Методические указания по определению остаточных количеств НЕ-166 в огурцах хроматографией в тонком слое и фотометрическим методом

(утв. Минздравом СССР 28.01.1980 № 2131-80)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ НЕ-166 В ОГУРЦАХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ И ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

НЕ-166 — рекомендуемый японской фирмой Nissho-Iwai Co. препарат в качестве гербицида для борьбы с сорняками при тепличном выращивании огурцов. Действующее начало препарата — 2,4-динитро-6-терт-бутилфенилметил сульфонат.

         NO

          ───  2
     O N//   \\OSO CH                                     C  H  O N S.
      2 \ ___ /   2  3                                     11 14 7 2
          ───                                             Мол. масса 318,1.

     CH -C-CH

3	3

         CH
           3

НЕ-166 в чистом виде — кристаллы со слабым ароматическим запахом, бесцветные. Т пл. 232,5 — 133,5 °С. Раствор НЕ-166 в гексане имеет максимум светопоглощения при 230 нм Е-450. Растворимость НЕ-166 при комнатной температуре в 100 мл растворителя следующая: в диметилформамиде — 100 г, диоксане — 57 г, ацетоне — 37 г, бензоле — 16 г, ксилоле — 6 г, этиловом эфире — 1,4 г, метаноле — 0,7 г, н-бутиловом спирте — 0,15 г, изооктане — 0,02 г, н-гексане — 0,02 г, воде — 0,008 г. НЕ-166 стабилен на свету, чувствителен к влаге, основаниям, кислотам. Гидролитически разлагается до 2,4-динитро-6-терт-бутилфенола и метилсульфоновой кислоты.

ПДК НЕ-166 в продуктах питания не установлена.

2. Методики определения НЕ-166 в огурцах

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода.

Метод основан на извлечении НЕ-166 из огурцов ацетоном, перераспределении его из ацетоно-водной среды в хлороформ, доочистке экстракта микросублимацией в вакууме с последующим определением методом ТСХ или фотометрическим методом в виде продукта щелочного гидролиза (2,4-динитро-6-терт-бутилфенолята натрия) при лямбда 430 нм.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода.

Диапазон измеряемых концентраций тонкослойной хроматографией 0,04 — 0,4 мг/кг, фотометрическим методом 0,2 — 3,2 мг/кг.

Предел обнаружения:

тонкослойной хроматографией 1 мкг

фотометрическим методом 5 мкг

Предел обнаружения:

тонкослойной хроматографией 0,04 мг/кг

фотометрическим методом 0,2 мг/кг _

Среднее значение определения стандартных количеств пестицидов о при n = 15: тонкослойной хроматографией 80,0%

фотометрическим методом 91,8% при содержании НЕ-166 0,4 мг/кг и выше и 43,0% при содержании 0,2 мг/кг.

Стандартное отклонение S:

тонкослойной хроматографией +/- 13,6%

фотометрическим методом +/- 12,5%

Относительное стандартное отклонение S : 2

тонкослойной хроматографией +/- 17,0%

фотометрическим методом +/- 8,0%

Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5

тонкослойной хроматографией 80,0 +/- 17,5%

фотометрическим методом 91,8 +/- 16,1%

Размах варьирования R тонкослойной хроматографией 70 — 90%

фотометрическим методом 71,5 — 112,0%

2.1.3 Избирательность метода.

Прочие пестициды, рекомендуемые для обработки огурцов в тепличных условиях, в том числе карбофос, трихлорметафос-3, кельтан, тедион, немагон, купрозан, цинеб, беномил, ФДН, топсин-М, определению обоими методами не мешают. Акрекс и диносеб при определении ТСХ не мешают, а фотометрическим методом могут определяться в сумме.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, ГОСТ 2603-71, чда.

Гексан, МРТУ 6-09-2937-66, чда.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный над P O . 2 5

Изооктан, ТУ 6-09-921-71, для хроматографии.

Na SO , хч, безводный, ГОСТ 4166-76.

      2  4
    NaOH,  6-процентный  раствор  в  C H OH, 5-процентный водный раствор по

                                  2 5

ГОСТ 4328-66.

Стандартные растворы НЕ-166 в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор А) и 10 мкг/мл (раствор Б).

Для приготовления стандартного раствора А в мерную колбу емкостью 100 мл взвешивают 10 мг НЕ-166 с точностью +/- 0,0002 г. Содержимое колбы растворяют в 20 мл ацетона, а затем доводят до метки тем же растворителем.

Для приготовления раствора Б из раствора А пипеткой отбирают 10 мл, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки ацетоном.

Растворы А и Б при хранении в холодильнике стабильны в течение 2-х месяцев.

