Временные методические указания по определению дилора в меде методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3884-85)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИЛОРА В МЕДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого пестицида

Дилор (2,4,5,6,7,8,8-гептахлор-4,7-эндометиленбицикло/4.3.0/нонен-5).

Структурная формула:

      Cl

     / \\   /\

2

\ // / М.м. 375,34

      Cl

Синонимы: БЛ 2487, ГС 9160, бета-дигидрогептахлор.

Дилор — кристаллическое вещество кремового цвета со слабым запахом, температура плавления 135 — 137 °С. Плохо растворим в воде (при 21 °С 0,014 мг/л), но хорошо растворим почти во всех органических растворителях.

ЛД для крыс при введении в желудок 2000 — 9000 мг/кг. 50

Разрешен для применения в борьбе с колорадским жуком на картофеле, свекловичным долгоносиком на сахарной свекле, листовой филлоксерой на виноградной лозе и другими вредителями растений.

2. Методика определения дилора в меде методом тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении дилора из водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривании экстракта и очистке на колонке с окисью алюминия и определении хроматографией на пластинках «Силуфол УФ-254».

Количественное определение препарата проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

• Диапазон определения концентраций — 0,5 — 20 мкг пестицида в анализируемой пробе;
• предел обнаружения — 0,5 мкг или 0,05 мг/кг;
• размах варьирования — 88,4 — 97,4%;
• среднее значение определения стандартных количеств дилора — 94,1%;
• стандартное отклонение — 3,54;
• относительное стандартное отклонение — 0,037;
• доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 9 — 94,1 +/- 2,7.

2.1.3 Избирательность метода

Метод специфичен. Другие хлорорганические пестициды определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Алюминия окись II степени активности, просеянная через сито 250 меш и задержанная на сите 100 меш, ТУ 6-09-3916-75;

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79;

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78;

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76;

Свинец уксуснокислый, ТУ 6-09-4140-75;

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81;

Спирт этиловый 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77;

Эфир диэтиловый, хч, ГОСТ 6262-79;

Дилор, хч, или 80% с.п.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный, ТУ 1-1081-73;

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76;

Весы торсионные ВТ, ТУ 64-1-990-77;

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82;

Камеры хроматографические, ГОСТ 10565-75;

Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ 25-11-430-70;

Колонки хроматографические стеклянные с внутренним диаметром 8 — 9 мм — пипетки на 5 мл, ГОСТ 20292-74;

Пластинки для хроматографирования «Силуфол УФ-254» производства ЧССР;

Посуда химическая по ГОСТ 23932-79Е (колбы на 100 мл, микропипетки, пипетки, цилиндры мерные, стаканы химические, пробирки);

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74;

Чашки фарфоровые выпарительные, ГОСТ 9147-73;

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартного раствора дилора: 10 мг препарата хч или 12,5 мг 80% смачивающегося порошка растворяют в 100 мл гексана. Содержание пестицида составляет 100 мкг в 1 мл. Хранят в холодильнике в герметично закрытой посуде.

2.4.2 Приготовление проявляющего реактива

0,5% раствор азотнокислого серебра в этаноле — 0,5 г нитрата серебра растворяют в 2 — 3 мл дистиллированной воды и доводят 96% этиловым спиртом до 100 мл. Хранят в герметично закрытой посуде в защищенном от света месте. Пригоден для анализа не менее месяца при хранении в указанных выше условиях.

2.4.3 Приготовление хроматографических колонок

В качестве хроматографических колонок используют пипетки на 5 мл с внутренним диаметром 8 — 9 мм. Для этого в узкой градуированной части отрезают часть пипетки (отрезок 5 — 6 см), а в узкий конец оставшейся большей части пипетки вставляют ватный тампон и через воронку насыпают последовательно слой натрия сернокислого безводного, окиси алюминия II степени активности и натрия сернокислого безводного. Высота слоя окиси алюминия — 2 см, натрия сернокислого безводного — по 1 см. Подготовленную таким образом колонку фиксируют в штативе. Готовят колонку обычно перед использованием.

