфорорганических пестицидов при помощи газожидкостной хроматографии или хроматографии в тонком слое. В последнем случае необходима предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
ГЖХ ТСХ
Минимально детектируемое количество:
актеллика 0,5 - 1,0 нг 1 - 3 мкг базудина 0,1 нг 1 - 3 мкг
Нижний предел обнаружения в чае, мг/кг:
актеллика 0,1 базудина 0,1
актеллика 85 - 95 базудина 85 - 95
_
е — среднее значение определения, %:
актеллика 89,2 базудина 87,6
S — стандартное отклонение, %:
актеллика 3,55 базудина 4,86
Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 10, %, для:
актеллика 89,2 +/- 8,02 базудина 87,6 +/- 10,98
2.1.3 Избирательность метода
Карбофос, протиофос и хостаквик определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77.
Алюминия оксид для хроматографии, ч, ТУ 6-09-3916-75, I активности, нейтральный.
Пластинки «Силуфол-254», ЧССР.
Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% ХЕ-60 (0,160 — 0,200 мм).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
1. 0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина (ч, ТУ 6-09-05-63-74) в гексане.
2. 2-процентный раствор 4-(n-нитробензил)пиридина (ч, ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина (ч, ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.
Стандартные растворы актеллика и базудина в гексане — 1 мкг/куб. см для ГЖХ, 100 мкг/куб. см для ТСХ.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф «Цвет-106» или аналогичный прибор с термоионным детектором (ДТИ).
Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.
Испаритель ротационный вакуумный, ТУ 6-08-917-74, или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом.
Колбы конические со шлифами и пробками на 250 куб. см или 300 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные со шлифами на 100 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Воронки делительные на 500 куб. см, ГОСТ 8613-75.
Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм).
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.
Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-74.
Пипетки на 0,1 и 1,0 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные на 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Колонки стеклянные для газожидкостной хроматографии (1000 х 3 мм).
2.4. Отбор проб и подготовка к анализу
2.4.1 Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Средняя проба чая для анализа — 10 г.
2.4.2 Приготовление хроматографической колонки
Стеклянные хроматографические колонки (1000 х 3 мм) заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,160 — 0,200), пропитанным 5% ХЕ-60 по стандартной методике (см. Столяров, Савиков, Витенберг. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии, 1978 г.).
2.4.3 Построение градуировочного графика
Для количественного определения актеллика и базудина во введенной аликвоте используют метод абсолютной калибровки, который заключается в построении графической зависимости высоты (площади) хроматографического пика от содержания вещества в стандартной пробе.
По оси ординат откладывают значения высот (площадей) хроматографических пиков в мм (кв. мм или мкВ х сек.), а по оси абсцисс — абсолютное количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.
Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб в тех же условиях, особенно при работе с ДТИ.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов чая
Из проб чая актеллик, базудин извлекают 75 — 100 куб. см смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 — 60 мин. После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру для вымораживания восков. Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее проводят переэкстракцию актеллика, базудина из объединенного фильтрата в гексан, прибавляя последний порциями по 25 куб. см, каждый раз встряхивая в делительной воронке в течение 3 — 5 минут. Экстракцию повторяют 3 раза. Гексановые фракции высушивают фильтрованием через слой безводного сернокислого натрия (20 — 25 г), объединяют и концентрируют до небольшого объема (1 — 0,5 куб. см) под вакуумом при температуре 40 °С.
Экстракты из проб чая нуждаются в дополнительной очистке, которая проводится на колонке (300 х 15 мм), заполненной последовательно сернокислым натрием (3 — 4 г), окисью алюминия (4 — 5 г) и снова сернокислым натрием (1,5 — 2 г). Колонку предварительно промывают бензолом (30 — 40 куб. см). Актеллик, базудин элюируют бензолом (20 куб. см), растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество инсектицида в пробе определяют хроматографическими методами.
При газожидкостной хроматографии очистку экстрактов чая можно не проводить.
2.5.2 Условия хроматографирования в тонком слое
Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку «Силуфол-UV 254». Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 3,5 и 10 мкг действующего вещества актеллика или базудина. Хроматографируют в системе гексан — ацетон (4:1), проветривают. Для обнаружения определяемых соединений пластины просматривают в УФ-свете хроматоскопа и обрабатывают либо 0,25-ным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, затем нагревают в течение 30 секунд в термостате при температуре 100 — 120 °С, либо 2-процентным раствором 4-(р-нитробензил) пиридина с последующим нагреванием при 100 — 120 °С и обработкой 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина.
Значение R актеллика - 0,50 +/- 0,01, R базудина в указанной системе f f
растворителей — 0,38 +/- 0,01.
Содержание пестицида в исследуемом объекте (чае) вычисляют по формуле:
А
А — количество препарата, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Р — навеска исследуемой пробы, мг;
Х — содержание препарата в пробе, мг/кг.
2.5.3 Условия газожидкостного хроматографирования
С помощью микрошприца аликвотную часть исследуемого раствора (1 - 2 куб. мм) вводят в испаритель хроматографа с термоионным детектором (ДТИ),
фазы и носители описаны в разделе 2.4.2. Скорость газоносителя — азота — 25
куб. см/мин., водорода - 15 - 18 куб. см/мин., воздуха - 170 куб. см/мин. Температура термостата колонок - 190 °С, детектора и испарителя - 220 °С.
-10
Рабочая шкала электрометра — 2,5 х 10 А. Скорость движения ленты самописца — 1 см/мин.
Время удерживания актеллика в данных условиях — 2 мин. 51 сек., базудина — 54 сек.
Количественное определение препарата в анализируемой пробе проводят с помощью градуировочного графика (см. 2.4.3).
Содержание препарата в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
С х К
Х — содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг;
С — общий объем раствора, куб. см;
У — объем аликвоты, введенный в хроматограф, куб. мм;
К — количество препарата в аликвоте, определенное по градуировочному графику, нг;
Р — навеска анализируемого вещества, г.
Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное количество гексана или разбавляя отобранную аликвоту до определенного объема.
2.6. Обработка результатов анализов приведена в 2.5.2 и 2.5.3.
3. Требования безопасности
Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.
4. Разработчики
Петрова Т.М., Красникова Н.Г., Мельникова З.В. — Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.