Методические указания по определению тачигарена в почве методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 24.08.1983 № 2827-83)
24 августа 1983 г. № 2827-83
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТАЧИГАРЕНА В ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. Действующее начало препарата тачигарен - 3-гидрокси-5-метил-изоксазол. Брутто - формула C H O N.
4 5 2
Молекулярная масса 99,08. Общепринятое название - гимексазол. Чистое вещество - бесцветные игольчатые кристаллы, т. пл. 86 - 87 °C. Стабильно к действию кислот и щелочей. Растворимость в воде при 25 °C 8,5 г в 100 мл, хорошо растворим в метаноле, ацетоне. Препарат рекомендуется для протравливания семян сахарной свеклы. Применяется в виде 70-процентного
с.п.
Принцип метода. Метод основан на извлечении тачигарена из пробы дистиллированной водой с последующим определением методом ТСХ. Оценка содержания тачигарена на хроматограммах проводится сравнением площади и окраски пятен стандарта с пятнами пробы. Для этих целей можно также использовать денситометр.
Метрологическая характеристика метода. Предел определения в почве 0,07 мг/кг. Для определения концентраций больших, чем 1,0 мг/кг, берется аликвотная часть. Среднее значение определения стандарта тачигарена 80%. Относительное стандартное отклонение +/- 5,6%. Минимально открываемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг.
Реактивы и растворы. Аммиак водный, ч.д.а. Ацетон х.ч. Бензол ч.д.а. н-Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Нитрит натрия ч.д.а. Нитропруссид натрия ч.д.а, 0,5-процентный водный раствор. Бромфеноловый синий ч.д.а. Хлороводородная кислота ч. Ледяная уксусная кислота х.ч. Нитрат серебра ч.д.а. Силикагель КСК, № 2. Силикагель ЛС 5/40 мю для тонкослойной хроматографии с 13% гипса. Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч. Хлороформ х.ч. Вода дистиллированная. Проявляющие реагенты: № 1 (пластинку последовательно обрабатывают 0,5-процентным водным раствором нитропруссида натрия, 10-процентным водным раствором нитрита натрия, ледяной уксусной кислотой и затем помещают на 5 — 10 мин. в эксикатор, на дно которого налит 25-процентный водный раствор аммиака). Необходимо использовать свежеприготовленный реактив; № 2 — в мерную колбу на 100 мл помещают 0,05 г бромфенолового синего, 10 мл ацетона и доводят до метки 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (0,5 г азотнокислого серебра растворяют в смеси 24 мл ацетона и 76 мл дистиллированной воды). Годен для употребления в течение месяца при хранении в темной склянке с притертой пробкой. Стандартный раствор тачигарена в н-гексане 0,5 мг/мл. Годен для употребления в течение 6 мес. при хранении в холодильнике.
Приборы и посуда. Ротационный испаритель. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Колбы: мерные на 100 мл; круглодонные на 250 мл со шлифом. Делительные воронки на 1 л. Водяная баня. Микропипетки. Электроплитки. Сушильный шкаф. Стеклянный лабораторный холодильник ХПТ. Аппарат для встряхивания. Центрифуга лабораторная стационарная. Стеклянные пластинки размером 150 x 150 мм. Пластинки «Силуфол». Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки пластинок. Камера хроматографическая. Эксикатор.
Приготовление хроматографических пластинок. Силикагель (14 г) и сернокислый кальций (1 г) смешивают в 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин. Сорбционную массу (5 — 7 г) равномерно наносят на 1 одну пластинку и сушат при комнатной температуре 12 ч. Затем пластинки активируют в сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и хранят в эксикаторе над слоем хлорида кальция.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. При разработке методических указаний использована серая суглинистая почва с содержанием гумуса 1,5 — 2,0%. Навеску воздушно-сухой почвы (100 г), растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 100 мл дистиллированной воды с pH 10 (водный раствор аммиака) и экстрагируют тачигарен на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. Затем содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. Водный раствор сливают, к остатку в стакане добавляют 50 мл дистиллированной воды с pH 10, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию повторяют еще 2 раза. Объединенный водный экстракт переносят в делительную воронку, доводят pH до 2 — 3 концентрированной хлороводородной кислотой, насыщают хлоридом натрия из расчета 33 г на 100 мл экстракта и экстрагируют тачигарен диэтиловым эфиром (100; 50 и 50 мл). Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 — 10 г) и упаривают на ротационном испарителе (температура водяной бани 30 °C) до объема 0,5 — 1,0 мл. Экстракцию из почвы можно также провести 100 мл смеси растворителей н-гексан-ацетон (4:2). После экстракции смесь растворителей сливают через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия, а остаток в колбе дважды промывают этой же смесью растворителей порциями по 50 мл и фильтруют. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 1,0 мл, прибавляют 10 мл диэтилового эфира и фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Колбу дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, сливая растворитель через тот же фильтр. Объединенный фильтрат упаривают до объема 0,5 — 1,0 мл.
Идентификация и количественное определение тачигарена. Остаток после упаривания эфирного экстракта количественно наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля (могут быть использованы пластинки, приготовленные в лабораторных условиях, и пластинки "Силуфол"). На эту же
пластинку наносят 2; 5 и 10 мкг тачигарена и проводят хроматографирование в
системе растворителей бензол-уксусная кислота (4:1) в хроматографической камере, насыщенной в течение 2 ч парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладываются фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения тачигарена пластинку последовательно обрабатывают 0,5-процентным водным раствором нитропруссида натрия, 10-процентным водным раствором нитрита натрия, ледяной уксусной кислотой и затем помещают на 5 - 10 мин. в эксикатор, на дно которого налит 25-процентный водный раствор аммиака. Тачигарен обнаруживается в виде сине-фиолетовых пятен на белом фоне с величиной R 0,72 +/- 0,01.
f
Минимально открываемое количество на хроматограммах 1 мкг.
Для повышения надежности идентификации тачигарена хроматографирование может быть также проведено в системе растворителей бензол-ацетон (3:1). Для
обнаружения тачигарена пластинку обрабатывают проявляющим реагентом N 2. Тачигарен обнаруживается в виде светло-желтых пятен на синем фоне с величиной R 0,88 +/- 0,01. Минимально открываемое количество на
f
хроматограммах 2 - 3 мкг. Для определения тачигарена может быть использовано также двукратное хроматографирование в хлороформе и затем в
системе растворителей бензол-уксусная кислота (4:1).
Обработка результатов анализа. Оценку содержания тачигарена в пробе проводят путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с пятнами пробы. Для определения содержания тачигарена в почве (X, мг/кг) используют формулу:
100A
A — количество тачигарена в пробе, найденное сравнением со стандартом, мкг;
Требования безопасности. Соблюдаются общие требования безопасности, рекомендуемые при работе с пестицидами и химическими реактивами.