Временные методические указания по определению методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии аналога ювенильного гормона п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне пшеницы, почве, воде и зеленых листьях растений
(утв. Минздравом СССР 12.04.1985 № 3254-85)
12 апреля 1985 г. № 3254-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ АНАЛОГА ЮВЕНИЛЬНОГО ГОРМОНА П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА В ЗЕРНЕ ПШЕНИЦЫ, ПОЧВЕ, ВОДЕ И ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ РАСТЕНИЙ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
п-Хлорфениловый эфир гераниола-1-(4-хлорфенокси)-3,7-диметил-2,6-октадиен.
// \\ CH -CH=CH -CH -CH -C=CH-CH -O-\ __ /-Cl C H ClO CH CH 3 3 М.м. 264,5.
20
Желтоватая жидкость со слабым запахом, п = 1,5291, температура Д
кипения при 1 мм рт. ст. 155 °С, плохо растворим в воде, растворим в органических растворителях, стабилен в нейтральной среде. ЛД для
50
крыс — более 5000 мг/кг. Рекомендуется использовать для борьбы с вредителями овощных и оранжерейных культур, зерна.
2. Методика определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне пшеницы, почве, воде и зеленых листьях растений
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении п-хлорфенилового эфира гераниола органическим растворителем, очистке экстрактов методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, идентификации методом тонкослойной хроматографии и количественном определении методом газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным детектором на неподвижных фазах SE-30 и XE-60.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Диапазон определяемых концентраций 0,002 — 5,0 мг/кг. В таблицах 1 и 2 приведены средние значения определений, стандартное отклонение и доверительный интервал для различных концентраций.
В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ (ДЛЯ n = 4)
| Анализируемый объект | Диапазон задаваемых концентраций, мг/кг | Размах варьирования в % | Среднее значение определения в % | Относительное стандартное отклонение в % | Доверительный интервал в % при Р = 0,95 |
|---|---|---|---|---|---|
| Зерно Вода Почва Листья | 0,10 — 2,87 -3 (2 — 5) х 10 0,05 — 1,00 0,24 — 5,00 | 83 — 91 72 — 99 75 — 96 68 — 86 | 87,1 88,2 86,4 74,3 | 1,2 5,2 5,2 8,5 | 3,2 14,0 14,0 13,4 |
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЖХ МЕТОДА КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОГО П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА
В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
| Объект | Задано, мг/кг | Число параллельных определений | Обнаружено в % при Р = 0,95 | Стандартное отклонение, % | Доверит. интервал, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Зерно | 2,876 2,014 0,096 -3 | 4 3 3 | 71,6 +/- 4,4 73,9 +/- 3,8 71,5 +/- 15,2 | 2,8 1,6 6,1 | 4,4 3,8 15,2 |
| Вода | 5,03 х 10 -3 2,02 х 10 | 3 4 | 93,4 +/- 12,8 68,7 +/- 4,8 | 5,2 3,0 | 12,8 4,8 |
| Почва | 1,00 0,048 | 5 3 | 75,3 +/- 3,6 77,2 +/- 5,9 | 2,9 2,4 | 3,6 5,9 |
| Листья | 5,00 0,24 | 4 4 | 76,8 +/- 7,4 76,2 +/- 12,7 | 4,7 8,0 | 7,4 12,7 |
2.1.3 Избирательность метода в присутствии пестицидов, близких по химическому строению и области применения
Близким по строению и области применения является р-бромфениловый эфир гераниола, однако в системах гексан — этилацетат (9:1) и гексан — ацетон (4:1) они четко разделяются. Фосфорорганические пестициды не мешают определению п-хлорфенилового эфира гераниола.
2.2. Реактивы и материалы
Циклогексан, ч., ТУ 6-09-4357-77.
Натрий сернокислый б/в, х.ч., ГОСТ 4166-81.
Алюминия окись для хроматографии II ст. активности, ТУ 6-09-3916-83.
Алюминия окись II ст. акт. по Брокману, пр-во ВНР «Реахим».
Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30.
Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм) с 5% XE-60.
Стандартный раствор п-хлорфенилового эфира гераниола в гексане — 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф серии «Цвет» с пламенно-ионизационным детектором.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Колбы конические емк. 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные емк. 500, 250, 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Воронка делительная емк. 2 л, ГОСТ 8613-75.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Пипетки 1 — 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Микропипетки 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.
Стеклянные пластины для ТСХ размером 8 х 16 мм.
Эксикатор для проявления пластин в парах йода.
Сосуды для ТСХ объемом не менее 1 л с крышками.
Сосуды для препаративной ТСХ (кристаллизаторы с крышками).
Микрошприц емк. 10 мкл, МШ, ТУ 5Е.2.833.024.
