Методические указания по определению сульфидофоса в мясе, молоке и кормах методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 03.01.1985 № 3198-85)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУЛЬФИДОФОСА В МЯСЕ, МОЛОКЕ И КОРМАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

Сульфидофос — 0,0-диметил-0(3-метил-4-метилтиофенил)тиофосфат, действующее вещество — фентион.

Структурная формула:

    CH O    S       CH
      3 \ //    ─── / 3
         P -O-//   \\-S-CH                                      C  H  O PS
        /     \ ___ /     3                                      10 15 3  2
    CH O        ───
      3                                                         М.м. 278,3.

Химически чистое вещество — бесцветная маслянистая жидкость с температурой кипения 105 — 109 °С при 0,01 мм рт. ст., давление пара при 20 °С — 3 х 10 мм рт. ст., летучесть — 0,46 мг/куб. м. Растворимость в воде при 20 °С около 54 мг/л. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей. Гидролизуется в кислой и щелочных средах.

Выпускается в виде 50-процентного эмульгирующего концентрата. Действующее вещество препарата умеренно токсично для теплокровных животных. ЛД для крыс при оральном применении — 250 мг/кг. Нанесение на кожу крыс 50 1000 мг/кг не вызывает симптомов отравления.

Сульфидофос является инсектицидом контактного и кишечного действия. Наряду с высокой токсичностью в отношении некоторых насекомых обладает длительным защитным действием.

Сульфидофос опасен для пчел, и его нельзя применять во время цветения растений.

Синонимы сульфидофоса — байтекс, лебайцид, тигувон.

2. Определение сульфидофоса в мясе, молоке и кормах методом тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

    Метод  основан  на извлечении сульфидофоса из проб исследуемых объектов
органическими  растворителями,  очистке  и  концентрировании  экстрактов  с
последующим  хроматографическим  разделением  на  тонком  слое  сорбента  и
проявлением.    Идентификацию    препарата    проводят   по   величине   R

                                                                      f

соответствующих  стандартов, а количественное определение - путем измерения
площадей  пятен  пробы  и  стандартов,  учитывая визуально интенсивность их

окраски.

2.1.2 Избирательность метода

Определению сульфидофоса не мешают пестициды, применяемые в настоящее время в сельском хозяйстве.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Сульфидофос определяемых концентраций 0,05 — 1 мг/кг. Предел обнаружения 0,5 мкг в анализируемой пробе, что соответствует 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств составляет в органах и тканях 90%, в кормах — 80%, число параллельных определений n = 5.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76; н-гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78; спирт-ректификат 96%, ТУ 6-09-1710-77; сернокислый натрий б/в, ч.д.а., ГОСТ 4166-76; бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-3719-83; азотнокислое серебро, х.ч., ГОСТ 1277-75; лимонная кислота, х.ч., ГОСТ 3652-74.

2.3. Приборы и посуда

Хроматографическая пластинка «Силуфол» (ЧССР), хроматографическая камера, пипетки и микропипетки разные, колбы мерные, склянки с притертой пробкой, стеклянные палочки, стеклянные воронки, делительные воронки, фарфоровые чашки, фильтровальная бумага, обезжиренная вата, ступка.

Приготовление стандартного раствора сульфидофоса. На торсионных весах взвешивают 10 мг препарата и растворяют в мерной колбе 100 мл ацетона. В одном мл содержится 1 мкг препарата.

Приготовление проявляющего реактива. Смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра. 1) 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра (1:3); 2) 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Последний разбавляют раствором азотнокислого серебра до объема 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Срок хранения 10 дней.

Лимонная кислота 2-процентный раствор. Необходима для осветления фона пластинки после опрыскивания проявляющей смесью.

2.4. Описание определения

2.4.1 Экстракция и очистка

Ткани животных. Исследуемые пробы мышц, печени, почек, сердца, легких и др. весом 10 г тщательно измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 — 15 г сернокислого безводного натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформом при комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора. Экстракт переносят в делительную воронку, сюда же добавляют 25 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа. Осторожно смесь взбалтывают в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 0,5 мл ацетона и хроматографируют.

Молоко. Пробы молока (10 мл) переносят в склянки, добавляют 30 мл ацетона и взбалтывают в течение 2-х минут. Затем экстракт фильтруют через вату в фарфоровую чашку, добавляют 70 мл дистиллированной воды и ставят в морозильную камеру холодильника на 1 час. После чего экстракт через обезжиренный слой ваты фильтруют в делительную воронку и экстрагируют с 30 мл хлороформа в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.

Зеленые растения (клевер, трава и т.д.). Пробы весом 5 г измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 г безводного сернокислого натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформа при комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный хлороформом бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора, перемешивая стеклянной палочкой. Экстракт фильтруют через смоченную спиртоводным раствором вату в делительную воронку. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.

2.4.2 Хроматографирование

    Анализируемый  экстракт наносят при помощи микропипетки в одну точку на
расстоянии  1,5  -  2  см  от  края  пластинки  так, чтобы диаметр пятна не
превышал  1  см.  Справа  и  слева  от  пробы  на  расстоянии  2 см наносят
стандартный  раствор,  содержащий  0,5,  1  и  5 мкг препарата. Пластинки с

нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, в которую

налита  смесь  н-гексана  и  ацетона  в соотношении 20:80. Край пластинки с
нанесенными  растворами должен быть погружен в растворитель не более чем на
0,5  см. Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока фронт растворителя
не  поднимется  на  высоту  10  см.  После чего ее вынимают, отмечают фронт

растворителя, подсушивают на воздухе и опрыскивают сначала смесью растворов

бромфенолового  синего и азотнокислого серебра. Затем пластинки опрыскивают
2-процентным раствором лимонной кислоты.  В  присутствии сульфидофоса сразу

же после опрыскивания на желтом фоне сорбента появляются ярко-синие пятна в

зависимости  от  концентрации препарата. Чувствительность метода составляет
0,05  мг/кг,  R   сульфидофоса  равна 0,5. Точность метода в зависимости от

           f

2.5. Обработка результатов

Расчет производят по формуле:

                                х С

Х = ---, с в

где:

Х — содержание препарата, мг/кг, мг/л;

х — площадь пятна исследуемой пробы, кв. мм;

с — площадь пятна стандарта, кв. мм;

С — количество препарата в стандарте, мкг;

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и фосфорорганическими соединениями.

4. Настоящие Методические указания разработаны Т.Г. Аббасовым и Г.У. Узаковой (ВНИИ ветеринарной санитарии).

---