Методические указания по определению дифоса (абата) в продуктах животного происхождения методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 28.12.1982 № 2648-82)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого пестицида

Дифос(0,0,0',0'-тетраметил 0,0',-тио-ди(парафенил)тиофосфат).

           S                        S

    (CH O) P-O-//   \\-S- //   \\-O-P(OCH ) .
       3  2    \ ___ /    \ ___ /        3 2


    Эмпирическая формула - C  H  O P S .

                        16 20 6 2 3

М.м. 466.

Синонимы: абат, абат 500 Е, абат 4Е, ОМ, S-736.

    Химически чистое  вещество -  белые  кристаллы. Технический  препарат -
коричневая  жидкость,  содержащая  90 - 95% действующего вещества. Препарат
не  растворим  в  воде,  хорошо  растворяется  в органических растворителях

(ацетоне, гексане, хлороформе, эфире, ацетонитриле). Устойчив к воздействию

слабых  щелочей  (при  рН 8 и температуре 20  °С  гидролизуется  в  течение
нескольких  недель).  Выпускается  в  форме 30-процентного к.з.  Зарубежный
аналог   дифоса   -   абат   выпускается  в  форме  50-процентного  к.з.  и
25-процентного   с.п.  Относится  к  малотоксичным  соединениям.  ЛД    при

                                                                50

введении  препарата  в желудок белых крыс составляет 1360 - 2300 мг/кг, для
белых мышей - 460  мг/кг.  Проникает через кожу.  Для кроликов при накожном
нанесении ЛД   - 970 - 1930 мг/кг.  Раздражающее действие  выражено  слабо.

        50

Коэффициент кумуляции — 5,7.

Применяется в качестве инсектицида контактно-кишечного действия. Высокоэффективен в борьбе с личинками комаров, мух, а также с вредными насекомыми домашних животных. Эффективен и для защиты сельскохозяйственных культур от вредных клопов, трипсов и других насекомых. ДОК в сахарной свекле, овощах, цитрусовых и хлопковом масле — 0,3 мг/кг, в мясе и яйце — 1 мг/кг, в молоке — не допускается.

2. Методика определения дифоса в продуктах животного происхождения методом тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода.

Метод основан на извлечении препарата из тканей животного ацетоном, осаждении коэкстрактивных веществ из водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на холоду, последующем переэкстрагировании дифоса в гексан, хроматографировании на пластинках «Силуфол», в двух системах растворителей: н-гексан — ацетон и диэтиловый эфир — н-гексан. Для проявления хроматограмм применяют раствор бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой лимонной кислотой. Количественное определение проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен препарата из анализируемых проб и стандартных растворов.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода.

• Диапазон определения концентраций — 0,2 — 25 мкг дифоса в анализируемой пробе;
• Предел обнаружения — 0,2 мкг или 0,02 — 0,05 мг/кг, мг/л;
• Размах варьирования — 70 — 90%;
• Среднее значение определения стандартных количеств дифоса — 79,8%;
• Стандартное отклонение — 4,8;
• Относительное стандартное отклонение — 0,06;
• Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 10 — 79,8 +/- 5,7.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79;

н-Гексан, хч, ТУ-6-09-3375-78;

Эфир диэтиловый (для наркоза);

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76;

Натрий едкий, хч, ГОСТ 4328-66;

Уксусная кислота (ледяная), чда, ГОСТ 61-69;

Свинец уксуснокислый или свинец уксуснокислый основной, чда, ТУ 6-09-4140-76;

Лимонная кислота, чда, ГОСТ 3652-69;

Бромфеноловый синий, чда, ТУ МГ УХП 271-59;

Серебро азотнокислое, ч, ГОСТ 1277-75;

Дифос — стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл препарата.

2.3. Приборы аппаратура и посуда

Пластинки «Силуфол» производства ЧССР;

Центрифуга лабораторная стандартная ИЛС-3 или аналогичная (объем стаканов 80 — 100 мл);

Шкаф вытяжной;

Шкаф сушильный;

Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный;

Весы технические;

Весы торсионные, тип ВТ, ТУ 64-1-900-77;

Посуда химическая по ГОСТ 23932-79Е (колбы конические с притертыми пробками — 100 мл; воронки делительные — 200 мл; воронки конические — 5 см; пробирки мерные — 10 мл; цилиндры — 10, 50, 100 мл; пипетки, микропипетки, стаканы химические);

Чашки фарфоровые выпарительные дм 5 — 7 см;

Камеры хроматографические;

Камера для опрыскивания хроматограмм;

Опрыскиватели стеклянные.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Приготовление 20-процентного водного раствора уксуснокислого свинца:

20 г уксуснокислого свинца растворяют в 80 мл дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца 20 г его растворяют при легком подогревании в 80 мл 5-процентной уксусной кислоты и рН раствора доводят едким натрием до 5,4 — 5,6. Хранят в закрытой посуде.

