Методические указания по определению неорона в меде методом газовой хроматографии

(утв. Минздравом СССР 28.01.1980 № 2126-80)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НЕОРОНА В МЕДЕ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика препарата

Неорон — изопропиловый эфир 4,4-дибромбензойной кислоты.

             COO(CH )
             │     3 2

\ ___ /	\ ___ /
	OH
Эмпирическая формула — C	H O Br . 17 16 3 2
Молекулярная масса — 428,13.
Синонимы: А-2529, А-2443.
Технический	продукт — твердое вещество кремового цвета. Давление паров
-7
- 5,5 х 10 мм большинстве органических нестоек в кислой	рт. ст. при 20 °С. Плохо растворяется в воде, хорошо в растворителей. Стабилен при высокой температуре, и щелочной средах. Выпускается в форме 25- и
50-процентного концентрата соединениям. ЛД	эмульсии. Неорон относится к малотоксичным его при введении в желудок крысам составляет 1,5 — 5
50 г/кг. Применяется	неорон в качестве инсекто-анарицида на хлопчатнике.
Перспективен в борьбе с вредителями садов и варроатозом пчел.

2. Методика определения неорона в меде способом газовой хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на экстракции неорона ацетоном, перераспределении его в гексан, очистке последнего в статических условиях смесью силикагеля и окиси алюминия и идентификации пестицида способом газовой хроматографии с детектором постоянной скорости рекомбинации.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций — 0,25 — 25 мкг неорона в анализируемой пробе.

Предел обнаружения — 0,025 мг/кг.

Полнота определения — 77,81%.

Стандартное отклонение — 10,4.

Относительное стандартное отклонение — 0,15.

Доверительный интервал — 6,24.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-63.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-73.

Бензол, чда, ГОСТ 5955-68.

Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-66.

Окись алюминия для хроматографии, ч, 2 степени активности, МРТУ 6-09-5296-68.

Силикагель КСК (или КСС) обрабатывают методом, общепринятым для тонкослойной хроматографии. Продажный силикагель заливают на 20 часов соляной кислотой (1:1), затем промывают водой и кипятят с разведенной азотной кислотой (1:1) в течение 2 — 3 часов. Промывают горячей водопроводной, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции и до удаления следов хлоридов (промывные воды контролируются азотнокислым серебром).

Промытый силикагель сушат при 140 °С 6 часов, дробят и просеивают через сито 100 меш.

Вода дистиллированная.

Смесь экстрагентов — бензол 3 части и гексан 1 часть.

Хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30 (или ДС-550).

Стандартный раствор неорона.

а) Отвешивают 10 мг неорона в мерную колбу на 100 мл. Неорон растворяют в гексане и доводят его до метки. Получается основной стандартный раствор с содержанием неорона 100 мкг в 1 мл.

б) Из основного раствора готовят рабочий стандартный раствор неорона, содержащий 1 мкг препарата в 1 мл. Для этого в мерную пробирку на 10 мл с притертой пробкой отмеривают 0,1 мл основного стандартного раствора и доводят объем жидкости до 10 мл.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф «Цвет-106» с детектором постоянной скорости рекомбинации. (Допускается использование другого типа хроматографа с детектором по захвату электронов.)

Вытяжной шкаф.

Воронки делительные — на 100 и 200 мл.

Стаканы химические — на 50 мл.

Воронки химические — диаметр 5 и 3 см.

Цилиндры мерные — на 50 и 10 мл.

Пробирки мерные — цена деления 0,1 мл.

2.4. Ход анализа

Отбирают среднюю пробу меда в соответствии с имеющимися инструкциями. 10 г меда растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку. Стакан ополаскивают 30 мл ацетона и сливают его в ту же делительную воронку. Содержимое перемешивают 3 минуты. После разделения жидкости нижний слой (водный раствор сахаров) отбрасывают. Верхний слой (ацетоновый экстракт) переносят в другую делительную воронку и прибавляют 70 мл дистиллированной воды. Неорон реэкстрагируют из водно-ацетонового раствора 2 раза гексаном, используя каждый раз по 10 мл экстрагента. Для этого смесь перемешивают в делительной воронке каждый раз по 3 минуты. Гексан (последовательными порциями) фильтруют через воронку со слоем безводного сернокислого натрия в выпаривательную чашку. Воронку заправляют следующим образом: в суживающуюся часть воронки диаметром 5 см вводят тампон из белой ваты (50 мг) и насыпают слой безводного сернокислого натрия — 1 - 1,5 см. Перед использованием воронку промывают 5 мл гексана, который отбрасывают. После окончания фильтрации исследуемого экстракта воронку промывают 5 мл гексана, который сливают в выпаривательную чашку.

В выпаривательную чашку с гексаном добавляют по 200 мг силикагеля и окиси алюминия. После этого гексан выпаривают под тягой вытяжного шкафа при комнатной температуре. Пестициды вымывают из сухого остатка смесью бензола с гексаном — 3:1. Сначала в чашку приливают 3 мл смеси и перемешивают содержимое стеклянной палочкой 1 минуту. Надосадочную жидкость отфильтровывают через воронку со слоем безводного сернокислого натрия в мерную пробирку. (Воронка диаметром 3 см. В суживающуюся часть воронки вводят тампон из белой ваты — 30 мг и насыпают слой безводного сернокислого натрия — 0,75 см.) Осадок в чашке и фильтр промывают еще 2 раза, используя каждый раз по 2 мл смеси бензол — гексан. Очищенный таким образом экстракт используют для газохроматографического анализа. При необходимости полученный экстракт можно сконцентрировать до объема 2 мл и вводить в хроматограф до 10 мкл жидкости.

2.5. Условия хроматографирования

Идентификацию неорона в экстракте проводят на газовом хроматографе «Цвет 106» с детектором постоянной скорости рекомбинации. Допускается использование других приборов с различными вариантами электронно-захватного детектора. Подготовка прибора к работе производится в соответствии с его техническими требованиями. В качестве газа-носителя и на продувку детектора используют азот особой чистоты.

Расход газа:

на колонку — 40 мл/мин.

на продувку детектора — 80 мл/мин.

Режим работы прибора: температура испарителя — 230 °С, температура колонки — 220 °С, температура детектора — 250 °С.

В испаритель хроматографа вводят до 10 мкл стандартного раствора или очищенного экстракта. Время удерживания неорона на колонке — 9 - 10 минут. Линейный динамический диапазон выдерживается в пределах от 0,5 до 10 нг препарата во введенной в испаритель пробе.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение неорона производится путем сравнения высоты пиков опытной пробы и стандартного раствора по следующей формуле:

                             V   х Ст х H   х 100
                              пр         пр

X = --------------------,

                             V   х H   х M   х K
                              вв    ст    пр

где:

X — количество пестицида в пробе в мг на 1 кг;

V — объем экстракта в мл; пр

Ст — количество пестицида в нг, введенное в испаритель хроматографа со стандартным раствором;

H — высота пика стандартного образца (в см); ст

V — количество экстракта, введенного в хроматограф (в мкл); вв

H — высота пика испытуемой пробы (в см); пр

M — масса пробы, взятой для экстракции (в г); пр 100

--- — коэффициент для внесения поправки на потери пестицида при K экстракции и в процессе подготовки пробы к исследованиям, где K -

3. Требования безопасности

Соблюдаются правила по технике безопасности в химических лабораториях.

Настоящие Методические указания разработаны О.А. Малининым и В.И. Ярошенко (Лаборатория фармакологии с токсикологией УНИИЭВ. г. Харьков. Зав. отделом — Академик ВАСХНИЛ И.Н. Гладенко).

---