Временные методические указания по определению розалина в растительных объектах, воде и почве хромато-спектрофотометрическим методом
(утв. Минздравом СССР 22.10.1981 № 2471-81)
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А. И. Заиченко
22 октября 1981 г. № 2471-81
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОЗАЛИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ, ВОДЕ И ПОЧВЕ ХРОМАТО-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия Временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Cl
| 8 7 2 |
|---|
\\ / \ //\
5-хлор-2-метил-бензимидазола — порошок белого цвета с кремоватым оттенком с температурой плавления 204 — 206 °С. Хорошо растворяется в этиловом, метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне, хлороформе, растворим в горячей воде, нерастворим в бензоле.
Розалин - гербицид избирательного действия против однолетних сорняков на посевах хлопчатника. ЛД для крыс составляет 600 мг/кг.
50
2. Методика определения розалина в растительных объектах, в воде и почве
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на хроматографировании розалина в тонком слое силикагеля в системе: бензол — ацетон (2:3) с проявлением зоны локализации препарата на пластинке 0,05-процентным раствором азотнокислого серебра. Количественное определение проводят измерением оптической плотности этанольного элюата на спектрофотометре СФ-16 при длине волны 246 нм в кюветах толщиной слоя 1 см. Чувствительность определения 1 мкг в анализируемой пробе.
2.1.2 Метрологическая характеристика
Диапазон определяемых концентраций:
растительный объект — 0,05 — 1,0 мг/кг;
вода - 0,01 - 1,0 мг/л; почва - 0,02 - 1,0 мг/кг.
растительный объект — 0,05 мг/кг;
вода - 0,01 мг/л; почва - 0,02 мг/кг.
Число параллельных определений:
вода - 5; почва - 5.
вода - 91,8%; почва - 91,6%.
вода - 0,0204; почва - 0,013.
Относительное стандартное отклонение:
вода - 0,0394; почва - 0,072.
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5, в %:
растительный объект — 2,5 — 3,10;
вода - 2,5 - 3,80; почва - 1,8 - 4,12.
2.1.3 Избирательность метода
Определению не мешают — ГХЦГ, ДДЕ, ДДД, ДДТ, рогор, антио, базудин.
2.2. Реактивы и растворы
Стандартные растворы розалина, х.ч., содержащие 100 мкг/мл хлороформа и спирта. 10 мг розалина растворяют в хлороформе в мерной колбе на 100 мл и доводят до метки. Раствор устойчив и течение 3-х месяцев при хранении на холоду. Точно так же готовят стандартный раствор розалина в спирте.
Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.
Натрий сернокислый, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Окись алюминия, ч.д.а., МРТУ 6-09-2046-64.
Йод кристаллический, ч.д.а., ГОСТ 4139-79.
Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76.
Этиловый спирт ректификат, ТУ 6-09-4512-77.
Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-75, 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор (1 ч. воды и 3 ч. ацетона).
Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76, 0,05 гр. растворяют в 10 мл ацетона (последний разбавляют раствором азотнокислого серебра до объема 100 мл).
Лимонная кислота, х.ч., ГОСТ 3652-69, 2-процентный водный раствор.
Эфир диэтиловый, ГОСТ 6266-52.
2.3. Приборы и посуда
Спектрофотометр СФ-4А или СФ-16.
Пластинки хроматографические марки «Silufol Uv-254».
Делительные воронки на 500 и 250 мл.
Мерные колбы на 100 и 25 мл, ГОСТ 1770-74.
Пипетки, ГОСТ 20292-74.
Камера для хроматографирования.
Колонка хроматографическая стеклянная.
Прибор для отгонки растворителя.
Шприцы комбинированные, ТУ 64-1-378-73.
2.4. Отбор, хранение и доставка проб
2.4.1. Отбор проб проводится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за № 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Условия экстракции и очистки
Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку, заливают 30 мл хлороформа и экстрагируют 10 мин. Экстракцию повторяют с 30 и 20 мл хлороформа. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием (10 гр.) в течение 5 мин., далее экстракт переносят в колбу для отгонки растворителя. Растворитель упаривают почти досуха (остаток в колбе 0,2 — 0,3 мл, испаряют при обычной температуре).
Почва. К 50 гр. увлажненной навески приливают 40 мл хлороформа, перемешивают 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют с 30 мл хлороформа дважды. Объединенные экстракты фильтруют через бумажный фильтр. Сушат безводным сернокислым натрием (10 гр.) 5 мин. Экстракт количественно переносят в колбу для отгонки растворителя и упаривают почти досуха.
Растительный материал. 20 гр. воздушно-сухого измельченного растительного материала (листья, стебли хлопчатника, надземная часть люцерны) помещают в колбу на 500 мл, заливают 200 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 30 мин. Гомогенат фильтруют в горячем виде, остаток на фильтре промывают несколькими порциями горячей дистиллированной воды. Фильтраты объединяют, количественно переносят в делительную воронку емкостью 500 мл и экстрагируют хлороформом по 30 мл трижды. Экстракты объединяют и очищают от коэкстрактивных веществ, пропуская его через хроматографическую колонку, заполненную обезжиренной ватой (2 см), окисью алюминия (5 — 6 см) и безводным сернокислым натрием (5 — 6 см). Колонку перед тем, как пропустить пробу, промывают хлороформом. Растворитель упаривают почти досуха.