2.4. Отбор проб и подготовка к определению
2.4.1 Отбор проб
Отбор проб производят в соответствии с Унифицированными правилами отбора сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, № 2051-79.
Для анализа используют средние пробы измельченной и просеянной почвы массой 50 г, воды объемом 1 л, зерна пшеницы 50 г, зеленых листьев растений — 10 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция, очистка экстракта
Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, заливают 150 мл диэтилового эфира и встряхивают 1 час. Раствор фильтруют через слой сульфата натрия б/в. Повторяют экстракцию дважды с 70 мл растворителя в течение 15 минут. Объединенные экстракты концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до 1 — 2 мл при температуре 30°. Остаток количественно переносят на пластину с незакрепленным слоем окиси алюминия II ст. активности по Брокману. Толщина слоя — 2 мм. Вещество элюируют циклогексаном в сосуде для препаративной ТСХ, размещая пластину под углом 7 — 10°. Зону, соответствующую п-хлорфениловому эфиру (по сопоставлению со стандартом, который обнаруживают в аналогичных условиях при проявлении в парах йода), количественно переносят на фильтр Шотта № 3 и промывают подогретым до 40 — 50° гексаном. Фильтрат (очищенный экстракт) при необходимости концентрируют на ротационном испарителе и анализируют методами ТСХ и ГЖХ.
Вода. Пробу воды объемом 1 л помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют гексаном порциями 150, 80 и 80 мл по 2 минуты. Органический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют при температуре не выше 40° и далее очищают и анализируют, как описано выше.
Зерно. 50 г зерна помещают в коническую колбу и экстрагируют гексаном трижды, используя последовательно 70, 30 и 30 мл растворителя в течение 60, 3 и 3 минут. Объединенный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.
Зеленые листья растений. Навеску 10 г измельченного растительного материала помещают в коническую колбу и трижды экстрагируют гексаном порциями по 70 мл в течение 40, 10 и 10 минут. Объединенный растительный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.
2.5.2 Идентификация и количественное определение п-хлорфенилового эфира гераниола
2.5.2.1 Метод тонкослойной хроматографии
Для качественной идентификации п-хлорфенилового эфира гераниола в воде,
почве, зерне пшеницы и зеленых листьях растений методом ТСХ см. "Методические указания по определению остаточных количеств некоторых аналогов ювенильного гормона: алтосида, алтозара и р-бромфенилового эфира гераниола в растениях картофеля и почве методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии" (часть XIII, 1983 г.). Нижний предел обнаружения п-хлорфенилового эфира гераниола методом ТСХ - 2 мкг или 0,002 мг/л для воды, 0,04 мг/кг - для почвы и проб растительного происхождения. В таблице 3 приведены значения R п-хлорфенилового эфира гераниола в
f
некоторых системах подвижных растворителей.
ЗНАЧЕНИЯ R П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА f В НЕКОТОРЫХ СИСТЕМАХ (24 °С)
| Элюент | R f | |
| на пластинах Силуфол | на пластинах из окиси алюминия | |
| Циклогексан Гексан — этилацетат, 4:1 Гексан — этилацетат, 9:1 Гексан — диэтиловый эфир, 9:1 | 0,10 0,78 0,57 0,75 | 0,50 — - 0,90 |
2.5.2.2 Метод газожидкостной хроматографии
Носитель — Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм).
Неподвижная фаза — 5% XE-60 либо 5% SE-30.
Расход азота — 60 мл/мин. — 40 мл/мин.
Температура испарителя — 210 °С — 230 °С.
Температура колонки — 180 °С — 205 °С. -11
Шкала электрометра — 2 х 10 А.
Линейный диапазон детектирования — 10 — 100 нг.
Минимально детектируемое количество — 10 нг.
Время удерживания — 7,58 мин. (на XE-60) и 4,11 мин. (на SE-30).
Вводимый в колонку газового хроматографа объем анализируемого экстракта — 1 - 2 мкл.
2.6. Обработка результатов
Содержание п-хлорфенилового эфира гераниола в пробе при определении методом ГЖХ рассчитывают по формуле:
С х V х h х V
ст 1 2 3
V х h х М
2 1
где:
Х — содержание вещества в пробе, мг/кг, мг/л;
С — содержание вещества в стандарте, мкг/мл; ст
V — объем стандарта введенного в колонку газового хроматографа, мкл; 1
V — объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового 2 хроматографа, мкл;
V — общий объем анализируемой пробы, мл; 3
h — высота пика стандарта, мм; 1
h — высота пика анализируемой пробы, мм; 2
3. Требования техники безопасности
В процессе работы по данным Методическим указаниям нужно придерживаться правил техники безопасности, рекомендованных при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
Методические указания подготовлены Албул И.А. — Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений, г. Кишинев.