Методические указания по определению актеллика и базудина в чае методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3888-85)

22 мая 1985 г. № 3888-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА И БАЗУДИНА В ЧАЕ МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Т.М. Петровой, З.В. Мельниковой (ВИЗР).

    Краткая    характеристика    препаратов.   Актеллик   -  O-(2-
диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-O,O-диметилтиофосфат.      Брутто-
формула   C  H  O N PS.  Молекулярная  масса  305,0.  Общепринятое

       11 20 3 3

название - пиримифос-метил. Химически  чистое вещество актеллика -
жидкость  светло-желтого  цвета. Хорошо растворяется в большинстве
органических  растворителей,  слабо  растворим в воде - 5 мг/л при
температуре   30   °C.  Давление  пара  0,013  Па.  Разрушается  в
сильнокислых  и  щелочных  средах.  ДСД  актеллика 0,01 мг/кг, МДУ

актеллика в час 0,5 мг/кг.

    Базудин        -        O-(2-изопропил-6-метилпиримидил-4)-O,O
диэтилтиофосфат. Брутто-формула  C  H  O N PS. Молекулярная  масса

                              12 21 3 2

304,36.   Общепринятое название - диазинон.  Действующее  вещество
базудина  - бесцветная  маслянистая  жидкость  с т. кип. 89 °C при

                                                        -2

13,3 Па. Давление паров при 20 °C составляет 0,12 x 10 Па. Летучесть 1,39 мг/куб. м при 20 °C. Инсектицид нестабилен в кислой и щелочной среде. Растворимость в воде 40 мг/л, хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Принцип метода. Метод основан на экстракции ФОП из чая водным раствором ацетона, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан и анализе содержания ФОП при помощи ГЖХ или ТСХ. В последнем случае необходима предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.

Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество методом ГЖХ составляет: для актеллика — 0,5 — 1,0 нг, базудина — 0,1 нг. Нижний предел определения актеллика и базудина 0,1 мг/кг. Среднее значение определения (n = 10, p = 0,95) актеллика 89,2 +/- 8,02%; базудина 87,6 + 10,98%. Минимально детектируемое методом ТСХ количество актеллика и базудина 1 — 3 мкг.

Избирательность метода. Карбофос, протиофос и хостаквик определению не мешают.

    Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а.  Гексан  х.ч.  Бензол  х.ч.
Сульфат  натрия  безводный  ч.д.а.  Хлорид   натрия   х.ч.   Оксид
алюминия   для   хроматографии   ч.    I    степени    активности,
нейтральный.   Пластинки  "Силуфол"   УФ   .  Хроматон  N-AW-DMCS,

                                    254

пропитанный 5% XE-60 (0,160 — 0,200 мм). Азот особой чистоты. Водород электролитический. Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты: № 1 — 0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина ч. в гексане; № 2 — 2-процентный раствор 4-(п-нитробензил) пиридина ч. в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина ч. в ацетоне, 0,05 н водный раствор хлорида кальция.

Стандартные растворы актеллика и базудина в гексане — 1 мкг/мл для ГЖХ, 100 мкг/мл для ТСХ.

Приборы и посуда. Хроматограф «Цвет-106» или аналогичный прибор с ТИД. Аппарат для встряхивания колб. Испаритель ротационный вакуумный или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом. Хроматоскоп. Колбы: конические со шлифами и пробками на 250 или 300 мл; круглодонные со шлифами на 100 мл; мерные на 100 мл. Воронки делительные на 500 мл. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Камера хроматографическая. Опрыскиватель стеклянный. Пульверизаторы стеклянные. Пипетки на 0,1 и 1,0 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Микрошприц МШ-10М. Термостат. Колонки стеклянные для ГЖХ длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм.

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. Стеклянные хроматографические колонки заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм), пропитанным 5% XE-60 по стандартной методике.

Построение градуировочного графика. Для количественного определения актеллика и базудина во введенной аликвоте используют метод абсолютной калибровки, который заключается в построении графической зависимости высоты (площади) хроматографического пика от содержания вещества в стандартной пробе. По оси ординат откладывают значения высот (площадей) хроматографических пиков в мм (кв. мм), а по оси абсцисс — абсолютное количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.

Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб в тех же условиях, особенно при работе с ТИД.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Выделяют среднюю пробу чая массой 10 г. Из проб чая актеллик и базудин извлекают 75 — 100 мл смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 — 60 мин. После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру для вымораживания восков. Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее проводят переэкстракцию актеллика и базудина из объединенного фильтрата в гексан, прибавляя последний порциями по 25 мл, каждый раз встряхивая в делительной воронке в течение 3 — 5 мин. Экстракцию повторяют три раза. Гексановые фракции высушивают фильтрованием через слой безводного сульфата натрия (20 — 25 г), объединяют и концентрируют до небольшого объема (1 — 0,5 мл) под вакуумом при температуре 40 °C.

Экстракты из проб чая нуждаются в дополнительной очистке, ее проводят на колонке длиной 30 см с внутренним диаметром 15 мм, заполненной последовательно сульфатом натрия (3 — 4 г), оксидом алюминия (4 — 5 г) и снова сульфатом натрия (1,5 — 2 г). Колонку предварительно промывают бензолом (30 — 40 мл). Актеллик и базудин элюируют бензолом (20 мл). Растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество инсектицида в пробе определяют хроматографическими методами.

При ГЖХ очистку экстрактов чая можно не проводить.

Хроматографирование в тонком слое. Пробу с помощью капилляра или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол» УФ . Параллельно на пластинку наносят серию стандартных 254 растворов с содержанием 3; 5 и 10 мкг действующего вещества актеллика или базудина. Хроматографируют в системе гексан — ацетон (4:1), проветривают. Для обнаружения определяемых соединений пластины просматривают в УФ-свете хроматоскопа и обрабатывают либо 0,2-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (затем нагревают в течение 30 с в термостате при температуре 100 -

120 °C), либо 2-процентным  раствором 4-(п-нитробензил)-пиридина с
последующим   нагреванием   при   100  -  120  °C   и   обработкой

10-процентным раствором тетраэтиленпентамина.

    Значение  R  актеллика  0,50 +/- 0,01, R  базудина в указанной
               f                            f

системе растворителей — 0,38 +/- 0,01.

    Газожидкостное   хроматографирование.  С  помощью  микрошприца
аликвотную  часть  исследуемого  раствора  (1  -  2  мкг) вводят в
испаритель  хроматографа  с  ТИД.  Скорость  потока  газа-носителя
(азота)  25  мл/мин.,  водорода  -  15 - 18 мл/мин., воздуха - 170
мл/мин.  Температура  (°C):  термостата колонок - 190, детектора и

                                                        -10

испарителя  -  220.  Рабочая  шкала  электрометра  2,5  x 10    А.
Скорость  движения  ленты  самописца  1  см/мин. Время удерживания

актеллика в данных условиях — 2 мин. 51 с, базудина — 54 с.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ТСХ содержание пестицида в исследуемом объекте (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                              A

X = -, P

где:

A — количество препаратов, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P — навеска исследуемой пробы, г.

Количественное определение препарата в анализируемой пробе при использовании метода ГЖХ проводят с помощью градуировочного графика. Содержание препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                             CV

X = ---, V P 1

где:

V — общий объем раствора, мл;

V — объем аликвоты, введенный в хроматограф, мкл; 1

C — количество препарата в аликвоте, определенное по градуировочному графику, нг;

P — навеска анализируемого вещества, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное количество гексана или разбавляя отобранную аликвоту до определенного объема.

Требования безопасности. Соблюдают общепринятые правила безопасности при работе с горючими растворителями и ФОП.

---