2.5.2 Хроматографирование
Сухой остаток в колбе после упаривания растворяют в 0,3 - 0,5 мл хлороформа. Пробу при помощи туберкулинового шприца количественно наносят на середину хроматографической пластинки так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Колбу дважды промывают небольшими порциями (0,4 мл)
хлороформа, которые также наносят в ту же точку. На соседние полосы наносят
стандартный раствор розалина, содержащий 2 и 5 мкг препарата. Пластинку с нанесенными пробами и стандартами помещают в камеру для хроматографирования, предварительно насыщенную в течение 30 мин. бензол - ацетоном в соотношении 2:3. Край пластинки погружают в растворитель не более чем на 0,5 см. После поднятия фронта растворителя на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на воздухе до полного испарения растворителей. Затем пластинку опрыскивают проявляющей смесью 0,05-процентного бромфенолового синего в ацетоне и 0,5-процентного азотнокислого серебра. После того, как пластинка подсохнет, ее орошают лимонной кислотой для закрепления окраски пятна. На темном фоне пластинки проявляются синие пятна розалина с R = 0,56 +/- 0,05.
f
2.5.3 Альтернативные условия хроматографирования
Содержимое колбы после отгонки растворителя при определении розалина в воде, почве и растительном материале растворяют в 0,2 мл хлороформа. Пластинку делят по длине на три параллельные полосы. На первую и вторую полосу наносят в виде сплошной линии раствор экстрактов. Стенки колбы ополаскивают небольшими порциями хлороформа и наносят на те же полосы. На третью полосу наносят стандартный раствор розалина, содержащий 10 мкг препарата. Пластинку помещают в камеру, куда за 20 - 30 мин. до хроматографирования наливают смесь растворителей: спирт - гексан в соотношении 1:1. Как только фронт растворителя достигнет высоты 10 см,
пластинку вынимают из камеры и после удаления запаха растворителей первую и вторую полосу закрывают стеклом и пластинку помещают в йодную камеру на 5 -
10 мин. Розалин обнаруживают на третьей полосе по темно-коричневому пятну на желтом фоне R = 0,60 +/- 0,07. По проявленной зоне отмечают участки
f
силикагеля на первой и второй полосах и переносят зоны розалина в колбу емкостью 100 мл. Элюируют 10 мл этилового спирта встряхиванием в течение 30 мин. Соответственно элюируют и зону чистого силикагеля и измеряют оптическую плотность элюатов при 246 нм.
Количество розалина определяют по калибровочному графику или сравнением оптических плотностей стандартного и испытуемого растворов. Для построения калибровочного графика в мерных колбах готовят стандартные растворы 5-хлор-2-метил-бензимидазола с концентрацией 1, 2, 5, 10, 15, 20 мкг/мл. Измеряют оптические плотности растворов при 246 нм и строят калибровочный график Д = f(c), где c — концентрация розалина.
2.5.4 Обработка результатов анализа
Количественное определение розалина в анализируемой пробе проводится визуально по интенсивности окрашивания пятен на хроматограмме и по площади пятен стандартных растворов и проб.
Концентрацию розалина (Х) в воде, почве и растительном материале вычисляют по формуле:
А х S
2
Х — содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л;
А — количество препарата, найденное путем визуального сравнения размера и интенсивности пятен пробы и стандартных растворов, мкг;
В — содержание препарата в стандартном растворе, мкг;
S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2
S — площадь пятен стандартного раствора, кв. мм. 1
При спектрофотометрическом определении содержание розалина в пробе вычисляют по формуле:
А х В
Х — содержание розалина в анализируемой пробе, мг/кг или мг/л;
А — количество розалина, найденное по калибровочному графику, мкг;
В — общий объем экстракта, мл;
С — объем раствора, нанесенный на хроматограмму, мл;
Р — масса анализируемой пробы, г.
3. Требования безопасности
Соблюдать общие правила по технике безопасности, необходимые при работе с химическими реактивами и пестицидами.
4. Разработчики
Методические рекомендации подготовлены сотрудниками УзНИИСТПз и Института химии растительных веществ АН УзССР.
| Объект | Используемая концентрация | Точность определения в % | С | S | S 2 | ДЕЛЬТА S |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Растительный материал | 0,95 0,015 0,24 | 95 96 86 | 0,0475 0,0144 0,206 | 0,0025 0,011 0,022 | 0,053 0,821 0,1092 | 0,0032 0,0148 0,028 |
| Вода | 0,15 0,4 0,3 | 95,5 92 88 | 0,143 0,368 0,264 | 0,0046 0,0274 0,029 | 0,032 0,074 0,112 | 0,0058 0,348 0,037 |
| Почва | 0,10 0,24 0,3 | 92 96 88 | 0,092 0,228 0,264 | 0,0061 0,0093 0,0296 | 0,0665 0,041 0,112 | 0,0076 0,0117 0,0371 |