2.4.4 Приготовление хроматографических пластинок «Силуфол УФ-254».

Пластинку помещают в камеру с водой и после прохождения воды через всю пластинку ее вынимают и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 65 — 70° в течение 5 — 10 минут. Пластинки могут быть использованы непосредственно после приготовления или через 1 — 2 суток.

2.4.5. Отбор проб проводят в соответствии с унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, за № 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов

В колбу отвешивают 10 г меда, помешивая стеклянной палочкой, растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из водного раствора меда препарат экстрагируют 30 мл ацетона путем встряхивания пробы в течение 15 минут. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний (водный раствор меда) сливают в колбу и повторно экстрагируют 10 — 15 мл ацетона, встряхивая колбу в течение 10 минут. С помощью делительной воронки отделяют ацетоновый экстракт и объединяют его с первой порцией ацетона. Затем объединенный ацетоновый экстракт переносят в делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и 15 мл гексана и встряхивают в течение 2 минут. После разделения слоев нижний (водно-ацетоновый экстракт) сливают в чистую колбу, а верхний (гексановый) — в чистый химический стакан. Водно-ацетоновый экстракт переносят в ту же делительную воронку и дилор повторно реэкстрагируют 10 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют в делительной воронке, промывают 1 — 2 раза дистиллированной водой порциями по 50 мл, затем сушат 5 — 10 г безводного сернокислого натрия в течение 15 — 20 минут и отгоняют в фарфоровой чашке при температуре водяной бани в пределах 40 — 45 °С до объема 2 — 3 мл. Сконцентрированный гексановый экстракт в объеме 2 — 3 мл вносят в хроматографическую колонку, предварительно промытую 3 мл смеси гексан — эфир в соотношении 10:1, и дилор элюируют еще 3 мл этой же смеси. Элюат отгоняют под вытяжкой при комнатной температуре до объема 0,4 — 0,5 мл и переносят в мерную центрифужную пробирку.

2.5.2 Хроматография в тонком слое

Очищенный и упаренный гексановый экстракт с помощью микрошприца или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол УФ-254» на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края в одну точку. Диаметр пятна не должен превышать 5 — 6 мм. Рядом с пробой наносят известные количества дилора в гексане (стандарты). Затем пластинку развивают в хроматографической камере с гексаном и при подъеме подвижного растворителя на высоту 10 см от линии старта ее вынимают из камеры. После испарения гексана пластинку опрыскивают 0,5% раствором нитрата серебра в этаноле и сразу же помещают под лампу ПРК-4 на 5 — 10 минут в зависимости от концентрации препарата. На опрыскивание одной пластинки используют 2 — 3 мл проявляющего реактива (до появления глянца).

    Дилор  проявляется  в виде темно-серых пятен на  белом  фоне.  Величина
R  дилора составляет 0,45 - 0,48.

f

2.6. Обработка результатов

Количество дилора в меде определяют путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы расчета:

                                А х S
                                     2

Х = ------, S х P 1

где:

Х — содержание дилора в меде, мг/кг;

А — содержание препарата в стандартном растворе, наносимом на пластинку, мкг;

S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1

S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2

Р — масса исследуемой пробы меда, г.

Для более точного определения количества дилора в меде проводят два параллельных исследования проб. С этой целью рядом с опытной пробой первой повторности на пластинке наносят 2 и 8 мкг дилора в гексане. При определении содержания дилора по второй повторности пробы рядом с ней на пластинку наносят количества препарата в гексане, наиболее близкие к выявленному в пробе меда первой повторности и исходя из полученных результатов проводят расчет согласно приведенной выше формуле.

3. Требования безопасности

Соблюдаются обычные требования безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.

4. Разработчики

Временные методические указания подготовлены Ярошенко В.И. (Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии, г. Харьков).

Методические указания апробированы в Прибалтийском филиале ВИЗР (Горкун Г.А. и Ипатова Т.Н.).

---