Методические указания по определению дифоса (абата) в продуктах растениеводства методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3886-85)
22 мая 1985 г. № 3886-86
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ
РАСТЕНИЕВОДСТВА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(Дополнение к № 1350-75 от 22.09.75)
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Характеристика анализируемого пестицида
Бис(0,0-Диметилфосфорил-0-фенил-4)сульфид.
S S (CH O) P-O-// \\-S-// \\-O-P-(OCH ) . 3 2 \ ___ / \ ___ / 3 2 Эмпирическая формула: C H O P S .
16 10 6 2 3
Синонимы: абат, абат 500 Е, абат 4 Е, OMS-786.
Химически чистое вещество — белые кристаллы. Технический препарат — коричневая жидкость, содержащая 90 — 95% действующего вещества. Препарат нерастворим в воде, хорошо растворяется в органических растворителях (ацетоне, гексане, хлороформе, эфире, ацетонитриле). Устойчив к воздействиям слабых щелочей (при рН 8 и температуре 20 °С не гидролизуется в течение нескольких недель). Выпускается в форме 30% к.э. Зарубежный аналог дифоса — абат выпускается в виде 50% к.э. и 25% о.п.
Относится к малотоксичным соединениям. ЛД при введении препарата в 50
желудок белых крыс составляет 1360 - 2300 мг/кг, для белых мышей - 460 мг/кг. Проникает через кожу. Для кроликов при накожном нанесении ЛД - 970
50
- 1930 мг/кг. Раздражающее действие выражено слабо. Коэффициент кумуляции
- 5,7. Является инсектицидом контактно-кишечного действия. Эффективен в борьбе с личинками комаров, мух, вредными насекомыми домашних животных, при защите сельскохозяйственных культур от клопов, трипсов и других насекомых.
МДУ в сахарной свекле, овощах, цитрусовых и хлопковом масле — 0,3 мг/кг, в мясе, яйце — 1 мг/кг, в молоке — не допускается. ПДК в кормах для сельскохозяйственных животных на откорме — 0,25 мг/кг, лактирующих животных — не допускается.
2. Методика определения дифоса в продуктах растениеводства методом трехслойной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции препарата из анализируемого объекта ацетоном, осаждении коэкстрактивных веществ из водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на холоде, переэкстрагировании дифоса в гексан, дополнительной очистке экстракта на колонке с силикагелем АСК, элюировании пестицида смесью бензола с гексаном, хроматографировании на пластинках «Силуфол» и проявлении азотнокислым серебром с бромфеноловым синим.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
- Диапазон определяемых концентраций пестицида в анализируемой пробе — 0,2 — 25 мкг.
- Предел обнаружения — 0,2 мкг в пробе или 0,02 мг/кг.
- Размах варьирования — 70 — 90%.
- Среднее значение определения стандартных количеств — 79,8%.
- Стандартное отклонение — 11,6.
- Относительное стандартное отклонение — 0,27.
2.2. Реактивы
Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-81.
Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Кислота уксусная ледяная, х.ч., ГОСТ 18290-72.
Кислота лимонная, ч.д.а., ГОСТ 3652-74.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.
Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77.
Свинец уксуснокислый или свинец уксуснокислый основной, ч.д.а., ТУ 6-09-4140-75.
Серебро азотнокислое, ч., ГОСТ 1277-75.
Эфир диэтиловый, ГОСТ 6262-79.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный, ТУ 64-1-1081-73.
Весы торсионные — тип ВТ, ТУ 64-1-990-77.
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ 25-11-430-70.
Колонки стеклянные, внутренний диаметр 7 — 9 мм.
Опрыскиватели стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Пластинки «Силуфол» производства ЧССР.
Посуда химическая по ГОСТ 23932-79 (колбы конические с притертыми пробками на 100 мл, воронки делительные на 200 мл, воронки химические диаметром 5 см, пробирки мерные на 10 мл, цилиндры на 10, 50 и 100 мл, микропипетки, стаканы химические).
Центрифуга лабораторная стационарная ЦЛС-3 или аналогичная (объем стаканов 80 — 100 мл).
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Приготовление 20% водного раствора уксуснокислого свинца: 20 г уксуснокислого свинца растворяют в 80 мл дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца 20 г его растворяют при подогревании в 80 мл 5% уксусной кислоты и рН раствора доводят едким натрием до 5,4 — 5,6. Хранят в закрытой посуде.
