Методические указания по определению ронстара (оксидиазона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2096-79)
Примечание
Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563).
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А. И. Заиченко
19 октября 1979 г. № 2096-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОНСТАРА (ОКСИДИАЗОНА) В РИСЕ МЕТОДАМИ
ГАЗОВОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Формулы: эмпирическая C H O N Cl . 15 18 3 2 2
O
(CH ) CH-O / \
3 2 \ ___ O=/ \-C(CH )
\\ //
\
Cl Мол. масса 345,2. Химическое название: третичный бутил-2(дихлоро-2,4-изопропилокси-5-
фенил)-4-оксо-5-оксадиазолин-1,3,4.
Ронстар — белый кристаллический порошок, Т — 90 °С. Практически пл нерастворим в воде, мало растворим в этаноле, растворим в ацетоне, бензоле, ацетонитриле. ПДК и ДОК в настоящее время не установлены.
2. Методика определения ронстара в рисе
2.1 Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении ронстара из анализируемой пробы ацетоном, очистке экстракта на колонке из окиси алюминия и последующем определении хроматографическими методами.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Нижний предел определения — 0,05 мг/кг.
Размах варьирования — 70 — 90%.
Среднее значение определения — 73%.
Стандартное отклонение — +/- 10,8% при n = 13.
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5,73 +/- 13%.
2.1.3 Избирательность метода
Определению не мешают линдан, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДТ, ДДЭ.
2.2 Реактивы и растворы
Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.
Хлористый метилен, ч, МРТУ 6-09-5362-68.
Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-66.
Алюминия окись для хроматографии II ст. акт., МРТУ 6-09-5296-68.
Алюминия окись с 5% воды. К окиси алюминия прибавляют 5% по объему дистиллированной воды, тщательно перемешивают и оставляют на 12 часов. Хранят в банке с притертой пробкой.
Проявители: № 1. а) Едкий натр, 2 н раствор в смеси этилового спирта и воды 1:1.
б) Тетразол синий, насыщенный раствор в смеси этилового спирта и воды 1:1.
№ 2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл водного раствора аммиака (уд. вес 0,9) и доводят до 100 мл ацетоном.
Стандартные растворы: № 1. 10 мг ронстара (хч) растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане и доводят до метки этим растворителем. Раствор соответствует концентрации 100 мкг/мл.
№ 2. 5 мл раствора с концентрацией 100 мкг/мл вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки н-гексаном.
2.3 Приборы и посуда
Прибор для отгонки растворителей (ротационный испаритель ИР-1 или аналогичный).
Измельчитель твердых веществ (или кофемолка).
Колонки стеклянные хроматографические (200 мм х 20 мм).
Камера для хроматографирования.
Цилиндр с делениями емк. 100 мл.
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (электронно-захватный) марки «Цвет» или др.
Колонка стеклянная, диаметр 3 мм, длина 1 м, неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне NA-W или любая аналогичная неполярная фаза.
Азот газообразный особой чистоты, содержание кислорода не более 0,003%.
2.4 Подготовка к определению
Пробу риса отбирают в соответствии с утвержденными методическими указаниями. Размалывают 20 сек. в кофемолке.
2.5 Проведение определения
25 г риса помещают в коническую колбу, заливают пробу 50 мл ацетона и оставляют на ночь. Фильтруют растворитель через слой сульфата натрия и упаривают при температуре не выше 50 °С до объема 0,3 — 0,5 мл.
Окись алюминия смешивают с гексаном до кашеобразного состояния и наливают в хроматографическую колонку таким образом, чтобы высота слоя сорбента составляла 9 — 10 см. Сверху помещают слой в 2 см сульфата натрия, промывают колонку 10 мл гексана. Остаток из колбы (после упаривания) количественно переносят в увлажненную гексаном колонку порциями по 1 — 3 мл хлористого метилена. Препарат элюируют 100 мл хлористого метилена, элюат упаривают до объема 0,2 — 0,3 мл, остаток упаривают досуха на воздухе.
2.6 Обработка результатов
2.6.1. Качественная идентификация и количественное определение ронстара методом газожидкостной хроматографии.
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (электронно-захватный).
Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3 мм.
Носитель — хроматон NA-W, 0,16 — 0,20 мм, силанизированный.
Неподвижная фаза — 5% SE-30 (любая аналогичная).
Скорость газа носителя (азота) — 60 мл/мин.
Температура термостата колонок — 190 °С, детектора — 230 °С, испарителя — 230 °С. -12
При указанных выше условиях время удерживания ронстара 4,5 мин. Определению не мешают линдан (время удерживания 1 минута), 4,4'-ДДД (время удерживания 5,4 мин.), 4,4'-ДДТ (время удерживания 6,6 мин.).
Расчет проводится по методу абсолютной калибровки.
2.6.2 Определение ронстара методом тонкослойной хроматографии.
Перед началом анализа пластинку «Силуфол» активируют нагреванием в сушильном шкафу при 130 °С в течение 1 часа.
Пробу, концентрированную после очистки до 0,2 — 0,3 мл, наносят на хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от нижнего края, параллельно с пробой наносят стандартный раствор ронстара (N 1) в количестве 0,02; 0,03; 0,04 мл, что составляет 2, 3, 4 мкг препарата соответственно. Затем пластинку помещают в камеру для хроматографирования с подвижным растворителем — бензолом. После хроматографирования пластинку сушат на воздухе и проявляют одним из проявителей. При проявлении тетразол-синим пластинку следует вначале опрыскать 2 н водно-спиртовым раствором едкого натра, нагреть в сушильном шкафу при температуре 120 °С в течение 4-х минут. Затем опрыскать насыщенным водно-спиртовым раствором тетразол-синего и вновь поместить в шкаф, нагретый до 120 °С, до появления фиолетовых пятен ронстара.
При отсутствии тетразол-синего препарат можно проявить аммиакатом серебра с последующим облучением УФ-светом. ДДТ и его метаболиты определению не мешают.
Величина R ронстара — 0,5 +/- 0,05. f
Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятна проб и стандартных растворов. Количество препарата в пробе вычисляют по формуле:
А х S
2
где:
Х — содержание препарата в пробе, мг/кг;
А — содержание препарата в стандартном растворе, мкг;
S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1
S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2
Р — масса исследуемой пробы, г.
2.7. Методические указания разработаны Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС, Киев), З.Ф. Юрковой.