Методические указания по определению базаграна в воде, почве, зерне и растительном материале

(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2095-79)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЗАГРАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Активное вещество базаграна (синонимы: бентазон, БАСФ 351) — 3-изопропилбенз-2,1,3-тиадиазино-4-диоксид-2,2).

Структурная формула:

         O

      /\\   / \      CH
     /  \\ /   \    /  3

N-CH \ SO CH

     \   //\   /  2    3
      \ //  \ /

         N

         H

Суммарная формула: C H № O S. 10 12 2 3

Молекулярная масса базаграна: 240,3.

Точка плавления: 137 — 139 °С.

    Растворимость  (в  г  в  100  г  растворителя): вода 0,05, этанол 86,1;
ацетон  150,7;  циклогексан  0,02;   бензол  3,3;   диэтиловый  эфир  61,6;
этилацетат   65;  хлороформ  18.  Используется  в  виде  водного  раствора.
Малотоксичен для теплокровных животных, ЛД   для крыс 110,0 мг/кг.

                                      50

Применяется для уничтожения ряда устойчивых к 2,4-Д сорняков на посевах сои, риса, фасоли, зерновых.

2.1 Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем, очистке экстракта и хроматографировании в тонком слое адсорбента.

Подвижной фазой служит смесь органических растворителей (см. табл.). В качестве адсорбента используют силикагель либо пластинки «Силуфол». Проявление хроматограмм можно осуществить двумя способами: I — термическое разложение базаграна, диазотирование нитритом натрия в солянокислой среде, азосочетание солей фенилдиазония с альфа-нафтолом (либо с N-(1-нафтил)-этилендиамином); II — активация базаграна УФ-светом, хлорирование и взаимодействие с о-толидином.

Таблица

ЗНАЧЕНИЯ ВЕЛИЧИН R БАЗАГРАНА В ТОНКОМ СЛОЕ f АДСОРБЕНТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗЛИЧНЫХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ В КАЧЕСТВЕ ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ

Адсорбент	Подвижная фаза
	Гексан + ацетон = 1:1	Гексан + ацетон = 2:1	Хлороформ + ацетон = 10:1	Бензол + ацетон = 9:1
Силикагель «Л»	0,62	-	0,46	0,34
«Силуфол»	-	0,51	0,8	0,52

Количественное определение производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций — 1 - 10 мкг.

Нижний предел обнаружения 0,5 мкг, для воды 0,05 кг/л, для почвы 0,1 мг/кг, для зерна 0,2 мг/кг.

Размах варьирования R = 95 — 70 — 25.

Среднее значение определения стандартных растворов пестицида — 90% (для воды), 73% (для почвы), 88% (для зерна).

Стандартное отклонение — 6,3% (для воды), 10% (для почвы), 11,45% (для зерна).

Относительное стандартное отклонение — 7% (для воды), 13% (для почвы), 13,1% (для зерна).

Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 альфа = 90 +/- 8,1% (для воды), альфа = 73 +/- 6,2% (для почвы), альфа = 88 +/- 5,4% (для зерна).

Определению базаграна не мешают арезин, диурон, линурон, монурон, пропанид, солан, фалоран, применяемые на зерновых культурах.

2.2 Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-71.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

    Гипс   (кальций  сернокислый  CaSO   х  2H O).  В  течение  двух  суток
                                      4       2

прокаливают при 180 °С и просеивают через сито 100 меш.

Калий марганцевокислый, ГОСТ 5.1071-71.

Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-67.

Кислота соляная, 0,1 н раствор.

Кислота фосфорно-молибденовая, 40-процентный раствор, ТУ 6-09-3540-74.

Натр едкий, ГОСТ 4328-66, 0,2-процентный раствор.

Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76.

Пластинки «Силуфол», 150 х 150 мм, Т-4-56068-76 (ЧССР).

Силикагель Л (5 — 40 мк) (ЧССР).

о-Толидин, ч., МРТУ 6-09-6337-69.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.

Этилацетат, х.ч., ГОСТ 5.1070-71.

Эфир диэтиловый (для наркоза), Фармакопея СССР.

Проявляющий раствор № 1. К смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют 1 г азотистокислого натрия.

Проявляющий раствор № 2. 3 г едкого кали растворяют в 50 мл воды, прибавляют 0,5 г альфа-нафтола.

Проявляющий раствор № 3. 1-процентный водный раствор N-(1-нафтил)-этилендиамина дигидрохлорида.

Стандартный раствор базаграна (концентрация 500 мкг/мл). 2,5 мг базаграна (х.ч.) растворяют в ацетоне в мерной колбе на 50 мл.

2.3 Посуда и приборы

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумно-ротационный испаритель, ИП-ТУ-25-11-310-69, или прибор для отгонки растворителя, МРТУ 25-11-67-67.

Воронка Бюхнера емк. 50 — 100 мл.

Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ 8613-64.

Воронки делительные емк. 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10054-75.

Камера для опрыскивания, ТУ-11-430-70.

Камера для хроматографирования размером 150 х 200, 105 х 165 мм, ГОСТ 10565-63.

Колбы мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы н/ш емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63.

