Методические указания по определению тиабендазола (текто) в овощах и фруктах (яблоки, лимоны, апельсины, томаты, морковь, лук, картофель, свекла, капуста), зерновых (пшенице, рисе), почве и воде методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 19.09.1979 № 2084-79, 30.06.1984 № 3059-84, 04.10.1988 № 4699-88)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТИАБЕНДАЗОЛА (ТЕКТО) В ОВОЩАХ И ФРУКТАХ (ЯБЛОКИ, ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ, МОРКОВЬ, ЛУК, КАРТОФЕЛЬ, СВЕКЛА, КАПУСТА), ЗЕРНОВЫХ (ПШЕНИЦЕ, РИСЕ), ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Л.И. Лещинским, К.Ф. Новиковой, Н.Е. Ремизовой (ВНИИХСЗР).

    Краткая  характеристика  препарата.  Тиабендазол  (текто)  -  системный
фунгицид   широкого   спектра   действия.   Действующее   начало  препарата
2-(4-тиазолил) бензимидазол. Брутто - формула  C  H N S. Молекулярная масса

                                            10 7 3

201,3.  В чистом виде - кристаллы белого цвета, т. пл. 296 - 304 °C. Хорошо
растворим  в  ацетоне (2,8 мг/мл), этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в
воде  при 25 °C меняется в зависимости от pH. При pH 5 - 12 составляет 0,05

мг/л, при pH < 5 она возрастает и при pH 2 — 10 г/л.

В картофеле МДУ 1 мг/кг, томатах — 0,1, зерне хлебных злаков — 0,2 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении тиабендазола из овощей и фруктов этилацетатом, перераспределении в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, — в этилацетат, насыщенный водой, с последующим определением методом ТСХ. Экстракты из пшеницы дополнительно очищают микросублимацией в вакууме.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 138.

Таблица 138

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Анализируемый объект	Предел определения, мг/кг или мг/л	Среднее значение определения стандартных количеств при n = 15, %	Стандартное отклонение при n = 5, %	Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5, %
Яблоки	0,07	79	+/- 7	79 +/- 9
Лимоны	0,07	78	+/- 9	78 +/- 11
Апельсины	0,07	83	+/- 12	83 +/- 15
Томаты	0,07	86	+/- 8	86 +/- 10
Морковь	0,07	95	+/- 5	95 +/- 6
Лук	0,07	93	+/- 7	93 +/- 8
Капуста	0,07	97	+/- 6	97 +/- 1
Картофель	0,07	83	+/- 11	83 +/- 14
Свекла	0,07	83	+/- 11	83 +/- 14
Пшеница	0,1	85	+/- 6	85 +/- 7
Рис	0,1	79	+/- 5	79 +/- 6
Почва	0,14	80	+/- 10	80 +/- 12
Вода	0,002	83	+/- 5	83 +/ 7

Примечание. Предел обнаружения — 1 мкг.

Избирательность метода. Метод селективен. Беномил, БМК, ридомил, байлетон, ФОП и ХОП определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Этилацетат свежеперегнанный. Гексан ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. Спирт этиловый, 96-процентный. Аммиак водный ч.д.а. Хлороводородная кислота (фиксанал) 0,1 н Едкое кали ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Уксусная кислота ч.д.а. Йодид калия х.ч. Карбонат натрия х.ч. Нитрат висмута основной ч.д.а.

Основной раствор — реактив Драгендорфа. Растворяют 850 мг основного азотнокислого висмута в 40 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты и раствор, содержащий 8 г KJ в 20 мл воды. Для проявления хроматограмм 1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы идет 2 — 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в течение длительного времени. Рабочий раствор готовят непосредственно перед обработкой хроматограммы. Стандартные растворы тиабендазола в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор № 1); 10 мкг/мл (раствор № 2) и 1 мкг/мл (раствор № 3). Растворы стабильны при хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной температуре — 6 мес.

Приборы, аппаратура и посуда. Хроматоскоп или другой источник УФ-света длиной волны 250 — 260 нм. Хроматографическая камера. Ротационный вакуумный

испаритель  с  набором  колб.  Аппарат  для  встряхивания.  Масляный насос.
Вакуумный  водоструйный насос. Колбы: плоскодонные на 500 мл; конические на
500 мл;  грушевидные на 50 мл;  мерные на 100 мл.  Цилиндры  мерные на 10 и
100  мл. Пробирки градуированные с пробками на шлифах с оттянутым концом на

5 мл. Микрошприц на 500 мкл. Пипетки на 1; 2 и 5 мл. Делительные воронки на 250 и 500 мл. Пульверизаторы стеклянные. Пластинки «Силуфол» УФ . 254 Кофейная мельница. Почвенное сито.

Подготовка хроматографических камер. За 1 ч до начала хроматографирования камеры заполняют смесью подвижных растворителей хлороформ-этиловый спирт-аммиак (100:10:0,2) и гексан-ацетон-аммиак (50:50:0,1) для насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 — 1 см от уровня дна камеры.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Измельченную с помощью ножа пробу овощей или фруктов (15 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта извлекают фунгицид 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислую фракцию собирают в другой делительной воронке на 250 мл. К объединенному раствору приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH 10 и экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 30 мл. Объединенный в конической колбе на 500 мл экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 — 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу на 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 — 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют до объема — 0,1 мл. При хроматографировании пробу наносят полностью.

