Методические указания по определению амибена в почве методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 № 2999-84)
27 апреля 1984 г. № 2999-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АМИБЕНА В ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. Амибен - 2,5-дихлор-3-аминобензойная кислота. Общепринятое название - хлорамбен. Брутто формула C H O Cl N. 7 5 2 2 Молекулярная масса 206,04. Чистое вещество - светло-фиолетовые кристаллы
без запаха с т. пл. 200 — 201 °C. Препарат плохо растворим в воде (0,07% по
массе), разбавленных кислотах, хлороформе, бензоле и четыреххлористом углероде. Хорошо растворим в спиртах, диэтиловом эфире, ацетоне, разбавленных щелочах. Применяют во время предвсходовой обработки почвы для
борьбы с сорняками на посевах томатов, моркови, сои.
Принцип метода. Метод основан на извлечении амибена из пробы водным раствором гидрокарбоната натрия с последующим определением тонкослойной хроматографией. Для оценки содержания амибена может быть рекомендовано использование денситометра.
Метрологическая характеристика метода. Предел определения амибена в лесостепной и светло-серой суглинистой почве с содержанием гумуса 1,5 — 2,0% — 0,05 мг/кг. Среднее значение определения 76,6%. Стандартное отклонение +/- 6,1%.
Реактивы и растворы. Аммиак водный ч.д.а. Ацетон х.ч. Нитрат серебра ч.д.а. н-Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Гидрокарбонат натрия ч.д.а. Оксид алюминия нейтральный ч., прокаленный 4 ч при 600 °C (сохраняется над P O ). Хлороводородная кислота ч. Уксусная
2 5
кислота ледяная х.ч. Силикагель КСК, № 2. Силикагель ЛС 5/40 мю для ТСХ с 13% гипса. Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч. Вода дистиллированная.
Проявляющий реагент: в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака и доводят до метки ацетоном. При хранении в плотно закрытой склянке без доступа света годен для применения в течение 1 мес. Стандартный раствор амибена в ацетоне (0,5 мг/мл).
Приборы и посуда. Ротационный вакуумный испаритель. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Аппарат для встряхивания. Центрифуга лабораторная стационарная. Колбы: мерные на 100 мл; плоскодонные со шлифом на 500 мл; колба Бунзена на 500 мл. Делительные воронки на 500 мл. Баня водяная. Микропипетки. Электроплитка. Сушильный шкаф. Круглодонные колбы на 250 мл со шлифом. Стеклянные пластинки размером 15 х 15 см. Пластинки «Силуфол». Сито капроновое (100 — 120 меш). Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки пластинок. Камера хроматографическая. Эксикатор. Источники УФ-света. Воронка Бюхнера диаметром 13 см. Фильтр стеклянный № 4.
Подготовка к анализу. Приготовление хроматографических пластинок. Гипс (14 г) и сульфат кальция (1 г) смешивают с 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин. Сорбционную массу (5 — 7 г) равномерно наносят на одну пластинку (9 х 12 см) и сушат при комнатной температуре 12 ч. Затем пластинки активируют в сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и хранят в эксикаторе над слоем хлорида кальция.
Ход анализа. Воздушно-сухую почву (100 г), растертую и просеянную через
сито с размером отверстий 1 мм, помещают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 100 мл 0,03 М водного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагируют амибен на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Затем содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 5 мин. Вместо центрифугирования можно проводить фильтрование под вакуумом через фильтр из стеклоткани. Водный раствор сливают, к остатку в стакане добавляют 50 мл 0,03 М водного раствора гидрокарбоната натрия, перемешивают и снова центрифугируют. Операцию повторяют еще дважды. Объединенный водный экстракт переносят в делительную воронку на 500 мл, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1 и трижды экстрагируют амибен диэтиловым эфиром (порциями 100; 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и затем фильтруют через 1 г оксида алюминия (нейтрального), помещенного на стеклянный фильтр N 4 (диаметр 2,5 см). Затем амибен элюируют из оксида алюминия 50 мл 0,03 М водного раствора гидрокарбоната натрия. Элюат
помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1
и трижды экстрагируют амибен диэтиловым эфиром (порциями 340; 25 и 25 мл). Объединенный эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) и упаривают на ротационном испарителе до объема 0,5 - 1,0 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол",
предварительно очищенную в растворе аммиака и затем выдержанную в сушильном
шкафу при 120 °C в течение 15 мин. Можно использовать и пластинки с тонким слоем силикагеля, приготовленные в лабораторных условиях. На эту же пластинку наносят 1; 5 и 10 мкг амибена и проводят хроматографирование в системе растворителей гексан-диэтиловый эфир-уксусная кислота (25:25:1) в камере, насыщенной в течение 2 ч парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из хроматографической камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения амибена пластинку
обрабатывают проявляющим реагентом, сушат и облучают УФ-светом 10 — 15 мин. Амибен обнаруживается в виде темных пятен на белом фоне с величиной R 0,60 f +/- 0,01. Минимально обнаруживаемое количество на хроматограммах 1 мкг.
Обработка результатов анализа. Оценка содержания амибена в пробе проводится путем визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с пятнами пробы. Содержание амибена в почве (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
100A
A — количество амибена в пробе, найденное визуальным сравнением со стандартом, мг;
Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, рекомендованные при работе с пестицидами и химическими реактивами.