Колбы круглодонные нш емкостью 150, 250 мл, ГОСТ 10394-63.

Лампа ртутно-кварцевая ОКН-11, ТУ 64-1-1618-72.

Микропипетки, ГОСТ 1770-74 (для нанесения стандартного раствора).

Насос масляный, ГОСТ 8613-64.

Пластинки стеклянные размером 9 х 12 см.

Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Прибор для встряхивания, МРТУ 2451-64.

Цилиндры мерные емкостью 25, 50, 100, 250, 500 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4 Подготовка к определению

2.4.1 Приготовление пластинок

Стеклянные пластинки тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, растирают в фарфоровой ступке с 40 мл дистиллированной воды до получения однородной массы. Сорбционную массу равномерно наносят на 5 пластинок, сушат при комнатной температуре 17 — 20 часов, затем в сушильном шкафу 20 мин. при 130 — 140 °С. Пластинки «Силуфол» также активируют при той же температуре.

2.5 Проведение определения

2.5.1 Экстракция

Вода. 200 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку, подкисляют серной кислотой до pH = 2; после чего экстрагируют базагран тремя порциями этилацетата или диэтилового эфира по 50 мл каждый раз в течение 3 — 5 мин. Объединяют экстракты, фильтруют через слой безводного сернокислого натрия. Растворитель упаривают досуха на ротационном испарителе. К охлажденному остатку приливают 0,05 — 0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

Почва (бедная органическими веществами). 50 г измельченной и просеянной почвы заливают в колбе на 500 мл смесью ацетона и воды (1:3) в количестве 200 мл и встряхивают в течение часа. После отстаивания жидкость фильтруют через бумажный фильтр, а остаток дважды промывают той же смесью, встряхивая каждый раз со 100 мл в течение 30 мин. Объединенные экстракты подкисляют конц. соляной кислотой до pH = 1 — 2 и базагран экстрагируют 40 мл хлороформа трижды каждый раз в течение 3 — 4 мин. Хлороформные экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и упаривают досуха. Приливают 0,05 — 0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

Растительный материал, зерно. 20 г измельченного образца экстрагируют ацетоном либо диэтиловым эфиром дважды по 40 мл растворителя в течение 60 мин. Фильтруют экстракты через плотный бумажный фильтр на воронке Бюхнера, затем через слой безводного сернокислого натрия. Упаривают досуха. Остаток переносят в колбу, используя 50 мл 2-процентного раствора едкого натра. Затем прибавляют конц. соляную кислоту до pH = 2 и 2,5 мл 40-процентной фосфорно-молибденовой кислоты, тщательно перемешивают раствор и через 25 — 30 мин. фильтруют через плотный бумажный фильтр на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре трижды промывают 0,1 н соляной кислотой по 10 мл. Общий фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом (либо диэтиловым эфиром) порциями по 50 мл в течение 5 мин. каждый раз. Экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают досуха. Остаток растворяют в 0,05 — 0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

2.5.2 Хроматографирование

Экстракты с помощью пипетки наносят на пластинку с тонким слоем силикагеля либо на пластинку «Силуфол». Рядом с пробами наносят 10 и 20 мкл стандартного раствора базаграна (С = 500 мкг/мл), что соответствует 5 и 10 мкг пестицида. Хроматографируют в смеси растворителей (см. таблицу). Вынимают пластинку, сушат на воздухе и помещают в сушильный шкаф, нагретый до 180 °С, выдерживают 30 — 40 мин. Извлеченные из шкафа пластинки после охлаждения опрыскивают проявляющим раствором № 1, затем раствором № 2 либо раствором № 3. Расход реактивов небольшой.

При наличии базаграна появляется пятно красного цвета (при использовании р-ра № 2) либо фиолетового цвета (при использовании р-ра № 3).

Возможно проявление хроматограмм также следующим образом. После хроматографирования и высушивания пластинку облучают УФ-светом 20 — 25 мин., затем помещают в камеру, насыщенную парами хлора. Для его получения на дно эксикатора наливают 50 мл насыщенного водного раствора марганцевокислого калия и такой же объем концентрированной серной кислоты. Через 10 — 15 мин. пластинку вынимают, оставляют на воздухе (15 мин. для удаления избытка хлора) и затем опрыскивают насыщенным раствором о-толидина в этилацетат. Базагран проявляется в виде сиренево-фиолетовых пятен на светлом фоне («Силуфол») либо серо-зеленых пятен (слой силикагеля).

2.6 Обработка результатов анализа

Количественное определение производится путем сравнения площади пятен проб и стандартных растворов. Измерение площади осуществляется с помощью миллиметровой бумаги. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 мкг. При большем содержании на пластинку наносят часть раствора.

Содержание базаграна в анализируемой пробе в мг/л либо мг/кг (X) рассчитывают по формуле:

                                A х S
                                     2

X = ------, P х S 1

где:

A — количество мкг стандартного раствора базаграна;

S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1

S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2

P — вес либо объем пробы, взятой на анализ, в г либо мл.

2.7 Требования техники безопасности

Соблюдать требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями. При работе с кварцевой лампой необходимо пользоваться светозащитными очками.

---