Методические указания по определению перопала в яблоках и почве методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 12.05.1983 № 2796-83)

12 мая 1983 г. № 2796-83

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПЕРОПАЛА В ЯБЛОКАХ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны В.Н. Кавецким, В.А. Лесовой (УкрНИИЗР).

    Краткая  характеристика   препарата.   Перопал-1-(трициклогексилолово)-
1,2,4-триазол.   Брутто-формула  C  H  N Sn.   Молекулярная   масса  435,9.

                              20 35 3

Технический  препарат  представляет  собой белое кристаллическое вещество с
т. пл. 218 °C. Растворимость в воде  1  мг/л, плохо растворим в большинстве
органических  растворителей,  при  нагревании  с  минеральными  кислотами и
сильными  окислителями  разрушается.   Выпускается  в  виде  25-процентного

сыпучего порошка. Мало токсичен для пчел и энтомофагов.

Предложен в качестве специфического акарицида для борьбы с клещами, устойчивыми к фосфор- и хлорорганическим инсектицидам и акарицидам, на хлопчатнике, плодовых, цитрусовых и овощных культурах. Норма расхода 0,5 — 1 кг/га. В герметичной таре можно хранить практически неограниченное время.

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из исследуемой пробы органическим растворителем (гексаном) с последующим определением методом ТСХ.

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел обнаружения 1 мкг, нижний предел определения 0,01 мг/кг. Среднее значение определения (при n = 15) 79%. Стандартное отклонение 7,6%. Доверительный интервал (при p = 0,95 и n = 5) +/- 9,5%.

Реактивы и растворы. н-Гексан х.ч. Хлороформ х.ч. Этиловый спирт 96-процентный. Уксусная кислота х.ч. Четыреххлористый углерод х.ч. Пластинки «Силуфол». Оксид алюминия для хроматографии нейтральный, II степени активности. Силикагель КСК-2,5. Гипс медицинский. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Гематоксилин х.ч. Пирокатехиновый фиолетовый ч.д.а. Кислота хлороводородная ч.д.а. Лимонная кислота особо чистая. Стандартный раствор № 1 — 0,1-процентный ацетоновый. Хранить в темном месте не дольше 1 мес. Стандартный раствор перопала № 2 (0,1 мг/мл) готовят разбавлением раствора № 1 ацетоном в 10 раз.

Проявляющие реагенты:

№ 1 — 0,1-процентный раствор гематоксилина в 95-процентном этиловом спирте (на каждые 100 мл раствора добавить 1 каплю концентрированной хлороводородной кислоты). Хранить в темной склянке не дольше 7 дней;

№ 2 — 2-процентный водный раствор лимонной кислоты. Хранить в холодильнике в течение 1 мес.;

№ 3 — 0,1-процентный этаноловый раствор пирокатехинового фиолетового. Хранить в темной склянке в холодильнике не дольше 10 дней;

№ 4 — 0,01 н раствор хлороводородной кислоты.

Подвижные растворители: смесь четыреххлористого углерода с уксусной кислотой (5:1); гексана с уксусной кислотой (5:3).

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания проб АВУ-1. Баня водяная. Камера для хроматографирования (эксикатор). Камера для опрыскивания. Колбы конические и круглодонные. Капиллярные пипетки для нанесения проб. Холодильник стеклянный для отгонки растворителей. Мерные цилиндры на 10; 25 и 100 мл. Микропипетка на 0,1 мл с ценой деления 0,001 мл (для нанесения стандартных растворов). Воронки химические. Фильтры бумажные. Пульверизаторы стеклянные. Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см. Лампа ПРК-4.

Подготовка к определению. Приготовление пластинок. Стеклянную пластинку тщательно моют содой, хромовой смесью, дистиллированной водой. Высушенную пластинку покрывают сорбционной массой. Для этого смешивают 15 г измельченного и просеянного через сито 100 меш силикагеля марки КСК-2,5, 15 г оксида алюминия, 3 г гипса, прибавляют 50 мл дистиллированной воды и растирают смесь в течение 10 — 15 мин. до однородной массы. Пластинку сушат на воздухе 30 мин., а затем 1 ч в сушильном шкафу при температуре 100 °C или 18 — 20 ч при комнатной температуре.

Ход анализа. Экстракция. Пробу почвы или измельченных яблок (по 100 г) помещают в коническую колбу, заливают 200 мл гексана и экстрагируют 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракты фильтруют через слой безводного сульфата натрия (20 — 30 г), пробу трижды промывают гексаном порциями по 20 мл и отгоняют на водяной бане до объема 0,1 — 0,5 мл.

Хроматографирование и проявление хроматограмм. Остаток экстракта наносят на пластинку с тонким слоем адсорбента в одну точку на расстоянии 1,5 см от нижнего края. Диаметр пятна при нанесении не должен превышать 1 см. На ту же пластинку наносят стандартный раствор в диапазоне ожидаемых концентраций.

Пластинку помещают в хроматографическую камеру. В качестве камеры используют эксикатор, на дне которого находится подвижная фаза: четыреххлористый углерод-уксусная кислота (5:1) или гексан-уксусная кислота (5:3).

Хроматографирование проводят при комнатной температуре до тех пор, пока подвижная фаза не поднимется на высоту 10 см. Затем пластинку вынимают и сушат до полного испарения растворителя. После этого пластинку опрыскивают проявляющим реагентом № 1 (2 — 3 мл), проводят УФ-облучение в течение 3 — 5 мин., затем реагентом № 2 (1 — 2 мл). Можно провести УФ-облучение в течение 8 — 10 мин., опрыскивание проявляющим реагентом № 3 (2 — 3 мл), а затем № 4 (1 — 2 мл). При наличии перопала в пробе на пластинке, обработанной реагентом № 1 и № 2, образуются сиренево-розовые пятна (фон пластинок бледно-розовый, а на пластинках «Силуфол» — желто-палевый). Обработанный реагентом № 3 и № 4 перопал проявляется в виде сине-фиолетовых пятен (фон серый, а на пластинках «Силуфол» — розовато-серый).

R хроматографических пятен препарата в рекомендуемых системах f подвижных растворителей: четыреххлористый углерод-уксусная кислота (5:1)

• 0,61, а на пластинках «Силуфол»: гексан-уксусная кислота (5:3) — 0,9.

Обработка результатов анализа. Количественное определение перопала проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен проб и стандартных растворов, которые хроматографируют одновременно.

Содержание перопала в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                  A

X = -, P

где:

A — количество препарата, найденное по площади хроматографических пятен, мкг;

P — масса исследуемой пробы, г.

---