Методические указания по определению остаточных количеств валексона в растительном материале, почве и воде тонкослойной и газожидкостной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2093-79)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563).
19 октября 1979 г. № 2093-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ВАЛЕКСОНА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1 Валексон.
1.2. 0,0-диэтилтиофосфорил-0-(альфа-цианобензальдоксим).
1.3 S CN
(C H O) P-ON=C-// \\ C H O N PS. 2 5 2 \ ___ / 12 15 3 2 ─── Мол. масса 298,3.
1.4 Фоксим, байтион, волатон, Bay-77488, ENT-27448.
1.5. В чистом виде жидкость светло-желтого цвета с Т кип. 102 °С при 0,01 мм рт. ст., Т пл. 3 — 4 °С. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей; растворимость в воде при 20 °С — 7 мг/л.
Разрушается в сильных кислотах и щелочных средах.
Препарат малотоксичен для теплокровных. При оральном введении для крыс ЛД 1900 - 2060 мг/кг.
50
Выпускается в форме 50-процентного концентрата эмульсии, 40-процентного смачивающегося порошка для борьбы с сосущими и грызущими насекомыми на капусте, картофеле, томатах, яблонях и др. культурах, а также в виде 5-процентных гранул для борьбы с почвенными вредителями.
ПДК валексона в продуктах питания, воде и почве не установлена.
2. Методика определения валексона
2.1 Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении валексона из анализируемых проб органическим растворителем или для почвы смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (смесь в соотношении 1:1), перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями с последующим определением тонкослойной или газожидкостной хроматографией с ТИД. При определении методом тонкослойной хроматографии пробу дополнительно чистят на колонке.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
ГЖХ ТСХ Минимально детектируемое количество 1 мг 0,5 - 3 мкг Нижний предел определения 0,004 мг/кг 0,1 мг/кг (чувствительность метода) 0,001 мг/л 0,05 мг/л
в растениях 70,5 - 87,5 83 - 87 в почвах 92 - 97 90 - 95
_
c среднее значение определения, %
в растениях 76,3 85,2 в почвах 94 92
в растениях 7,9 3,3 в почвах 3,5 3,5
Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5, %
для растений 76,3 +/- 9,1 для почв 94 +/- 4
2.1.3 Избирательность метода
Метафос, фталофос, фозалон, карбофос, диазинон, фосфамид, гардона, трихлорметафос-3 определению не мешают.
2.2 Реактивы и растворы
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63, — CH COCH . 3 3
Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, — CH (CH ) CH . 3 2 4 3
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51, — CHCl . 3
Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-68, — C H . 6 6
Ацетонитрил, ч., МРТУ 6-09-6448, — CH CN. 3
Диметилформамид, ч., МРТУ 6-09-2058-65, — HCO(CH ) . 3 2
Хлористый натрий, х.ч., ГОСТ 4233-66, — NaCl.
Хлористый кальций, х.ч., ГОСТ 4161-67, - CaCl х 2H O. 2 2
Сульфат натрия, безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, — Na SO . 2 4
Уголь активированный марки КАД-молотый или ОУ-А.
Силикагель КСК с флюоресцирующей добавкой или пластинки «Силуфол UV-254».
Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4, — Al O . 2 3
1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане;
2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)пиридина в ацетоне; 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне;
3. Смесь бромфенолового синего и азотнокислого серебра в ацетоне:
А. 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч. ацетона);
Б. 0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, а затем разбавляют раствором А до 100 мл;
В. 5-процентный раствор уксусной кислоты.
Стандартные растворы валексона в ацетоне с содержанием 5 мкг/мл (для ТСХ) и в гексане с содержанием 0,5; 1; 2; 5; 7; 10 мкг/мл (для ГЖХ).
5-процентный SE-30 и 3-процентный XE-60 на хроматоне N (80 — 100 меш), силанизированный.
2-процентный полиэтиленгликольсукцинат на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм).
2.3 Приборы и посуда
Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор с ТИД.
Ротационный вакуумный испаритель или другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.
Хроматоскоп (хемоскоп) с излучением 250 — 280 нм.
Колбы конические со шлифами на 500 мл.
Делительные воронки на 2 л, 1 л и 0,5 л.
Колбы мерные на 200 мл и 100 мл.
Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.
Камера для опрыскивания хроматограмм.
Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.
2.4 Отбор и подготовка проб
Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу растений) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и для анализа отбирают среднюю пробу 10 г.
2.5 Проведение определения
Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды — в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.
Из растений валексон экстрагируют 100 мл смеси ацетона с водой (1:1), из почв — 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Из воды экстракцию валексона проводят хлороформом порциями по 120, 100 и 75 мл, экстракты объединяют.