2.3. Приборы и посуда

Спектрофотометр.

Аппарат для встряхивания.

Ротационный вакуумный испаритель.

Хроматографическая камера.

Пластинки «силуфол» без УФ-добавки.

Колбы плоскодонные на 500 мл, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки на 1 л, ГОСТ 10054-75.

Микросублиматор.

Пульверизатор.

Мерные цилиндры на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пробирки конические с пробками на шлифах на 10 — 15 мл.

Пипетки, ГОСТ 1770-74.

Стеклянные капилляры.

2.4. Ход анализа

Измельченную навеску огурцов (25 г) помешают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл ацетона и с помощью механического встряхивателя проводят экстракцию НЕ-166 в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 1 л. Экстракцию ацетоном повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. К объединенному ацетоновому экстракту добавляют 300 мл дистиллированной воды и экстрагируют НЕ-166 хлороформом порциями по 100 мл три раза. Объединенный хлороформный экстракт сушат в течение 10 — 15 мин. над безводным сульфатом натрия, после чего порциями переносят через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 100 мл и с помощью ротационного вакуумного испарителя отгоняют растворитель. Последнюю порцию отгоняют до объема 2 — 3 мл. Остаток количественно с помощью ацетона переносят в патрон сублиматора и после удаления растворителя на горячей водяной бане проводят сублимацию НЕ-166 в течение 30 мин. при температуре 100 °С и давлении 0,3 мм рт. ст. После окончания сублимации смывают НЕ-166 с пальца сублиматора 8 — 10 мл ацетона в коническую пробирку емкостью 10 — 15 мл. Далее определение проводят либо методом ТСХ, либо фотометрическим методом.

2.4.1 Метод ТСХ.

Содержимое пробирки с помощью стеклянного капилляра, заправленного в верхней части, упаривают на горячей водяной бане до объема 0,2 — 0,3 мл. Остаток количественно с помощью того же капилляра, но с отломанным запаянным концом наносят на пластинки «силуфол». Параллельно на пластинку с помощью стеклянных капилляров наносят серию стандартных растворов НЕ-166 с содержанием 1, 2, 3...1 мл. (Растворы наносят из конических пробирок, куда предварительно вносят, а затем упаривают до такого же объема 0,1; 0,2; 0,3...1,0 мл стандартного раствора Б.)

    Хроматограмму  развивают  либо  в  системе  гексан:ацетон  (3:1),  либо
изооктан:ацетон   (3:2).   После  развития  хроматограмму  сушат,  а  затем
обрабатывают  из  пульверизатора  6-процентным  спиртовым  раствором  NaOH.
НЕ-166  проявляется в виде желтых пятен на белом фоне с R  в первой системе

                                                     f

0,40  +/-  0,03  и  0,50  +/-  0,03 - во второй. Количественное определение
проводят  методом  соотношения  со  стандартом  по  площади и интенсивности

пятна. Содержание НЕ-166 в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

                                  С

                            С       = -, мг/кг,
                             НЕ-166   А

где:

С — количество НЕ-166, найденное в анализируемой пробе по хроматограмме в мкг;

А — навеска огурцов в мг (25 мг).

2.4.2 Фотометрический метод.

Содержимое пробирки упаривают до объема 3 мл, к остатку пипеткой добавляют 3 мл 5-процентного водного раствора NaOH, пробирку плотно закрывают пробкой и ее содержимое тщательно перемешивают. Вынимают пробку, через 10 — 15 мин. после разделения слоев верхний, окрашенный в желтый цвет слой осторожно переносят пипеткой с широким носиком в 1-сантиметровую кювету и фотометрируют раствор, используя в качестве раствора сравнения холостую пробу на все реактивы и растворы, подвергнутые тем же операциям, что и рабочая проба.

Содержание НЕ-166 в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

                                  с

                            С       = -, мг/кг,
                             НЕ-166   А

где:

с — количество НЕ-166, найденное в исследуемой пробе по градуировочному графику;

А — навеска огурцов в мг (25 мг).

2.4.2.1 Построение градуировочного графика.

Для построения градуировочного графика отбирают в пробирки из стандартного раствора А пипеткой 0,00; 0,05; 0,1; 0,2...0,8 мл, растворы упаривают досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 3 мл ацетона и 3 мл 5-процентного водного раствора NaOH. Далее поступают так же, как описано для рабочей пробы. Линейность сохраняется в пределах 5 — 80 мкг.

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и ядовитыми веществами.

4. Авторы

Настоящая методика включает разработки авторского коллектива ВНИИ химических средств защиты растений, г. Москва, Новиковой К.Ф., Эйнисман Л.И., Алдошиной Т.В.

---