Навеску размолотого риса (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 75 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта фунгицид извлекают 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислотную фракцию собирают в другой делительной воронке вместимостью 250 мл. К объединенному раствору пипеткой добавляют 4,5 мл 4 н NaOH до pH 12 и тщательно встряхивают воронку. Экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом порциями по 30 мл. Объединенный этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 — 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу вместимостью 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 — 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и ее стенки тщательно обмывают растворителем. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть полученного раствора (от 0,1 до 0,5 мл).

Навеску пшеницы (20 г) проводят через все операции, как и навеску риса. Сконцентрированный до объема 1 — 2 мл экстракт с помощью 10 — 12 мл ацетона переносят в патрон сублиматора (см. рис. 1) и проводят доочистку экстракта микросублимацией в вакууме в течение 20 мин. при температуре более 90 °C и давлении 6,67 Па (0,05 мм рт. ст.). По окончании сублимации тиабендазол смывают с помощью «пальца» сублиматора 10 мл ацетона в градуированную пробирку вместимостью 10 мл. В пробирку помещают заплавленный в верхней части стеклянный капилляр и ее содержимое концентрируют на горячей водяной бане до объема 1 мл. Пробирку закрывают пробкой на шлифе. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть раствора (от 0,1 до 0,5 мкл).

    Навеску  почвы  (15 г),  помещенную в плоскодонную  колбу  вместимостью
250 мл,  увлажняют 3 мл 1 н   раствора  Na CO  (20% массы пробы),  заливают
                                          2  3
50 мл  этилацетата  и  экстрагируют  тиабендазол  с  помощью  механического
встряхивания  колбы в течение 30 мин.  Дальнейший  анализ почвы проводят по

схеме, описанной для риса.

    В  1 л воды пипеткой добавляют 5 мл 1 н  раствора Na CO  и экстрагируют
                                                        2  3
тиабендазол   в  делительной  воронке  вместимостью  500  мл  этилацетатом,
насыщенным  водой,  4  раза порциями по 150; 100; 50 и 50 мл. Из экстракта,
объединенного   в   делительной   воронке  вместимостью  0,5  л,  извлекают
тиабендазол  0,1  н   хлороводородной  кислотой  трижды  порциями по 30 мл.

Дальнейшие определения проводят по схеме, описанной для риса.

Хроматографирование. Остаток, полученный из экстрактов овощей и фруктов, с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на пластинку «Силуфол» УФ254. Справа и слева от пробы капилляром наносят стандартные растворы тиабендазола, содержащие 1; 2; 3; 4 и 5 мкг препарата. Стандартные растворы готовят следующим образом: в серию конических пробирок пипеткой помещают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора № 2 и концентрируют растворы, нагревая пробирки на водяной бане до объема ~ 0,1 мл.

    Аликвотную  часть  полученных экстрактов из пшеницы, риса, почвы и воды
(0,1   -   0,5   мл)   с   помощью   микрошприца  на  500  мкл  наносят  на
хроматографическую  пластинку  "Силуфол" УФ   . Справа и слева от пробы тем

                                       254

же шприцем наносят серию стандартных растворов тиабендазола с содержанием 1; 2; 3; 4 и 5 мкг. Шкалу стандартов при аликвоте 0,1 мкл и 0,5 мкг готовят в градуированных пробирках согласно таблице 139.

Таблица 139

ШКАЛА СТАНДАРТОВ

Нанесение 0,1 мл			Нанесение 0,5 мл			Нанесено на пластинку, мкг
стандартный раствор, мл	ацетон, мл	содержание, мкг/мл	стандартный раствор, мл	ацетон, мл	содержание, мкг/мл
1	9	1	2	8	0,2	1
2	8	2	4	6	0,4	2
3	7	3	6	4	0,6	3
4	6	4	8	2	0,8	4
5	5	5	10	0	1	5

Аналогичным образом готовят стандартные растворы при нанесении аликвоты, промежуточной между 0,1 и 0,5 мкл.

    При  определении  тиабендазола в овощах, фруктах, пшенице, воде и почве
хроматограмму     развивают     в     системе    подвижных    растворителей
гексан-ацетон-аммиак   (50:50:0,1)   или   хлороформ-этиловый  спирт-аммиак
(100:10:0,1).  При  определении  фунгицида  в рисе предварительно развивают
хроматограмму  в  хлороформе,  а  затем  после  высушивания  -  в  одной из

указанных выше систем подвижных растворителей. После развития хроматограммы

и  высушивания пластинок на воздухе пятна тиабендазола проявляют под лампой
УФ-света.  Зоны  локализации  тиабендазола обнаруживаются в виде фиолетовых
пятен  па зеленом фосфоресцирующем фоне с R  0,49 +/- 0,02 в первой системе

                                       f

ПР  и 0,57 +/- 0,02 - во второй. Пятна можно наблюдать в течение нескольких
месяцев.  Линейный диапазон детектирования 1 - 5 мкг. При необходимости для
обнаружения  пятен  можно  использовать  реактив Драгендорфа. При обработке
хроматограмм  этим проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в виде

оранжевых пятен на белом фоне, с линейным диапазоном определения 1 — 5 мкл. Пятна стабильны в течение 7 — 8 мин.

Обработка результатов анализа. Количественное определение тиабендазола проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. Содержание тиабендазола в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                                 AV

X = ---, V P а

где:

A — содержание тиабендазола в хроматографируемой пробе, мкг;

V — общий объем раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, мл;

V — объем аликвоты, отобранный для хроматографирования, мл (при а внесении всей пробы V = V); а

P — навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.

---