2.4.2 Приготовление 10-процентного водного раствора уксусной кислоты.

10 мл ледяной уксусной кислоты смешивают с 90 мл дистиллированной воды.

2.4.3 Приготовление проявляющегося реактива:

Реактив 1,25 мг бромфенолового синего растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50 мл 0,25-процентным раствором азотнокислого серебра (0,125 г азотнокислого серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и добавляют 35 мл ацетона). Хранят в закрытой посуде из темного стекла при температуре +4 — 6 °С в течение месяца.

Реактив 2,2-процентный раствор лимонной кислоты. 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят в закрытой посуде при температуре +4 — 6 °С в течение 5 — 6 дней.

2.4.4. Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за № 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов.

    Навеску  мяса,  печени,  почек, легкого,  сердца  по 10 г, жира 2 - 3 г
измельчают ножницами  и помещают  в колбу с притертой пробкой, молока берут
10 мл. Пробы заливают 10 мл ацетона, тщательно перемешивают и  экстрагируют
на аппарате для  встряхивания  в  течение  80  минут.  Ацетоновый  экстракт
фильтруют в чистую колбу через воронку с ватным  фильтром.  Пробы промывают

10 мл ацетона и пропускают через тот же фильтр. К объединенному ацетоновому

экстракту   приливают   20  мл   дистиллированной   воды,   2 мл   раствора
уксуснокислого  свинца  и  помещают  в  испаритель  холодильника на  1 час.
(Экстракты жира лучше оставлять в испарителе холодильника  на ночь.)  После
этого  содержимое переносят  в  центрифужные  стаканы и  центрифугируют  на

                                                       -1

протяжении   3 - 5 мин.  при  частоте  вращения  3000  мин.    Надосадочную
жидкость  сливают  в  чистую делительную   воронку.  (Если  на  поверхности
экстракта  имеются  взвешенные частицы, его дополнительно  фильтруют  через
воронку фильтром.)  В делительную  воронку  добавляют  10 мл  10-процентной
уксусной кислоты и 60 мл дистиллированной  воды.  Дифос  реэкстрагируют  из
этой  смеси трижды  н-гексаном,  используя   каждый  раз  10 мл  экстракта.
При плохом разделении слоев,  в связи с  образованием  эмульсии,  добавляют

5 мл насыщенного раствора натрия сернокислого.

Объединенные гексановые экстракты сушат над натрием сернокислым безводным в течение 10 — 15 минут. Упаривание экстракта проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до объема 0,2 — 0,3 мл.

2.5.2 Хроматографирование.

Сконцентрированный гексановый экстракт наносят на пластинку «силуфол» на расстоянии 1,5 см от нижнего края и 3,5 см от правого вертикального края. Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.

Для выявления дифоса используют двухмерную хроматографию. Сначала пластинку помещают в хроматографическую камеру горизонтально (на левый край), куда налита смесь ацетона с гексаном (1:5). После того, как фронт растворителей пройдет всю пластинку, ее подсушивают на воздухе и данную процедуру повторяют еще дважды.

Слева от нанесенной пробы наносят на пластинку стандартный раствор дифоса. Пластинку помещают в вертикальном положении в камеру со смесью растворителей эфир — н-гексан (1:2). Общий объем подвижных растворителей в камере подбирают таким образом, чтобы хроматографические пластинки погружались на 0,4 — 0,5 см. После того, как фронт растворителей поднимется на высоту 10 см от старта, пластинку вынимают и сушат на воздухе.

2.5.3 Проявление.

После испарения растворителей пластинку опрыскивают бромфеноловым синим с азотнокислым серебром и помещают на 5 минут в сушильный шкаф при температуре 30 °С. Затем пластинку опрыскивают раствором лимонной кислоты. Дифос проявляет в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне. На обработку одной пластины расходуют 3 — 5 мл проявляющих реактивов. Величина Rf составляет 0,32.

2.6. Обработка результатов

Количество дифоса в анализируемом объеме определяют путем сравнения площади и интенсивности окраски пятна пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы:

                    А х 1,25   100

Х = -------- х ----, мк/кг или мг/л, М К

где:

К — количество препарата в исследуемом материале (мк/кг; мг/л);

А — количество препарата, выявленное на пластинке (мкг);

М — масса исследуемой пробы (г, мл);

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами.

---