Экспресс-метод оценки общетоксического и кожно-раздражающего действия парфюмерно-косметической продукции in vitro (на культуре подвижных клеток). Методические рекомендации
(утв. Минздравом России 29.01.2003 № 29ФЦ/394)
Внимание
Документ утратил силу в связи с изданием МР 1.1.0121-18, утв. Роспотребнадзором 28.02.2018.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["Экспресс-метод оценки общетоксического... (от 29.01.2003 N 29ФЦ/394)"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/29fts394" "Экспресс-метод оценки общетоксического и кожно-раздражающего действия парфюмерно-косметической продукции in vitro (на культуре подвижных клеток). Методические рекомендации (утв. Ми" n1["МР 1.1.0121-18"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/mr-1-1-0121-18" "МР 1.1.0121-18. 1.1. Общие вопросы. Гигиена, токсикология, санитария. Оценка общетоксического действия парфюмерно-косметической продукции методом in vitro (на культуре подвижных кл" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
29 января 2003 г. № 29ФЦ/394
ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОЦЕНКИ ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО И КОЖНО-РАЗДРАЖАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ПАРФЮМЕРНО-КОСМЕТИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ IN VITRO (НА КУЛЬТУРЕ ПОДВИЖНЫХ КЛЕТОК)
Разработаны НИИ медицины труда РАМН, Всероссийским научно-исследовательским и испытательным институтом медицинской техники Минздрава РФ, Акционерным обществом «БМК-Инвест», Центром Госсанэпиднадзора в г. Москве.
Методические рекомендации одобрены Лабораторным советом Госсанэпидслужбы России (протокол № 1 от 22.01.2002).
1. Область применения
Методические рекомендации содержат описание метода тестирования парфюмерно-косметической (ПК) продукции с применением кратковременной суспензионной культуры подвижных клеток (сперматозоидов быка) и определяют порядок проведения испытаний следующих видов ПК продукции: жидкие моющие средства, дезодоранты и депилятории в аэрозольной упаковке, туалетная и парфюмированная вода, духи, одеколон, спиртосодержащие лосьоны.
Методические рекомендации предназначены для скрининговой оценки вновь разрабатываемой и серийно выпускаемой ПК продукции с учетом общетоксического и кожно-раздражающего действия.
Методика может быть применена в качестве самостоятельного экспресс-метода или в сочетании с другими токсиколого-гигиеническими методами.
Методические рекомендации предназначены для учреждений научно-исследовательского и практического профиля, осуществляющих разработку новых видов ПК продукции и контроль ее качества.
2. Описание метода
В качестве тест-объекта используется сперма крупного рогатого скота, замороженная в парах жидкого азота. Гранулы замороженной бычьей спермы получают на станциях искусственного осеменения и хранят в сосудах Дьюара, наполненных жидким азотом.
Критерием токсического действия является изменение двигательной активности сперматозоидов под воздействием химических соединений, содержащихся в экстрактах ПК продукции, по сравнению с таковой для пробы с раствором, не содержащей токсических веществ. Изменение двигательной активности измеряется показателем подвижности «m» и регистрируется автоматически анализатором токсичности по изменению интенсивности светового потока при движении сперматозоидов через оптический зонд.
_
где:
Cn — концентрация подвижных клеток; _
V — средний модуль скорости клеток.
Количественная оценка параметра тест-реакции выражается индексом токсичности «It», представляющим собой отношение суммарной двигательной активности сперматозоидов опытной и контрольной проб, выраженное в процентах. Величина индекса токсичности, гарантирующая безопасность ПК изделий, находится в интервале от 70 до 120%. Сравнительная оценка результатов исследования общей токсичности и кожно-раздражающего действия ПК изделий в эксперименте на лабораторных животных и их различных разведений на культуре сперматозоидов послужила основанием для выбора эталонных разведений перечисленных ранее групп ПК изделий с учетом допустимого интервала индекса токсичности.
3. Оборудование, химическая посуда и реактивы
3.1 Анализатор токсичности АТ-4.
3.2. Сосуд Дьюара типа СДС объемом не менее 25 л и диаметром горла не менее 50 мм.
3.3 Термостат типа ТС-80М-2 (25 — 80 °C).
3.4. Весы аналитические с погрешностью взвешивания не более 1 мг, ГОСТ 24104-88.
3.5. Пробирки с притертыми пробками объемом 3 — 5 мл — 10 шт., ГОСТ 1770-74.
3.6. Дозаторы пипеточные на объемы 0,5 мл, 0,2 мл и 0,1 мл, ТУ 2Т2.993.053.
3.7. Мерные колбы с притертыми пробками объемом 50 мл — 2 шт., ГОСТ 1770-74.
3.8 Пинцет анатомический длиной 250 мм.
3.9 Глюкоза, ч., ГОСТ 6038-74.
3.10 Цитрат натрия трехзамещенный, ч., ГОСТ 22280-76.
3.11 Сперма быка, замороженная в жидком азоте, ГОСТ 26030-83.
3.12 Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.
