Методические указания по определению актеллика в растительном материале, в почве и в воде хроматографией в тонком слое и на газовом хроматографе
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2085-79)
19 октября 1979 г. № 2085-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, В ПОЧВЕ И В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ И НА ГАЗОВОМ ХРОМАТОГРАФЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1 Актеллик
1.2. 0,0-диметил-0-(диэтиламино-6-метилпиримидил-4)тиофосфат
1.3 Структурная формула:
CH O S CH
3 \|| ─── / 3
P-O-// \\N
/ \ ___ /
CH O N ─── C H
3 \ / 2 5
N
\
1.4 Пиримифос-метил, ПП-511, актеллик
1.5 Химически чистое вещество актеллика представляет собой жидкость
светло-желтого цвета. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей, слабо растворим в воде - 5 мг/л при температуре 30°.
-4
Удельный вес — 1,157 при 30°, давление пара — 1 х 10 . Разрушается в сильнокислых и щелочных средах.
Препарат малотоксичен для теплокровных животных — при оральном введении
ЛД для мышей составляет 1180 мг/кг. Препарат опасен для птиц (ЛД 30 - 50 50 60 мг/кг) и рыб (ЛД 0,3 - 27 мг/кг).
50
Выпускается в форме 25-процентного концентрата эмульсии, 25-процентного препарата для ультрамалообъемного опрыскивания.
2. Методика определения актеллика
2.1 Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении актеллика из растительных проб и воды органическими растворителями (хлороформом, 10 - 20-процентным ацетоном в гексане или 50-процентным водным ацетоном). Из почвы экстрагируют инсектицид смесью ацетона с 0,05 н раствором CaCl . Очистка экстрактов
2
способом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и на
хроматографических колонках. Количественное определение проводят хроматографическим в тонком слое методом или на газовом хроматографе с
термоионным детектором.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
ГЖХ ТСХ Минимально детектируемое количество 10 нг 0,5 - 3 мкг Нижний предел определения 0,002 мг/кг 0,1 мг/кг
в растениях 85,0 - 91,0 86,0 - 91,5 в почве 92,5 - 97,5 92,5 - 97,6
_
с — среднее значение определения, %
в растениях 88,5 85,5 в почве 95,0 95,0
в растениях 2,5 2,5 в почве 2,5 2,5
Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5, %
для растений 88,5 +/- 2,5 для почвы 95,0 +/- 2,5
2.1.3 Избирательность метода
Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.
2.2 Реактивы и растворы
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51, — CHCl . 3
Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, — CH (CH ) CH . 3 2 4 3
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63, — CH COCH . 3 3
Ацетонитрил, ч., МРТУ 6-09-6448-69, — CH CN. 3
Диметилформамид, ч., МРТУ 6-09-2068-65, — HCON(CH ) . 3 2
Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-68, — C H . 6 6
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, — Na SO . 2 4
Уголь активированный марки КАД — молотый или ОУ-А.
Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4, — Al O . 2 3
Силикагель КСК или пластинки «Силуфол UV-254».
5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 — 0,20 мм).
0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, после опрыскивания нагревание пластинки при 110° в течение 5 мин.
0,5-процентный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне, затем экспозиция пластинки в парах брома 20 — 30 сек.
0,05-процентный раствор бромфенолового синего в 0,5-процентном растворе азотнокислого серебра, приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 — 40° вновь опрыскивают 5-процентным раствором уксусной кислоты (лимонной кислоты).
2-процентный раствор 4-(P-нитробензил)пиридина в ацетоне после нагревания хроматограммы при 110° в течение 5 мин. вновь опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне.
Реактив Драгендорфа: раствор А — 0,85 г азотнокислого висмута растворяют в смеси 40 мл дистиллированной воды и 100 мл 40-процентной серной кислоты (серную кислоту можно заменить 10 г винной кислоты); раствор Б — 8 г йодистого калия растворяют в 20 мл воды. Растворы А и Б смешивают. Перед употреблением к 6 мл полученной смеси приливают 6 мл 20-процентной серной кислоты (или 12 г винной кислоты) и доводят объем до 25 мл водой.
Стандартный раствор актеллика в ацетоне или в гексане — 1,0 — 5,0 мкг/мл.
2.3 Приборы и посуда
Колбы конические со шлифами и пробками на 50 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные со шлифами для отгонки растворителей, ГОСТ 10394-72.
Делительные воронки на 50 и 100 мл, ГОСТ 8613-75.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74.
Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм), МРТУ 42-2590-66.
Аппарат для встряхивания колб.
Ротационный вакуумный испаритель, МРТУ 42-2589-66.
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-63.
Микропипетки 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.
Камера для опрыскивания, ГОСТ 10565-63.
Газовый хроматограф с термоионным детектором (ДТИ).
2.4 Подготовка к определению
Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.
Почву в естественном состоянии или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.
2.5 Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов
Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды — в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.
