Временные методические указания по определению блазера в воде, почве, сое и зеленых листьях методом хроматографии в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 № 3156-84)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
27 ноября 1984 г. № 3156-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЛАЗЕРА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, СОЕ И ЗЕЛЕНЫХ
ЛИСТЬЯХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1. Химическое название — блазер (20%) селективный контактный гербицид.
Действующее вещество препарата — ацифлуорфен натрия — из группы дифенилэфиров. 5-[2-хлор-4(трифторметил)-фенокси]-2-нитробензоат натрия.
1.2 Структурная и эмпирическая формулы:
___ CO Na C H ClF NO Na ───Cl ─── 2 14 6 3 5 F C-// \\-O-/ \-NO 3 \ ___ / \\ // 2 Мол. масса 383,65.
1.3 Совместимость.
С другими гербицидами смешивать не рекомендуется. Дальнейшая борьба с сорняками может проводиться лишь через 7 дней после опрыскивания блазером.
1.4. Химически чистое соединение — белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Точка плавления — 250 °С (с разложением).
Хорошо растворяется в воде (> 25%), этаноле, метаноле, ацетоне (больше 5 х 10 мг/л); практически не растворим в гидрофобных органических растворителях.
Выпускаются две препаративные формы (к.э.): блазер 2 L и блазер 2 S, содержащие почти равное количество (20,4 и 21,4%) действующего вещества. ЛД для крыс - 1300 мг/кг; для пчел ЛД - 271,26 мг/пчела. 50 50
1.5 Биологические свойства
Блазер — новый высокоэффективный селективный контактный послевсходовый гербицид, подавляющий широколистные сорняки, произрастающие на полях сои. Имеет широкий спектр действия и может использоваться в любой стадии развития сои. При проникновении блазера через листовую поверхность сорняки начинают погибать через 3 — 4 часа. Используется в дозе 2 л/га. ДОК не установлен.
2. Методика определения блазера
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода.
Методика основана на извлечении блазера из воды, почвы и растительных проб одним из растворителей с последующим хроматографированием в тонком слое стандартных пластинок «Силуфол».
2.1.2 Метрологическая характеристика метода.
| Объект исследования | Среднее значение определе- _ ния, с (%) | Доверительный интервал среднего при альфа — 0,95; n — 6 (%) | Стандартное отклонение, S (%) | Относительное стандартное отклонение, S (%) r | Предел обнаружения, мг/кг; мг/л | Нижний предел обнаружения, мкг |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Почва Вода Соя Зеленые листья | 84,5 91,8 80,0 79,0 | 84,5 +/- 5 91,8 +/- 3 80,0 +/- 5 79,0 +/- 7 | 3,62 2,32 3,75 5,90 | 4,3 2,5 4,7 7,5 | 0,10 0,05 0,10 0,20 | 0,5 — 1 |
2.1.3 Избирательность метода
Метод специфичен, другие соединения типа мочевинопроизводных, симм-триазиновых в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Алюминия окись безводная, ТУ 6-09-426-83.
Аммония хлорид, х.ч., ГОСТ 3773-60.
Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; осч., ТУ-6-09-3513-82.
н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78. 1
Индиго — 5,5 — дисульфокислоты динатриевая соль (индиго-дисульфонат
натрия), ч.д.а., ТУ 711-31-70.
Натрия сульфат безводный, ч., ГОСТ 4166-76.
Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-81.
Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Стандартный раствор блазера в этаноле (200 мкг/мл. Хранить в холодильнике, срок годности 3 месяца).
Фосфорная кислота (орто), х.ч., ГОСТ 6552-80.
Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.
Этилацетат, х.ч., ТУ 6-09-6515-70.
Натр едкий, ч.д.а., ГОСТ 4328-77.
- 0,1-процентный раствор индигокармина (0,1 г индигокармина растирают в ступке с 5-ю мл концентрированной серной кислоты, оставляют на ночь, после чего доводят дистиллированной водой до 100 мл);
Примечание: проявление хроматограмм можно производить как первым, так и вторым способом. Для более четкой вырисовки пятен после AgNO и 3
УФ-облучения можно опрыснуть индигокармином. В первом случае препарат проявляется в виде белых пятен на бежеватом фоне, во втором - синих пятен
на бледно-голубом фоне.
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания проб, АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Весы равноплечие ручные (ВР-1, ВР-20, ВР-100), ГОСТ 359-54.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.
Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-81.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Колбы плоскодонные емкостью 150 — 250 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы мерные на 50 — 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Лампа ртутно-кварцевая ПРК-2 или ПРК-4 (для УФ-облучения).
Микропипетки для нанесения растворов на 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Сито с отверстиями 0,1 мм и 1 мм.
Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Отбор, хранение и доставка проб.
Отбор, хранение и доставку проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за № 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы.
Вода. 1) 100 мл анализируемой воды сразу помещают в колбу для ротационного испарителя и выпаривают досуха. Препарат извлекают небольшими порциями (0,1 — 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.
- К 100 мл анализируемой воды прибавляют 50 мл этилацетата и ставят на аппарат для встряхивания на 20 — 30 минут. Этилацетат сливают, прибавляют его новую порцию (25 мл) к воде и снова встряхивают на качалке. Эту операцию повторяют еще раз и через делительную воронку отделяют этилацетатные экстракты. Последние проводят через безводный сернокислый натрий, переносят в колбу для отгонки растворителя, упаривают и хроматографируют.
Примечание: При работе вторым способом иногда при сильном встряхивании образуются стойкие эмульсии, которые можно устранить добавкой небольшого количества (до 1 мл) этилового спирта.
Почва. 100 г воздушно-сухой почвы, предварительно просеянной через сито, заливают водой (до покрытия пробы) и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на два часа. Воду отфильтровывают через бюхнеровскую воронку. Полученную водную вытяжку выпаривают досуха, а препарат извлекают небольшими порциями (по 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.
Соя. 1) К 5 г сои (грубый помол с частицами в 1 — 2 мм) добавляют оводненный ацетон (60%), оставляют на ночь или ставят на качалку на 30 минут. Отфильтровывают через бюхнеровскую воронку и ставят на выпаривание до маслянистого остатка. Остаток обмывают 10 — 15 мл 1% раствора NaOH. Эту манипуляцию проделывают еще 2 раза. Полученный щелочной раствор помещают в делительную воронку и дважды энергично встряхивают с гексаном. Гексан как ненужную фракцию отбрасывают, а раствор щелочи подкисляют соляной кислотой до нейтральной реакции. Из последнего препарата извлекают этилацетатом (20 мл) трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, проводят через безводный сернокислый натрий и выпаривают досуха, затем наносят на пластинку.
- К 5 г сои добавляют воду и равное количество коагулирующей смеси: 5 г хлорида аммония растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85% ортофосфорной кислоты и доводят дистиллированной водой до 1 литра, и ставят на качалку на 30 минут. Затеи отфильтровывают, доводят раствор до нейтральной реакции 10% раствором NaOH и извлекают этилацетатом по 25 мл трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают безводным сернокислым натрием и выпаривают на роторном испарителе до 0,1 мл. Препарат извлекают небольшими порциями этилацетата и наносят на пластинку.
Зеленые листья. Растертые листья (10 г) заливают водой и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на 2 часа, затем извлекают этилацетатом (по 25 мл) трижды. Объединенные экстракты высушивают безводным сернокислым натрием, выпаривают на роторном испарителе и наносят на пластинку.
2.5.2 Хроматография в тонком слое сорбента.
Пробу количественно переносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием блазера (10 — 20 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования, предварительно наполненную растворителем. Перед каждой хроматограммой растворитель следует менять на свежеприготовленный. Подвижной фазой для блазера является смесь гексана с ацетоном в соотношении 59:41 или изопропиловый спирт с бензолом — 25:75. После поднятия линии фронта на 12 — 13 см пластинку из камеры вынимают, высушивают на воздухе до полного удаления растворителя.
Проявление зон локализации блазера на хроматограмме производят одним из указанных проявителей.
Блазер на пластинках «Силуфол» проявляется в виде двух пятен:
R верхнего пятна — 0,45; нижнее — чуть отделяется от пятна. f
Примечание. В случае проб сои иногда можно использовать многоступенчатую (3 — 4 раза) вытеснительную хроматографию (хроматограмму опускать в ту же подвижную фазу после просушивания и удлинения фронта разгонки), чтобы отгонять ближе к фронту нежелательные компоненты.
2.6. Обработка результатов
Содержание блазера в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
А
А — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Х — содержание блазера в пробе, мг/кг или мг/л.
3. Техника безопасности
Необходимо соблюдать все общепринятые правила по технике безопасности, обычно рекомендуемые при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
4. Методика разработана
Ст.н.с, к.б.н. Н.В. Бажановой, мл.н.с., к.б.н. М.Г. Алтунян и мл.н.с. Ж.А. Арутюнян (Научно-исследовательский институт защиты растений, гор. Ереван).
5. Методика апробирована
а) В санитарно-гигиенической лаборатории при Республиканской санитарно-эпидемиологической станции МЗ Арм. ССР.
б) В контрольно-токсикологической лаборатории Республиканской станции защиты растений ПНО «Армсельхозхимия».