4. Проведение испытаний
4.1. Приготовление экстрактов из образцов ПК продукции
4.1.1. Экстракты из испытуемых образцов готовят путем настаивания в дистиллированной воде. Соотношения веса образца и объема модельной среды (дистиллированной воды), а также продолжительность экстракции приведены в таблице 1. Навески ПК продукции взвешивают в сухой чистой колбе, куда затем добавляют требуемый объем модельной среды. В другую колбу наливают модельную среду и обе колбы помещают в термостат на 24 часа при температуре +37 °C. После окончания экстракции растворы охлаждают до комнатной температуры.
УСЛОВИЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЭКСТРАКТОВ
| Вид ПК продукции | Масса образца, г | Объем модельной среды, мл | Степень разведения образца | Продолжительность экстракции, час. |
|---|---|---|---|---|
| Шампуни для волос и тела | 0,1 | 250 | 1:2500 | 24 |
| Жидкое туалетное мыло | 0,1 | 250 | 1:2500 | 24 |
| Пена для ванн, гель для душа | 0,1 | 250 | 1:2500 | 24 |
| Дезодоранты и депилятории в аэрозольной упаковке | 1,0 | 300 | 1:300 | 1 |
| Туалетная и парфюмированная вода, духи, одеколон, спиртосодержащие лосьоны | 1,0 | 700 | 1:700 | 1 |
4.1.2. После завершения экстракции экстракт подвергают фильтрации через бумажный фильтр с целью удаления взвешенных частиц. Фильтрованию подвергают также и модельную среду.
4.1.3. В качестве фильтра используют бумажный фильтр АФА-ВП-10 диаметром 9 см. Бумажные фильтры должны быть заранее промыты и просушены. Для этого предварительно до эксперимента 10 бумажных фильтров опускают в большой стакан, заполненный 1,5 л дистиллированной воды. Стакан накрывают стеклянной пластинкой и ставят в термостат на 24 часа при температуре +37 °C. Затем дистиллированную воду выливают, а стакан с мокрыми фильтрами ставят обратно в термостат с целью высушивания фильтров до постоянной массы. Достижение постоянной массы контролируют взвешиванием каждого фильтра на аналитических весах.
4.1.4. После фильтрования из модельной среды и экстрактов готовят изотонические растворы, добавляя в них сухие реактивы глюкозы и цитрата натрия (глюкоза — 4 г, цитрат натрия — 1 г, фильтрат — 100 мл).
4.2. Проведение измерений
Для определения индекса токсичности изотонического фильтрата экстракта, далее — опытного раствора, необходимо сравнить его с изотоническим фильтратом модельной среды.
4.2.1. Контрольный и опытный изотонические экстракты не менее чем за час до начала эксперимента по 0,4 мл помещают в пробирки с притертыми пробками и ставят в водяную баню при температуре (40 +/- 1,5) °C.
4.2.2. Приготовление раствора спермы. Оттаивают замороженную сперму в разбавителе. Состав разбавителя: глюкоза — 4 г, цитрат натрия — 1 г, дистиллированная вода — 100 мл. В чистую сухую пробирку наливают 0,4 мл разбавителя и ставят в водный термостат при температуре (40 +/- 1,5) °C. Охлажденным до температуры жидкого азота анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор.
4.2.3. Приготовление тест-системы. В каждую пробирку с модельной средой и опытным экстрактом из ПК изделия приливают по 0,1 мл раствора спермы. Полученную смесь экстрактов и спермы из каждой пробирки переносят в капилляры (минимум по 5 на один образец) и устанавливают в каретку прибора. Проводят измерения согласно инструкции к прибору.
4.3. Математическая обработка результатов измерения
Обработку экспериментальных данных осуществляют вручную или с помощью компьютера по прилагаемой к анализатору токсичности программе.
Для каждого образца вычисляют суммарную двигательную активность S:
i i где m - значение показателя подвижности.
i
Для контрольной и опытной выборок образцов вычисляют среднее арифметическое значение и среднеквадратичное отклонение, по которым в свою
очередь вычисляют для каждой выборки коэффициент вариации C:
дельта
дельта — среднеквадратичное отклонение; _
X — среднее арифметическое значение.
В случае получения значения коэффициента вариации более 15% хотя бы для одной из выборок эксперимент повторяют, начиная с 4.1. Если значения коэффициентов вариации для каждой из выборок меньше или равны 15%, то результаты считают пригодными для статистической обработки. Затем вычисляют S величину индекса токсичности I : t
опыт
S
S ср I = ------ x 100%, t контр
S
ср
опыт контр где S и S - величины суммарной двигательной активности ср ср сперматозоидов, усредненные по нескольким соответственно опытным и
контрольным образцам.
5. Оценка результатов испытаний
Оценка результатов испытаний осуществляется путем сравнения полученных значений индексов токсичности для исследованных образцов и допустимого интервала индекса токсичности.
Индекс токсичности от 70% до 120% указывает на то, что испытуемый образец относится к 4 классу малоопасных соединений согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 и не обладает кожно-раздражающим действием при соблюдении условий применения согласно этикетке. Образец направляется на проведение клинических испытаний на людях-добровольцах.
Во всех остальных случаях результаты свидетельствуют о несоответствии требованиям безопасности, предъявляемым к ПК-продукции. В этой ситуации испытанный образец может быть подвергнут расширенным санитарно-химическим и токсикологическим исследованиям.