Из растений актеллик экстрагируют трижды по 50 мл 20-процентного ацетона в гексане либо 50-процентным водным ацетоном, либо 50 мл хлороформа; из почвы — 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1); из воды — хлороформом порциями: 120, 100, 75 мл. Экстрагируют при встряхивании в течение 1 часа. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник. При выпадении осадка пробы следует отфильтровать вторично. Экстракты подвергаются очистке:
а) очистка после экстракции 20-процентным ацетоном в гексане. Экстракт помещают в делительную воронку и отделяют водно-ацетоновую фракцию от гексановой. Водно-ацетоновую фракцию промывают гексаном еще два раза. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, концентрируют под вакуумом при 40 — 50° до 5 мл. После охлаждения добавляют к ним 5 мл холодного ацетонитрила. Ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка происходит значительно лучше. Пробу встряхивают 1 — 2 мин. Гексановый слой отделяют в делительной воронке и вторично дважды чистят пробу ацетонитрилом (диметилформамидом), если это необходимо. Ацетонитрильные (диметилформамидные) экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют к ним 30 мл воды и 20 мл гексана, встряхивают 1 — 2 мин. и после разделения слоев гексановый отделяют, а водно-ацетонитрильный еще раз промывают гексаном и отбрасывают. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сернокислым натрием путем фильтрования и концентрируют под вакуумом до 5 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее следует пропустить через колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 — 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД — молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 40 — 50 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости угля. Из колонки актеллик элюируют 120 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ концентрируют до объема 0,3 — 0,5 мл и количество инсектицида определяют хроматографическими методами;
б) очистка после экстракции хлороформом. Полученный экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и концентрируют под вакуумом до 0,5 - 1,0 мл. Остаток растворителя испаряют на воздухе. К сухому остатку приливают 30 мл смеси ацетона с 0,05 н CaCl (соотношение компонентов 1:1),
2
пробу переносят в делительную воронку, фильтруя через бумажный фильтр, колбу споласкивают еще 20 мл смеси ацетона с CaCl . В воронку добавляют 30
2
мл гексана для извлечения токсиканта. Гексановую фракцию отделяют, водосолеацетоновую промывают еще два раза гексаном по 20 мл. Объединенный гексановый экстракт фильтруют через безводный сернокислый натрий и концентрируют до 0,3 - 1,0 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее
дополнительно чистят на колонке, как указано выше;
в) очистка после экстракции водным ацетоном. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, добавляют 30 мл гексана для извлечения токсиканта. Далее поступают так, как описано в способе очистки «б».
Экстракты из почвы очищают путем переэкстракции в н-гексане (смотри способ «б»).
2.5.2 Хроматография в тонком слое
На расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки с тонким слоем силикагеля, в который внесен флуоресцеин, или на «Силуфол UV-254» наносят сконцентрированные экстракты проб и стандартный раствор актеллика в виде пятен диаметром не более 0,5 см. Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы или наносить экстракт в 4 — 5 точек. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями растворителя, который также наносят в центр пятна. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования и ожидают, пока фронт растворителя поднимется на высоту 10 см. Хроматографируют в системе гексан — ацетон (5:1) или гексан — этилацетат (7:3). Далее пластинку подсушивают на воздухе и проявляют одним из проявляющих реагентов. Следует указать, что наибольшей чувствительностью обладает проявитель с 2,6-дибром-N-хлорхинонимином и 4-(P-нитробензил)пиридином.
Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки «Силуфол UV-254» можно просматривать в хроматоскопе, не проявляя их. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции.
R актеллика в системе гексан — ацетон (5:1) составляет 0,75, а в f системе гексан — этилацетат (7:3) — 0,51.
Содержание актеллика в исследуемом объекте вычисляют по формуле:
A х 1000
X — содержание препарата в пробе, мг/кг;
A — количество препарата, найденное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;
P — навеска исследуемой пробы, г.
2.5.3 Газохроматографическое определение
После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 или <...> мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывая ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (2 — 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.
Условия хроматографирования: хроматограф с термоионным детектором (ДТИ), колонка стеклянная, заполненная 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS
(0,16 — 0,20 мм). Температура колонки 190°, испарителя 230°. Скорость газа- -11 носителя азота 60 мл/мин. Фоновый ток (1 — 4) х 10 А, рабочая шкала -10 электрометра 2,5 х 10 А. Время удерживания актеллика в указанных условиях 2,8 мин.
Содержание актеллика в пробе определяют методом стандартов и рассчитывают по формуле:
H х V х C х V
2 1 1 3
H х V х P
1 2
где:
X — количество препаратов в пробе, мг/кг;
C — количество препарата в стандартном растворе, мкг/мл; 1
H — высота пика стандартного раствора, мм; 1
H — высота пика анализируемого раствора, мм; 2
V — объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл; 1
V — объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл; 2
V — объем экстракта пробы для анализа, мл; 3
2.6. Обработка результатов анализа приведена в 2.5.2 и 2.5.3.
2.7 Авторы
Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:
1. Петрова Т.М., Андреев Ю.Б., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.
2. Красных А.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской области.