Методические указания по определению хлорофоса в картофеле методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 03.01.1985 № 3185-85)
3 января 1985 г. № 3185-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОФОСА В КАРТОФЕЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны К.Ф. Новиковой, Ф.Р. Мельцер, Л.И. Лещинской (ВНИИХСЗР).
Краткая характеристика препарата приведена в Унифицированной методике. МДУ хлорофоса в картофеле 0,1 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на извлечении хлорофоса из картофеля ацетоном, перераспределении из водно-ацетонового раствора в хлороформ, очистке экстракта микросублимацией в вакууме с последующим определением тонкослойной хроматографией.
Метрологическая характеристика метода. Предел обнаружения в хроматографируемой пробе: при проявлении резорциновым проявителем — 1 мкг, азотно-серебряным проявителем — 2 мкг. Предел обнаружения в картофеле соответственно 0,05 и 0,1 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств хлорофоса (при n = 15) 75,7%. Стандартное отклонение (при n = 15) +/- 4,2%. Доверительный интервал среднего определения (при p = 0,95 и n = 5) 75,7 +/- 5,2.
Избирательность метода. Метод селективен. ДДТ, гексахлоран, гептахлор определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Хлороформ ч.д.а. Бензол ч.д.а. Гексан ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч., 1 н раствор. Хлорид натрия. Сульфат натрия безводный х.ч. Резорцин х.ч., 2-процентный водный раствор. Аммиак водный (плотность 0,9 г/куб. см). Нитрат серебра ч. Глицерин ч.
Проявляющие реагенты: № 1 — растворяют 0,5 г AgNO в 5 мл воды, 3 добавляют 4 мл NH OH и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном. Раствор 4
хранят в темной склянке на холоде. Он стабилен в течение 5 - 7 дней. На одно определение расходуют 2 - 3 мл раствора; N 2 - перед употреблением смешивают равные объемы 2-процентного раствора резорцина и 1 н раствора
NaOH. На одно определение расходуют 2 — 3 мл проявителя.
Хлорофос с содержанием основного вещества не менее 95%. Стандартные растворы хлорофоса в ацетоне с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Стандартные растворы хлорофоса стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 мес. Пластинки "Силуфол" УФ .
254
Приборы и посуда. Хроматографическая камера с притертой крышкой. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 или аналогичный. Лампа УФ-света, медицинская МРТУ или аналогичная. Прибор для микросублимации в вакууме. Насос высокого разряжения. Пульверизаторы стеклянные. Делительные воронки на 750 мл. Колбы: конические на 250 и 50 мл; круглодонные на 500 мл; грушевидные на 50 мл; плоскодонные на 100 и 500 мл. Мерные цилиндры на 100 мл. Пробирки с оттянутым концом на 5 мл.
Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют за 1 ч до начала хроматографирования системами подвижных растворителей: гексан-ацетон (1:1) и бензол-ацетон (2:1). Подвижный растворитель в камере должен находиться не выше 0,7 — 1 см над уровнем дна камеры.
Ход анализа. Навеску (20 г) разрезанного на мелкие кусочки картофеля (с длиной граней не более 0,5 см) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 100 мл и заливают 50 мл ацетона. Экстракцию хлорофоса проводят при помощи механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 750 мл. Экстракцию хлорофоса проводят еще дважды тем же количеством ацетона. К объединенному в делительной воронке экстракту добавляют 10 г хлорида натрия и 50 мл хлороформа, предварительно насыщенного водой. Воронку закрывают пробкой на шлифе и ее содержимое энергично встряхивают в течение нескольких секунд. Дают слоям разделиться, нижний хлороформный слой переносят в коническую колбу на 500 мл. Эту операцию повторяют еще 4 раза.
Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (20 — 25 г) в течение нескольких минут. Экстракт фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 50 мл и отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 3 — 5 мл. Остаток количественно переносят в патрон сублиматора и испаряют растворитель на горячей водяной бане досуха. В патрон вставляют «палец» сублиматора и проводят сублимацию в течение 30 мин. на глицериновой бане при температуре 130 — 140 °C и давлении 40 — 80 Па (0,3 — 0,6 мм рт. ст.).
После охлаждения и снятия разряжения «палец» сублиматора осторожно вынимают из патрона и смывают с него хлорофос 10 мл ацетона через воронку в
грушевидную колбу с оттянутым концом вместимостью 50 мл. Удаляют растворитель на ротационном вакуумном испарителе до объема 0,1 - 0,2 мл. Оставшуюся каплю с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ , предварительно промытую в
254
хроматографической камере ацетоном и высушенную при комнатной температуре. По краям от пробы наносят серию стандартов хлорофоса: 0,5; 1,0; 2,0; 3,0;
4,0 и 5,0 мкг.
Серию стандартов готовят следующим образом. В пробирку с оттянутым концом с помощью пипетки вместимостью 1 мл переносят 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора хлорофоса с содержанием 10 мкг/мл. Содержимое пробирок концентрируют на горячей водяной бане до объема 0,1 - 0,2 мл и наносят на пластинку с помощью стеклянных капилляров. Пластинку помещают в камеру, на дно которой налит бензол. Когда фронт растворителя достигнет края хроматографической пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе. Высушенную пластинку помещают в хроматографическую камеру, и развивают хроматограмму в системе подвижных растворителей - гексан с ацетоном (1:1) или бензол с ацетоном (2:1). После окончания хроматографирования пластинку сушат на воздухе, а затем обрабатывают проявляющим реагентом N 1 или N 2. При проявлении пластин проявляющим
реагентом № 1 обработанную хроматограмму помещают под лампу УФ-света на 5 -
7 мин. Хлорофос проявляется на пластинке в виде темно-серых пятен на светлом фоне с R 0,65 +/- 0,04. Пятна стабильны в течение длительного
f
времени. Линейный диапазон детектирования 0,5 — 5 мкг хлорофоса в хроматографируемой пробе.
При проявлении хроматограмм проявляющим реагентом № 2 хлорофос виден на пластинке в виде оранжевых пятен на светлом фоне с R 0,65 +/- 0,04 при f развитии хроматограмм в первой системе подвижных растворителей и 0,36 +/- 0,02 — при развитии хроматограмм во второй системе подвижных растворителей. Пятна стабильны 10 — 15 мин. Линейный диапазон детектирования 1 — 10 мкг в пробе.
Обработка результатов анализа. Содержание хлорофоса в пробе определяют, сравнивая площадь и интенсивность окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. При большом содержании хлорофоса в рабочую пробу после упаривания растворителя пипеткой вносят известное количество ацетона и хроматографируют аликвоту раствора.
Содержание хлорофоса в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
AV
где:
A — количество хлорофоса, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
V — общий объем раствора, из которого отбирают аликвоту, мл;
V — объем аликвоты, нанесенной на хроматографическую пластинку, мл a (при внесении всей пробы V = V ); a
P — навеска анализируемой пробы картофеля, г.
Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, принятые для работы с пестицидами и легковоспламеняющимися жидкостями.