Методические указания по определению этафоса в молоке и мясопродуктах методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 № 3020-84)
27 апреля 1984 г. № 3020-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭТАФОСА В МОЛОКЕ И МЯСОПРОДУКТАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны В.Р. Хаитовым, Т.Б. Баймуратовым (УзНИВИ).
Краткая характеристика препарата приведена в Унифицированной методике.
Принцип метода. Метод основан на извлечении этафоса из молока в присутствии безводного сульфата натрия смесью органических растворителей — этанола и ацетона (1:3), а из молока и тканей — хлороформом, с последующей очисткой путем перераспределения пестицида из спиртово-ацетонового раствора в гексан. Количественное определение проводят методом ГЖХ.
Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество 0,2 нг. Нижний предел обнаружения этафоса в молоке 0,02 мг/кг. Среднее значение определения препарата в молоке и мясопродуктах 80 — 75%. Доверительный интервал среднего (при p = 0,95 и n = 15) составляет для молока +/- 2,23%, для мясопродуктов +/- 2,24%.
Избирательность метода. Метод специфичен, другие фосфорорганические соединения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
Реактивы и растворы. Основной стандартный раствор этафоса в этиловом спирте, содержание д.в. 100 мкг/мл. Из этого раствора путем соответствующего разбавления готовят рабочие стандартные растворы, содержащие 10,0; 5,0 и 1,0 мкг/мл.
Для экстракции. Ацетон х.ч. Спирт этиловый 96-процентный. Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный. Вода дистиллированная, не содержащая хлоридов. Фильтры бумажные.
Для ГЖХ. Стационарная фаза 3% OV-101 на инертоне-супер (0,16 — 0,20 мм). Стационарная фаза 5% QF-1 на инертоне-супер (0,16 — 0,20 мм). Азот в баллонах с редуктором. Водород в баллонах с редуктором. Стекловата.
Приборы и посуда. Для экстракции. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор или измельчитель тканей. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Весы лабораторные рычажные. Колбы конические плоскодонные на шлифах вместимостью 250 и 100 мл. Делительные воронки. Цилиндры мерные на 100; 50; 25 и 10 мл. Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5 — 10 мл. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Воронки химические. Ступка фарфоровая, пестик.
Для ГЖХ. Хроматограф марки «Цвет-106» с ТИД или аналогичный прибор. Компрессор для нагнетания воздуха. Колонки стеклянные длиной 1 м, диаметром 2 мм. Микрошприцы на 10 мкл.
Подготовка к определению. Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ. Колонку заполняют общепринятым в хроматографии способом, предварительно в течение 24 — 72 ч ее продувают азотом при температуре 240 °C.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. 10 мл среднего образца молока переносят в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 г безводного сульфата натрия, залипают 40 мл смеси этанола и ацетона (1:3) и помещают на 1 ч в холодильник. Затем экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку. Добавляют 40 мл 2-процентного раствора сульфата натрия и трижды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл в течение 2 — 3 мин., каждый раз сливая гексановый слой через фильтр с безводным сульфатом натрия в колбу прибора для отгонки растворителей. Упаривают растворитель досуха под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C.
20 г гомогенизированного образца мясопродуктов (органов и тканей) переносят в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 г безводного сульфата натрия, 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате в течение 1 ч. Затем экстракт фильтруют в колбу прибора для отгонки растворителей. Колбу с образцом промывают 20 мл хлороформа и сливают в отгонную колбу. Затем растворитель упаривают досуха под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C. Сухой остаток растворяют в 40 мл смеси этанола с ацетоном и фильтруют в делительную воронку. Дальнейшую очистку проводят так же, как пробу молока.
Условия определения методом ГЖХ. Сухой остаток растворяют в 5 — 10 мл этилового спирта, добавляют 2 г безводного сульфата натрия и хроматографируют аликвоту 2 — 5 мкл.
Условия хроматографирования. Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный прибор с ТИД. Температурный режим термостата колонки 180 °C, испарителя - 220 - 225 °C. Скорость потока газа-носителя (азота) 22 - 24 мл/мин., воздуха - 200 мл/мин., водорода - 14 - 18 мл/мин. Рабочая шкала
-10
электрометра 2 x 10 А. Скорость диаграммной ленты 10 мм/мин. Стеклянная хроматографическая колонка длиной 1 м, диаметром 3 мм с OV-101, нанесенной в количестве 3% на инертон-супер. Линейность детектирования на OV-101 соблюдается в пределах 0,2 - 1 нг. Время удерживания этафоса на OV-101 -
1,75 — 1,8 мин.
В качестве альтернативной колонки для идентификации этафоса в органах и тканях, а также в молоке служит колонка с инертоном-супер с 5% QF-1. При соблюдении названных условий хроматографирования время удерживания этафоса на QF-1 — 1,7 мин.
Обработка результатов анализа. Содержание препарата в пробе (X, мг/л или мг/кг) определяют методом соотношения со стандартом по площади (высоте) пика по формуле:
CS V K
2 2
или
CH V K
2 2
где:
C — концентрация стандартного раствора, введенного в хроматограф, нг;
S , H - площадь и высота пика стандартного раствора, введенного в 1 1
хроматограф, кв. мм, мм;
S , H - соответственно площадь и высота пика препарата в пробе, 2 2
кв. мм, мм;
V — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл; 1
V — общий объем экстракта после упаривания, мл; 2
P — масса или объем анализируемой пробы, г или мл;
K — поправочный коэффициент (для молока 1,25, для мясопродуктов 1,33).
Требования безопасности. Следует соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.