2.4.2. Приготовление 10% водного раствора уксусной кислоты: в колбу к 10 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 90 мл дистиллированной воды.
2.4.3 Приготовление проявляющих реактивов
Реактив № 1 — 25 мг бромфенолового синего растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50 мл 0,25% раствором азотнокислого серебра (0,125 г азотнокислого серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и добавляют 35 мл ацетона). Хранят в закрытой посуде из темного стекла при температуре +4 — 6 °С в течение месяца.
Реактив № 2 — 2% раствор лимонной кислоты: 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят в закрытой посуде при температуре +4 — 6 °С в течение 5 — 6 дней.
2.4.4. Подготовка колонки для очистки экстрактов анализируемых проб: в нижний конец стеклянной колонки помещают ватный тампон, затем насыпают последовательно натрий сернокислый безводный слоем 1 см, силикагель АСК 5 — 6 см и опять натрий сернокислый безводный 1 см.
2.4.5. Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за № 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов.
Навеску измельченной растительной массы, корнеклубнеплодов по 10 г помещают в колбу с притертой пробкой, заливают 30 мл ацетона, тщательно перемешивают и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют ацетоном дважды порциями по 30 мл, встряхивая по 30 минут.
Ацетоновый экстракт отфильтровывают в чистую колбу через воронку с ватным фильтром. Пробы промывают 10 мл ацетона и пропускают через тот же фильтр. К объединенному экстракту добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл уксуснокислого свинца (при исследовании комбикорма 40 мл воды) и помещают в испаритель бытового холодильника на 1 час (экстракты комбикорма лучше оставлять в испарителе холодильника на ночь). Охлажденные пробы центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 3 минут. Надосадочную жидкость сливают в делительную воронку (при анализе комбикорма после центрифугирования надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через воронку с фильтром). В делительную воронку добавляют 10 мл 10% раствора уксусной кислоты и 60 мл дистиллированной воды (при анализе комбикорма 120 мл дистиллированной воды). Затем дифос реэкстрагируют из этой смеси гексаном трижды, используя по 15 мл экстрагента. При плохом разделении слоев в связи с образованием эмульсии добавляют 5 мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сернокислым натрием. Концентрирование гексановых экстрактов проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до 1 — 2 мл и пропускают для доочистки через колонку с силикагелем АСК. Выпаривательные чашки ополаскивают 2 — 3 раза 1 — 2 мл гексана и сливают в ту же колонку. Дифос элюируют 25 — 30 мл смеси бензол — гексан в соотношении 3:1. Затем бензол-гексановые экстракты концентрируют в сушильном шкафу при комнатной температуре до объема 0,1 — 0,2 мл.
2.5.2 Хроматографирование
Конечный экстракт наносят на пластинку «Силуфол» на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. Слева и справа наносят стандартные растворы с известным количеством дифоса. Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.
Пластинку помещают в камеру со смесью диэтилового эфира и н-гексана в соотношении 1:2. После того как фронт растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на воздухе до удаления растворителя.
2.5.3 Проявление
После испарения подвижных растворителей пластинку опрыскивают бромфеноловым синим с азотнокислым серебром и оставляют на воздухе для подсыхания. Затем пластинку обрабатывают 2% водным раствором лимонной кислоты. Дифос проявляется в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне.
Величина R составляет 0,32.
f
2.6. Обработка результатов
Количество дифоса в анализируемом объекте определяют путем сравнения площади и интенсивности окраски пятна пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы:
А x 100
Х — количество препарата в исследуемом материале, мг/кг, мг/л;
А — количество препарата, обнаруженное на пластинке, мкг;
М — масса исследуемой пробы, г или мл; 100
--- — поправка с учетом потерь пестицида в процессе анализа, где
К
К — процент определения препарата = 80%.
3. Требование безопасности
Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами и фосфорорганическими пестицидами.
4. Разработчики
Старшие научные сотрудники — Малинин О.А., доктор ветеринарных наук, Шуляк В.Д., кандидат биологических наук, Ярошенко В.И., кандидат ветеринарных наук, Зайцева Л.Д., кандидат ветеринарных наук, старший ветврач Ярошенко С.С.