Методические указания по определению ровраля в воде, почве, томатах, картофеле, винограде, виноградном соке и вине методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 06.08.1981 № 2422-81)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОВРАЛЯ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ТОМАТАХ, КАРТОФЕЛЕ, ВИНОГРАДЕ, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ И ВИНЕ МЕТОДОМ

---

<*> Разработаны Филиалом ВНИИГИНТОКС, Республиканской станцией защиты растений, г. Алма-Ата.

    Краткая        характеристика        препарата.        Ровраль        -
1-изопропил-карбамоил-3-(3,5-дихлорфенил)-3-гидантоин.    Брутто -  формула
C  H  O N C  . Молекулярная масса 330,17. Общепринятое название - ипродион.

13 13 3 3 12

ДСД  0,3  мг/кг.  В  винограде МДУ 0,4 мг/кг, содержание остатков ровраля в
землянике,  картофеле,  огурцах,  томатах  не  допускается. В воде ПДК 0,03
мг/л.  Химически  чистый  препарат  -  белое  кристаллическое  вещество без

запаха, т. пл. 136 °С, растворим в этаноле, ацетонитриле, толуоле, бензоле, ацетоне, метилене хлористом и практически нерастворим в воде. Упругость -5 паров незначительна: при 20 °С — 2,7 х 10 Па. Ровраль — фунгицид,

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемых проб органическим растворителем ацетонитрилом или ацетоном, очистке экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и последующем определении методом ТСХ. При необходимости экстракт дополнительно очищают на колонке с силикагелем.

Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 131.

Таблица 131

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Параметры	Анализируемый объект
	Вода	Почва	Томаты	Картофель	Виноград	Виноградный сок	Вино
Предел обнаружения, мкг Предел определения, мг/л или мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал (n = 5, p = 0,95), %	2,0 0,02 93,5 +/- 4,52 +/- 5,61	2,5 0,05 87,6 +/- 3,29 +/- 4,08	5,0 0,1 83,0 +/- 5,70 +/- 7,07	2,5 0,05 90,8 +/- 3,62 +/- 4,49	5,0 0,2 84,0 +/- 5,50 +/- 6,80	5,0 0,1 86,0 +/- 5,90 +/- 7,30	5,0 0,1 76,0 +/- 5,50 +/- 6,80

Избирательность метода. Определению ровраля не мешают препараты дерозал, бенлат, зупарен, применяемые, как и ровраль, при борьбе с серой гнилью.

Реактивы и материалы. Ацетонитрил, ч. Бензол, х.ч. н-Гексан, ч. Толуол,

ч.д.а.    Сульфат    натрия    безводный,    ч.д.а.    Хлористый   метилен,
свежеперегнанный.  Ацетон, ч.д.а. Гептан, х.ч. Этиловый эфир (медицинский).
Едкий   натр,  х.ч.,  1  М  водный  раствор.  Едкое  кали  особой  чистоты,
15-процентный.   Этиловый   спирт,  х.ч.  Хлороформ,  х.ч.  Хлороводородная

кислота, х.ч., 0,1 М и 5 М. Нитрит натрия, х.ч. Хлорид аммония 5-процентный

раствор  в  0,1  М хлороводородной кислоте или аммоний  сульфаниловокислый,
5-процентный  раствор  в  0,1  М  хлороводородной кислоте. Этилацетат, х.ч.
Силикагель  для  хроматографии  Л  100/160   мю.   N-(1-нафтил)этилендиамин

дигидрохлорид, ч. 1-Нафтол, ч.д.а. Дифениламин, ч.д.а. Хлорид цинка, ч.д.а. Пластинки хроматографические «Силуфол» УФ . Диазореактив: к 10 г нитрита 254

натрия  приливают 20 мл концентрированной хлороводородной кислоты и доводят
объем  жидкости  до  50  мл  дистиллированной  водой  (раствор используется
свежеприготовленным).  Проявляющие  реагенты:  N  1  -  5  г   N-(1-нафтил)
этилендиамина растворяют в  100  мл  1  М  хлороводородной  кислоты;  N 2 -
1-процентный раствор 1-нафтола в этиловом спирте; N 3 - 2,8 г  едкого  кали
растворяют в 50 мл дистиллированной  воды  и  добавляют  0,1  г  1-нафтола.
Раствор  устойчив в течение 7 дней при хранении в холодильнике; N 4 - 0,5 г
дифениламина  растворяют  в  100  мл  ацетона  и добавляют 0,5 г хлористого
цинка.   Раствор   используется  свежеприготовленным.  Стандартный  раствор

ровраля с содержанием 100 мкг д.в. препарата в 1 мл хлороформа, ацетона или этилового спирта. Готовят из х.ч. или технического препарата с учетом процентного содержания действующего вещества. Раствор устойчив в течение 10

• 15 дней.

