Методические указания по определению дилора в меде методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3884-85)
22 мая 1985 г. № 3884-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИЛОРА В МЕДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны В.И. Ярошенко (УкрНИИЭВ).
Краткая характеристика препарата. Дилор (3а,4,7,7а- тетрагидро-4,7-метано-2,4,5,6,7,8,8-гептахлориндан) имеет брутто- формулу C H Cl . Молекулярная масса 375,34. Общепринятое 10 7 7 название - дигидрогептахлор. Кристаллическое вещество кремового цвета со слабым запахом, т. пл. 135 - 137 °C. Плохо растворим в воде (при 21 °C 0,014 мг/л), но хорошо растворяется почти во
всех органических растворителях.
Разрешен для применения против колорадского жука на картофеле, свекловичного долгоносика на сахарной свекле, листовой филлоксеры на виноградной лозе, а также против других вредителей растений.
Допустимая суточная доза (ДСД) 0,02 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на извлечении дилора из водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривании экстракта, очистке на колонке с оксидом алюминия и определении хроматографией на пластинках "Силуфол" УФ .
254
Количество препарата определяют, сравнивая интенсивность окраски и площадь пятен пробы и стандарта.
Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,5 — 20 мкг пестицида в анализируемой пробе. Предел обнаружения 0,5 мкг или 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств дилора 94,1%. Стандартное отклонение 3,54%. Относительное стандартное отклонение 0,037. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 9 +/- 2,7%.
Избирательность метода. Метод специфичен. Другие хлорорганические пестициды определению не мешают.
Реактивы и растворы. Оксид алюминия II степени активности, просеянный сквозь сито 250 меш и задержанный на сите 100 меш. Ацетон ч.д.а. Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Ацетат свинца. Нитрат серебра ч.д.а. Спирт этиловый 96-процентный. Эфир диэтиловый х.ч. Дилор х.ч.
Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный. Баня водяная. Весы торсионные ВТ. Воронки делительные. Камеры хроматографические. Камера для опрыскивания хроматограмм. Колонки хроматографические стеклянные с внутренним диаметром 8 - 9 мм. Пипетки на 5 мл. Пластинки для хроматографирования "Силуфол" УФ . Посуда химическая (колбы на
254
200 мл, микропипетки, пипетки, цилиндры мерные, стаканы химические, пробирки). Пульверизаторы стеклянные. Чашки фарфоровые для выпаривания. Шкаф сушильный.
Подготовка к определению. Приготовление стандартного раствора дилора: 10 мг препарата х.ч. или 12,5 мг 80-процентного смачивающегося порошка растворяют в 100 мл гексана. Содержание пестицида составляет 100 мкг в 1 мл. Хранят в холодильнике в герметично закрытой посуде.
Приготовление проявляющего реагента. 0,5-процентный раствор нитрата серебра в этаноле: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 2 — 3 мл дистиллированной воды и доводят 96-процентным этиловым спиртом до 100 мл. Хранят в герметично закрытой посуде в защищенном от света месте. Пригоден для анализа в течение 1 мес.
Приготовление хроматографических колонок. В качестве хроматографических колонок используют пипетки на 5 мл с внутренним диаметром 8 — 9 мм. Для этого в узкой градуированной части отрезают кусочек пипетки (отрезок 5 — 6 см), а в узкий конец оставшейся пипетки вставляют ватный тампон и через воронку насыпают последовательно слой безводного сульфата натрия, оксида алюминия II степени активности и опять сульфата натрия. Высота слоя оксида алюминия — 2 см, сульфата натрия — по 1 см. Колонку фиксируют в штативе. Готовят ее обычно перед использованием.
Приготовление хроматографических пластинок «Силуфол» УФ . 254
Пластинку помещают в камеру с водой, после прохождения воды через всю пластинку ее вынимают и 5 - 10 мин. выдерживают в сушильном шкафу при температуре 65 - 70 °C. Пластинки могут быть использованы непосредственно после приготовления или через 1 - 2
сут.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. В колбу отвешивают 10 г меда, помешивая стеклянной палочкой, растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из водного раствора меда препарат экстрагируют 30 мл ацетона, встряхивая пробу в течение 15 мин. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний (водный раствор меда) сливают в колбу и повторно экстрагируют 10 — 15 мл ацетона, встряхивая колбу 10 мин. С помощью делительной воронки отделяют ацетоновый экстракт и объединяют его с первой порцией ацетона. Затем объединенный ацетоновый экстракт переносят в делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и 15 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев нижний (водно-ацетоновый экстракт) сливают в чистую колбу, а верхний (гексановый) — в чистый химический стакан. Водно-ацетоновый экстракт переносят в ту же делительную воронку и дилор повторно экстрагируют 10 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют в делительной воронке, промывают 1 — 2 раза дистиллированной водой порциями по 50 мл, затем сушат 5 — 10 г безводного сульфата натрия в течение 15 — 20 мин. и отгоняют в фарфоровой чашке при температуре водяной бани 40 — 45 °C до объема 2 — 3 мл. Полученный концентрат (2 — 3 мл) переносят в хроматографическую колонку, предварительно промытую 3 мл смеси гексана с эфиром (10:1), и дилор элюируют еще 3 мл этой же смеси. Элюат концентрируют под вытяжкой при комнатной температуре до объема 0,4 — 0,5 мл и переносят в мерную пробирку.
Тонкослойная хроматография. Очищенный и упаренный гексановый экстракт с помощью микрошприца или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ на расстоянии 1,5 см
254
от ее нижнего края в одну точку. Диаметр пятна не должен превышать 5 — 6 мм. Рядом с пробой наносят известные количества дилора в гексане (стандарты). Затем пластинку помещают в хроматографическую
камеру с гексаном. При подъеме подвижного растворителя на высоту 10 см от линии старта ее вынимают из камеры. После испарения гексана пластинку опрыскивают 0,5-процентным раствором нитрата серебра в этаноле и сразу же помещают под лампу ПРК-4 на 5 - 10 мин. в зависимости от концентрации препарата. Для опрыскивания
одной пластинки требуется 2 — 3 мл проявляющего реагента.
Дилор проявляется в виде темно-серых пятен на белом фоне. Величина R дилора составляет 0,45 - 0,48.
f
Обработка результатов анализа. Количество дилора в меде (X, мг/кг) определяют путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов препарата и рассчитывают по формуле:
AS
2
A — содержание препарата в стандартном растворе, наносимом на пластинку, мкг;
S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1
S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2
P — масса исследуемой пробы меда, г.
Для более точного определения количества дилора в меде проводят два параллельных исследования проб. Рядом с опытной пробой первой повторности на пластинку наносят 2 и 8 мкг дилора в гексане. При определении содержания дилора во второй повторности пробы рядом с ней на пластинку наносят количества препарата в гексане, наиболее близкие к выявленному в первой повторности. Получив результаты, проводят расчет по той же формуле.
Требования безопасности. Соблюдают обычные правила безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.