Экстракцию инсектицида из образцов производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. Растительные экстракты охлаждают в холодильнике или в смеси соли со льдом. Пробы отфильтровывают от растительных и почвенных остатков в делительные воронки через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт подвергается очистке. Для этого в делительную воронку приливают гексан четыре раза по 20 мл. После встряхивания 3 — 5 мин. и расслоения жидкостей собирают гексановую фракцию в круглодонную колбу, высушивают путем фильтрования через безводный сернокислый натрий. Объединенный гексановый экстракт концентрируют под вакуумом при температуре не выше 40° до объема 0,5 — 1,0 мл.
При определении методов ТСХ или в случае, если методом ГЖХ получаются «грязные» хроматограммы, проводят дополнительную очистку. Это относится в основном к образцам из растительных объектов. Для этого в пробы добавляют 5 мл ацетонитрила (ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка проходит значительно лучше) и доводят общий объем до 50 мл водой. Пробы встряхивают 1 — 2 мин., далее производят переэкстракцию валексона в гексан. С этой целью пробы переносят в делительную воронку, приливают 20 мл гексана, встряхивают 1 — 2 мин. и после разделения слоев гексановый сливают в круглодонную колбу для отгонки, фильтруя через безводный сернокислый натрий, а водно-ацетонитрильный еще два раза промывают гексаном. Объединенные гексановые экстракты концентрируют под вакуумом при 40° до 5 мл и проводят количественное определение.
В случае, если проба нуждается еще в очистке, то следует применить колоночную хроматографию, а именно, пробу вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 — 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 30 — 40 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости. Из колонки валексон элюируют 100 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество валексона хроматографическими методами.
Пробы воды, проэкстрагированные хлороформом, если необходимо, то чистят подобным способом.
Условия определения тонкослойной хроматографией [1, 3]
Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 1, 2 и 5 мг валексона. Хроматограмму развивают в системе гексан — ацетон (4:1), подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из трех проявляющих реагентов.
1. Хроматограмму опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, а затем нагревают в течение 5 — 7 мин. в термостате при 110 °С. Валексон проявляется в виде оранжевых пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
2. Хроматограмму опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридина, нагревают в сушильном шкафу 3 — 5 мин. при 110 °С, затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне. Валексон проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.
3. Хроматограмму опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим снятием фона в результате обработки пластинки 5-процентным раствором уксусной кислоты. Валексон проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.
Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки «Силуфол UV-254» можно, не проявляя их, просматривать в хроматоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения 1 мкг.
R валексона в системе гексан — ацетон (4:1) на пластинках «Силуфол» f составляет 0,5 +/- 0,02.
Содержание валексона в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
С
пр
где:
С — количество препарата, найденное по хроматограмме при сравнении со пр стандартами, мкг;
А — навеска исследуемой пробы в мг или объем воды в мл.
Условия определения газожидкостной хроматографией [1, 2]
Хроматограф Цвет-106 или другой модели с ТИД.
-10
Рабочая шкала электрометра 20 х 10 А.
Стеклянная колонка длиной 100 см и внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30. Температура колонки и испарителя 130 °С. Скорость азота 25 мл/мин., водорода 15 мл/мин., воздуха 150 мл/мин. Время удерживания валексона 3 мин. 22 сек. Прочие ФОП выходят позже.
В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора, линейность детектирования сохраняется в пределах 1 — 20 нг.
2.6. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков. Содержание валексона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
Н х С х V
пр ст
С = -------------, мг/кг (мг/л),
Н х V х А
ст а
где:
Н — высота пика анализируемой пробы, мм; пр
Н — высота пика стандарта, мм; ст
С — содержание валексона в стандарте, нг; ст
V — объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл (2 мкл); а
V — общий объем рабочего раствора, мл (2 мл);
А — навеска анализируемой пробы (в пересчете на сухое вещество), г, или объем воды, мл.
Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой известное количество гексана.
Альтернативная колонка [2]
Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм заполнена хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм) с 2-процентным полидиэтилен-гликольсукцинатом. Температура колонки 190 °С, испарителя 200 °С.
Время удерживания валексона 1 мин. 37 сек. Прочие ФОП определению не мешают, т.к. выходят значительно позже, например, время удерживания метафоса 7 мин.
Авторы
Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:
1. Петрова Т.М., Федорова И.С., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.
2. Лещинская Л.И., Новикова К.Ф., Косачева Е.И., Всесоюзный научно-исследовательский институт химических средств защиты растений, Москва.
3. Швец Д.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской обл.
Требования безопасности
Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами. Осторожно обращаться с ацетонитрилом, т.к. он ядовит.