Временная инструкция по лабораторной диагностике синдрома острого респираторного заболевания (SARS) (атипичной пневмонии)
(направлена Письмом Минздрава РФ от 22.04.2003 № 2510/4220-03-32)
Направлена Письмом Минздрава РФ от 22 апреля 2003 г. № 2510/4220-03-32
ВРЕМЕННАЯ ИНСТРУКЦИЯ
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ СИНДРОМА ОСТРОГО
РЕСПИРАТОРНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ (SARS) (АТИПИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ)
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Настоящая инструкция определяет временный порядок и правила проведения лабораторных исследований по специфической диагностике «атипичной пневмонии», предположительно вызванной коронавирусом SARS.
1.2. Инструкция разработана в помощь специалистам центров госсанэпиднадзора и лабораторий генодиагностики, принимающим участие в проведении санитарно-противоэпидемических и лабораторно-диагностических мероприятий при «атипичной пневмонии».
1.3. Настоящей инструкцией следует руководствоваться при осуществлении на территории Российской Федерации государственного санитарно-эпидемиологического надзора до периода завершения разработки и окончательной верификации диагностических препаратов к вирусу SARS.
1.4. «Атипичная пневмония» — новое вирусное инфекционное заболевание с преимущественно воздушно-капельным механизмом заражения, характеризуемое тяжелым течением и поражением преимущественно нижних отделов органов дыхания. Инкубационный период заболеваний составляет 2 — 14 суток, в среднем 7 — 10 суток.
1.5. Возбудителем «атипичной пневмонии» является вирус SARS, относящийся к семейству Coronaviridae. В некоторых случаях вместе с вирусом SARS обнаруживается также человеческий метапневмовирус, относящейся к семейству Pneumoviridae. Значение метапневмовируса в патогенезе «атипичной пневмонии» до настоящего времени окончательно не выяснено.
1.6. Высокая патогенность вируса и доказанная возможность заражения медицинского персонала при обслуживании больных «атипичной пневмонией» требуют тщательного соблюдения мер биобезопасности при обращении со всеми материалами и образцами, предположительно содержащими вирус SARS.
В настоящее время специалистами ВОЗ при работе с этим возбудителем рекомендован уровень BSL-3 (Вторая группа патогенности по классификации патогенных агентов, принятой в Российской Федерации). Запрещается проведение вирусологических исследований по выделению возбудителя в лабораториях, не оснащенных системами безопасности и не имеющих соответствующей лицензии.
2. ОТБОР ПРОБ И ТРАНСПОРТИРОВКА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ ЛЮДЕЙ
2.1. Организация отбора проб и транспортировка биологического материала от больных (трупов) при регистрации спорадических случаев и вспышек «атипичной пневмонии» осуществляется квалифицированным персоналом в соответствии с требованиями СП 1.2.011-94 «Безопасность работы с микроорганизмами 1 — 2 групп патогенности» и СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов 1 — 4 групп патогенности».
2.2. Отбор проб от больных и подозрительных на заражение вирусом SARS осуществляет медицинский персонал, с соблюдением правил противоэпидемического режима.
2.3 Для исследования следует использовать следующие пробы:
- кровь больных (с 1 дня температуры по 10 сутки заболевания);
- смывы носоглотки, мокрота, бронхоальвеолярные смывы (в т.ч. после лаважа бронхов);
- сыворотка крови лиц, подозрительных на заражение (на 1 и 21 — 28 сутки);.
- секционный материал: легкие, сегментарные бронхи, кровь, печень, селезенка.
2.4. Отобранный с соблюдением правил асептики материал помещают в стерильные пробирки с плотно закрывающимися (завинчивающимися) пробками, этикетируют (с указанием фамилии, имени, отчества больного, вида материала и даты отбора) и помещают вместе с направлением в первичную герметичную емкость для транспортировки.
2.5. Кровь больных, смывы и секционный материал для вирусологического исследования транспортируют в специализированную лабораторию в течение не более 24 часов при температуре -20 град. С (термосы с хладоагентом или сухим льдом). Консервант в эти пробы не добавляется.
Парные сыворотки крови инактивируют на водяной бане при температуре 56 град. С в течение 45 мин. с добавлением консерванта (мертиолята натрия 1:10000), после чего транспортируют при температуре 4 град. С.
2.6. Пробы, предназначенные для передачи в вирусологическую лабораторию и содержащие неинактивированный возбудитель, помещают во вторичную герметичную тару, имеющую определенную СП 1.2.036-95 маркировку.
3. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СИНДРОМА ОСТРОГО РЕСПИРАТОРНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ («АТИПИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ»)
3.1. Лабораторная диагностика «атипичной пневмонии» проводится вирусологическими, серологическим и молекулярно-биологическими методами.
3.2. Временно, в связи с недостаточностью экспериментальных данных, объем диагностических мероприятий устанавливается в зависимости от уровня и оснащенности учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы:
| Уровень | Привлекаемые учреждения | Основные задачи в организации и проведении диагностики атипичной пневмонии |
| Муниципальный | Центры госсанэпиднадзора в районах, городах | 1. Эпидемиологический мониторинг заболеваемости, надзор за контингентами повышенного риска. 2. Контроль противоэпидемического режима, в т.ч. при подготовке и передаче проб для последующей лабораторной диагностики. |
| Региональный | Центры госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации | 1. Организация и контроль противоэпидемических мероприятий в зоне ответственности. 2. Контроль противоэпидемического режима в диагностических лабораториях центров генодиагностики. |
| Центры генодиагностики научно-исследовательских противочумных институтах, противочумные станции | 1. Молекулярно-биологический анализ методом ПЦР <*>. 2. Серологические исследования сывороток от контактных лиц. | |
| Федеральный | Научно-исследовательские институты РАМН, Центр специальной лабораторной диагностики НИИ микробиологии Минобороны России, ГНЦ ВБ «Вектор» | 1. Вирусологические исследования. 2. Подтверждающие исследования с положительными на SARS пробами. |
<*> — При наличии отдельного помещения для пробоподготовки (пре-ПЦР), оборудованного боксирующим устройством.
3.3 Выявление РНК вируса SARS методом ОТ-ПЦР
В связи с существенными трудностями в культивировании и выделении коронавирусов, методы генодиагностики являются в настоящее время ведущими в подтверждении связи заболевания «атипичной пневмонией» с вирусом SARS. Принцип метода состоит в направленной амплификации фрагмента консервативного гена РНК-зависимой РНК-полимеразы возбудителя, геномную нуклеиновую кислоту которого можно выявить в сыворотке крови больных с начала лихорадочного периода до 10 — 14 суток заболевания.
Сотрудничающими с ВОЗ центрами предложен ряд праймеров, которые могут быть использованы для первичной оценки наличия вируса SARS в пробе <*>:
<*> Праймеры не верифицированы в Российской Федерации как диагностические препараты для диагностики «атипичной пневмонии» в связи с временным отсутствием вирусной РНК или ее опубликованной последовательности.
РНК из проб клинического материала выделяют с помощью любого коммерческого набора для выделения РНК/ДНК, обеспечивающего инактивацию возбудителя, в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя. В качестве отрицательных контролей используют деионизированную воду.
Полученный в ОТ-ПЦР положительный результат не является безусловным доказательством наличия вируса SARS, а проба от данного больного подлежит направлению в специализированный центр для проведения подтверждающего анализа.