Методические указания по определению 4-хлор-2 метилфеноксиуксусной кислоты (2М-4Х) в воде, почве, растительном масле и продуктах питания методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 21.11.1984 № 3161-84)
Внимание
Документ утратил силу на территории Российской Федерации в связи с изданием Постановления Минздрава России от 19.04.2001 № 10 Документ утратил силу на территории Российской Федерации в связи с изданием Постановления Минздрава России от 19.04.2001 № 10.
21 ноября 1984 г. № 3161-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 4-ХЛОР-2-МЕТИЛФЕНОКСИУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ (2М-4Х) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ И ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны В.Д. Чмилем, С.В. Чулковой (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. 2М-4Х (дикотекс, МЦПА) - 2-метил-4-хлорфеноксиуксусная кислота. Брутто-формула C H O Cl.
9 9 3
Молекулярная масса 200,6. Белое кристаллическое вещество со слабым запахом крезола, т. пл. 120 - 120,2 °C. Хорошо растворимо в этаноле, толуоле, четыреххлористом углероде, диэтиловом эфире, дихлорэтане, хлорбензоле и плохо - в воде (0,15 г в 100 г H O при 25 °C). Выпускается в виде
2
80-процентного водорастворимого порошка и 40-процентного водного раствора. Применяется в качестве гербицида в посевах льна, зерновых и злаковых культур, чаще всего в виде натриевых и калиевых солей. В зерне, рисе, картофеле, подсолнечном масле МДУ 0,05 мг/кг; горохе - 0,05 мг/кг. В воде рыбохозяйственных водоемов ПДК 0,02 мг/л; в водоемах санитарно-бытового
водопользования — 0,25 мг/л.
Принцип метода. Метод основан на экстракции 2М-4Х из гидролизованной пробы (растительный материал, молоко, масло) органическим растворителем, из проб воды и почвы — органическим растворителем с последующим определением методом ТСХ. С помощью предлагаемого метода можно определить 2М-4Х, находящуюся в анализируемой пробе как в свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов с эндогенными веществами пробы.
Метрологическая характеристика метода. Предел определения, мг/л или мг/кг: вода — 0,05; почва — 0,10; сено — 0,40; зерно — 0,03; молоко — 0,40; масло сливочное — 0,70; мясо — 0,50. Среднее значение определения при n = 6, %: 85; 75; 65; 65; 65; 85; 65; 75 соответственно.
Реактивы и растворы. Аммиак водный ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Ацетон х.ч. Гидрокарбонат натрия ч.д.а., 0,4 М водный раствор. Бромкрезоловый зеленый ч.д.а. н-Гексан х.ч. Гидроксид натрия х.ч., 0,1 М водный раствор. Пластинки для метода ТСХ типа «Силуфол». Проявляющие реагенты: № 1 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака, 25-процентный водный раствор, и доводят до метки ацетоном). При хранении в плотно закрытой склянке без доступа света годен для применения в течение месяца; № 2 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,04 г бромкрезолового зеленого, растворяют в 96-процентном этаноле, добавляют 0,1 М раствор гидроксида натрия до явно выраженного синего окрашивания и доводят до метки этанолом). Срок применения не ограничен. Силикагель ЛС 5/40 М для тонкослойной хроматографии с 13% гипса. Силикагель КСК. Хлороводородная кислота ч., 2 М водный раствор. Бензол х.ч. Стандартный раствор 2М-4Х в ацетоне концентрацией 100 мкг/мл. Уксусная кислота х.ч., ледяная. Фосфорно-вольфрамовая кислота х.ч., 40-процентный в.р. Хлороформ х.ч. Эфир. Этиловый спирт.
Приборы и посуда. Делительная воронка на 1 л. Колба Бунзена на 500 мл. Воронка Бюхнера, диаметр 13 см. Ротационный испаритель. Источник УФ-света. Водяная баня. Колбы: мерные на 10 и 100 мл; конические на 500 мл; двухгорлая круглодонная на 500 мл. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Лабораторный холодильник стеклянный. Камера для хроматографирования. Микропипетки. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм. Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Электроплитка. Аппарат для встряхивания. Сушильный шкаф.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды 250 — 750 мл помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1, тщательно перемешивают и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (100; 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку, промывают небольшими порциями дистиллированной воды (15 — 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод и затем трижды экстрагируют 0,5 М водным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50 мл. Объединенный водный экстракт 2 раза промывают хлороформом порциями 20 мл и 20 мл н-гексана, отбрасывая эти растворители, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1 и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный эфирный экстракт промывают дистиллированной водой порциями по 15 — 20 мл до нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном испарителе до объема 2 мл и затем досуха током сухого воздуха.
Пробу сухой почвы 100 г, растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 25 — 35 мл дистиллированной воды, 5 мл концентрированной хлороводородной кислоты, тщательно перемешивают, добавляют 150 мл ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч. Затем растворитель отфильтровывают под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр и почву на фильтре трижды промывают ацетоном порциями по 20 мл. Затем ацетон удаляют на ротационном испарителе, остаток из колбы переносят 100 мл дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 1, в делительную воронку, трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в воде.