Приборы, аппаратура и посуда. Прибор для отгонки растворителей. Камера для хроматографирования. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Воронки: делительные на 0,5 и 1 л; химические; Бюхнера. Колбы: конические на 0,25 и 1 л; мерные на 100 и 1000 мл; стеклянные размером 300 х 15 мм для колоночной хроматографии, круглодонные со шлифом 29 на 250 мл; Бунзена. Пипетки на 1; 2 и 5 мл.

Микропипетки. Пульверизаторы стеклянные. Шкаф сушильный. Вентилятор или фен. Водоструйный насос. Стекловата.

Подготовка к определению хроматографической колонки. В стеклянную колонку (300 х 15 мм) помещают небольшой стекловатный тампон, затем селикагель на высоту 10 см. Перед употреблением колонку промывают 50 мл гексана.

Ход анализа. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 60 — 70 °С. Остаток количественно переносят ацетоном на хроматографическую пластинку.

Пробу измельченного растительного материала (томаты, картофель) или почвы (50 г) экстрагируют трижды 75 мл ацетонитрила, экстракты фильтруют в делительную воронку и очищают гексаном 3 раза по 30 мл, гексановый экстракт промывают 30 мл ацетонитрила и сливают с начальным ацетонитрильным экстрактом, а гексановый экстракт отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают на ротационном испарителе до 20 — 30 мл. К остатку ацетонитрила добавляют смесь воды с хлористым метиленом (80:50) и встряхивают 5 мин. Отделяют хлористый метилен и пропускают через безводный сернокислый натрий в круглодонную колбу, водный раствор экстрагируют метиленом хлористым еще дважды по 30 мл, пропускают через безводный сернокислый натрий и собирают в круглодонную колбу ротационного испарителя. Растворитель выпаривают досуха. Если экстракты очистились недостаточно, очистку проводят на хроматографической колонке.

Измельченные ягоды винограда (25 г) гомогенизируют с 150 мл ацетона 5 — 10 мин. Массу фильтруют на воронке Бюхнера, осадок промывают двумя порциями ацетона по 50 мл. Из объединенного фильтрата растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре не более 65 °С, а оставшуюся жидкость переносят количественно в делительную воронку и добавляют 50 мл бензола, встряхивают 3 — 5 мин. При образовании эмульсии добавляют 1 мл этилового спирта. Бензольный экстракт фильтруют в колбу через слой безводного сернокислого натрия и отгоняют до 0,5 — 1 мл. Следы растворителя удаляют током воздуха. Сухой остаток растворяют в ацетоне, переносят количественно на хроматографическую пластинку.

Сок или вино (50 мл) помещают в коническую колбу на 1 л и встряхивают с 250 мл ацетона 1 — 2 мин. Затем оставляют в покое на 10 мин. Из смеси растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре 65 °С. Дальше поступают, как описано для винограда.

Очистка на колонке. Пробу вносят в колонку с помощью 25 мл гексана (5 х 5 мл). Коэкстрактивные вещества вымывают из колонки 50 мл гексана, препарат элюируют 25 мл хлористого метилена, затем 5-процентным раствором этилацетата в хлористом метилене (100 мл). Элюат упаривают.

Хроматографирование. Хроматографирование проводят нисходящим способом. Хроматографические пластинки «Силуфол» сгибают от верхнего края на 2 см. Пробы с помощью ацетона и стандартные растворы наносят на пластинку на расстоянии 2 см от линии сгиба. Гнутый конец пластинки помещают в лодочку, в которую налит подвижный растворитель — смесь гептан — этиловый эфир (1:4) или смесь толуол — этанол (93:7). Лодочка помещена в камеру для хроматографирования. После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей.

Условия проявления хроматограмм (в зависимости от проявляющего реактива): А. Хроматограмму опрыскивают смесью 1 М раствора едкого натра и этилового спирта (50:50). Выдерживают пластинку в сушильном шкафу при 120 °С в течение 10 мин., затем опрыскивают последовательно 5 М хлороводородной кислотой, диазореактивом, 5-процентным раствором хлорида аммония и сульфаминокислого аммония в 0,1 М хлороводородной кислоте. После высушивания пластинок в токе воздуха хроматограмму обрабатывают проявляющим реагентом № 1 или № 2;

Б. Пластинки опрыскивают 15-процентным спиртовым раствором едкого кали и термостатируют при 150 °С в течение 20 мин., затем пластинки последовательно обрабатывают диазореактивом и проявляющим реагентом № 3 или № 4.

    При   наличии   ровраля   в   пробе   на   хроматограммах   проявляются
розово-фиолетовые  пятна  в  случае  применения  проявляющего реагента N 1,
оранжевые  пятна  -  в  случае применения реагента N 2, 3 или малиновые - в
случае применения реагента N 4. Величина R  пятен 0,35 (гептан - диэтиловый

                                      f

эфир, 1:4) и 0,50 — 0,55 (толуол — этанол, 93:7).

Обработка результатов анализа. Количественная оценка хроматограмм проводится путем сравнения площадей пятен и их интенсивности, проб и стандартных растворов. Содержание препарата в исследуемой пробе (Х, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                                  А

Х = -, Р

где:

---