Тщательно измельченную навеску из травы, сена, соломы, зерна 25 г (навеска зерна 50 г) помещают в круглодонную колбу на 1 л, приливают 100 мл 85-процентного водного раствора этилового спирта, тщательно перемешивают, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч, периодически перемешивая содержимое колбы. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр «черная лента» под вакуумом на воронке Бюхнера и промывают осадок на фильтре двумя порциями по 50 мл 85-процентного водного раствора этилового спирта. Затем этиловый спирт упаривают из фильтрата на ротационном испарителе, к остатку добавляют 12 мл концентрированной хлороводородной кислоты, 5 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч для разрушения конъюгатов 2М-4Х. После охлаждения гидролизат фильтруют через бумажный фильтр «черная лента» на воронке Бюхнера под вакуумом и промывают остаток на фильтре тремя порциями по 20 мл 2 М водного раствора хлороводородной кислоты. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 100; 50 и 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в воде.
Пробу молока 25 — 50 мл помещают в круглодонную колбу на 250 мл, прибавляют концентрированную хлороводородную кислоту (4,4 — 8,8 мл), тщательно перемешивают, присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню для гидролиза на 1 ч. После охлаждения в колбу приливают 7,5 — 15,0 мл 40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, энергично встряхивают, приливают 100 — 200 мл дистиллированной воды и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 раза 2 М водным раствором хлороводородной кислоты порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в растительном материале.
Пробу сливочного масла (25 г) растворяют в 100 мл н-гексана, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, приливают 100 мл 2 М водного раствора хлороводородной кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч. Содержимое колбы перемешивают с помощью электромешалки. После охлаждения содержимого колбы слои разделяют в делительной воронке и гексановый слой дважды экстрагируют 2 М водным раствором хлороводородной кислоты порциями по 50 мл. Объединенный хлороводородный экстракт промывают дважды н-гексаном порциями по 25 мл, отбрасывая этот растворитель, и затем экстрагируют диэтиловым эфиром 3 раза по 50 мл. Эфирный экстракт промывают небольшими количествами (10 — 15 мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод, трижды экстрагируют 2М-4Х 0,5 М водным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано выше.
Пробу из мяса (25 — 50 г) измельчают на мясорубке, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, приливают 2 М хлороводородную кислоту (100 — 200 мл), присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч для гидролиза, перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки. После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 2 М водным раствором хлороводородной кислоты, объединенный фильтрат трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано выше.
Перед проведением серийных анализов необходимо установить процент определения, т.е. процент возврата препарата из проб, к которым были добавлены различные количества препарата.
Тонкослойная хроматография. Сухой остаток после упаривания эфирного экстракта растворяют в 1 мл ацетона и количественно наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля или на пластинку "Силуфол". На эту же пластинку наносят 2, 5 и 10 мкг 2М-4Х в виде раствора в ацетоне и проводят хроматографирование в системе растворителей н-гексан- диэтиловый эфир-уксусная кислота (50:50:2). Для хроматографирования используют насыщенную камеру. Для насыщения стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, которая касается смеси растворителей и пропитывается. Через 2 ч быстро открывают крышку камеры и помещают пластинку для развития хроматограмм. После окончания хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для
обнаружения 2М-4Х пластинку обрабатывают проявляющим реагентом № 1, сушат и
облучают УФ-светом в течение 10 - 15 мин. При наличии в пробе 2М-4Х на пластинке появляется серо-черное пятно на белом фоне с величиной R 0,30 +/- 0,01. В качестве второго проявляющего реагента может быть
f
использован бромкрезоловый зеленый. После развития хроматограммы пластинку сушат на воздухе и помещают в сушильный шкаф при 110 °C на 20 мин. для удаления следов уксусной кислоты и затем обрабатывают проявляющим реагентом N 2. Препарат 2М-4Х проявляется в виде желтого пятна на голубом
фоне. Минимально детектируемое количество на хроматограммах 1 мкг.
Для повышения надежности идентификации может быть использована вторая система подвижных растворителей: бензол-уксусная кислота (5:1). Величина R 2М-4Х в этой системе 0,54 +/- 0,01.
f
Определить 2М-4Х можно в присутствии 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты 2,4-Д и 2,4-дихлорфенола. Величины R для этих соединений в системе
f
н-гексан-диэтиловый эфир-уксусная кислота (50:50:2) — 0,25 и 0,50, в системе бензол-уксусная кислота (5:1) — 0,48 и 0,65 соответственно.
Обработка результатов анализа. Содержание 2М-4Х в пробе оценивают визуально, сравнивая размер и интенсивность окраски пятен стандартного соединения с размером и интенсивностью пятен пробы. Для определения содержания 2М-4Х в пробах (X, мг/л или мг/кг) используют формулу:
A
A — количество 2М-4Х в пробе, найденное сравнением со стандартом, мкг;
P — объем или масса пробы, мл или г;
R — процент определения, найденный предварительно.
Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.