Методические указания по определению остаточных количеств гетерофоса в овощных культурах, почве, воде и воздухе методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2081-79)
19 октября 1979 г. № 2081-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЕТЕРОФОСА В ОВОЩНЫХ КУЛЬТУРАХ, ПОЧВЕ, ВОДЕ И ВОЗДУХЕ МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Гетерофос — новый отечественный нематицид и почвенный инсектицид, разработанный и синтезированный во ВНИИ химических средств защиты растений. Препарат рекомендуется к использованию для борьбы с вредителями картофеля, кукурузы, томатов, огурцов и др. главным образом путем внесения в почву в виде гранул.
Действующее вещество — бесцветная жидкость со специфическим запахом, 20 температура кипения 120 °С при 0,3 мм рт. ст., d = 1,143. Хорошо 4 растворим в алифатических и ароматических углеводородах, спиртах, ацетоне, хлорсодержащих растворителях.
C H O SC H
6 5 3 7
Химическое название: O-этил-O-фенил-S-пропилтиофосфат.
Гетерофос высокотоксичен для теплокровных — ЛД ~ 30 — 60 мг/кг. 50
ПДК в воздухе, воде и ДОК в пищевых продуктах не установлены.
Основная примесь, присутствующая в техническом продукте, — O-метил-O-этил-S-пропилтиофосфат.
2. Методика определения гетерофоса в растительных пробах, почве, воде и воздухе
2.1 Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении препарата и его примеси органическими растворителями: гексаном — из воды, ацетоном с последующим перераспределением в гексан — из растительных проб и почвы; улавливание пестицида из воздуха производят с помощью пенополиуретана с последующей экстракцией гексаном из поглотителя. Идентификацию и количественное определение проводят с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол» или методом ГЖХ с ТИД.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Нижний предел определения составляет для метода ТСХ — 0,05 мг/кг в почве и овощах, 0,002 мг/л в воде, 0,02 мг/куб. м в воздухе. При использовании метода ГЖХ чувствительность (нижний предел определения) повышается в 10 раз.
Минимально определяемые количества в пробе — 0,5 мкг гетерофоса, 1 мкг примеси (ТСХ) и 0,2 нг гетерофоса, 0,5 нг примеси (ГЖХ).
Процент определения гетерофоса в почве и овощах — 75 — 85%, в воде — 93 — 98%.
Доверительный интервал (при альфа = 0,95, n = 5) не более +/- 5%.
2.1.3 Избирательность метода
Другие фосфорорганические пестициды, применяемые на тех же культурах и вредителях, не мешают определению.
2.2 Реактивы и растворы
Натрий сернокислый безводный, чда.
Носитель для газовой хроматографии хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% ХЕ-60 или 5% SE-30.
Стандартные растворы гетерофоса и O-метил-O-этил-S-пропилтиофосфата в ацетоне концентрацией 1 мг/мл (хранят в холодильнике в плотно закрытой колбе). Срок хранения — 2 мес.
Проявляющий реактив для ТСХ: 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 1-процентным водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (ацетон:вода, 3:1).
5-процентный раствор лимонной кислоты в дистиллированной воде. Срок хранения — 2 дня.
2.3 Приборы и посуда
Хроматограф газовый «Газохром» 1106 Т или любой другой с термоионным детектором.
Аспирационное устройство для протягивания воздуха через поглотитель.
Пластинки для ТСХ «Силуфол» (ЧССР), промытые ацетоном и высушенные при 120 °C в течение 2 час. (хранят в эксикаторе).
Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель РИ-1).
Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 4 мм. Перед работой заполненная носителем колонка продувается при температуре 220 °C в течение 20 час.
Колбы плоскодонные с пришлифованными пробками на 250 мл.
Делительные воронки на 250 и 500 мл.
Колбы круглодонные на 50 и 100 мл.
Камера для хроматографирования (стеклянный сосуд с пришлифованным стеклом).
Стеклянные капилляры или микропипетки для нанесения проб на пластинку.
2.4 Подготовка к определению
Воздух со скоростью 3 л/мин. протягивают в течение 15 — 20 мин. через аллонж, заполненный последовательно 2 — 3 фильтрами АФА-В-18 (для улавливания пыли, содержащей пестицид) и пробкой из пенополиуретана, которую готовят следующим образом: вырезают из пенополиуретановой губки пробки размером ~ 3 см и толщиной 2 см, заливают ацетоном на 15 — 20 мин., ацетон отжимают, еще раз промывают ацетоном, высушивают в струе сухого воздуха. Подготовленные таким образом пробочки хранят в эксикаторе или в плотно закрытой склянке.
Отбор почвенных и растительных проб и воды производят в соответствии с разработанными для отбора проб методическими указаниями.
2.5 Ход анализа
Воздух. Пенополиуретан и фильтры переносят в химический стакан и трижды промывают ацетоном или гексаном порциями по 15 мл, тщательно отжимая растворитель пинцетом и сливая его в круглодонную колбу для отгона растворителей. Упаривают экстракт с помощью ротационного испарителя до объема 0,2 — 0,3 мл.
Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая пробу 5 мин. Объединенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием (~ 5 — 7 г) и отгоняют растворитель до небольшого объема.
Почва. Навеску воздушно-сухой почвы 30 г помещают в колбу для экстракции, слегка увлажняют, заливают 60 мл ацетона и оставляют на ночь (либо экстрагируют на приборе для встряхивания 30 мин.). Экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия. Экстрагируют еще дважды порциями ацетона по 40 мл, встряхивая колбу 10 мин. Объединенный экстракт переносят в делительную воронку, разбавляют 4-кратным объемом воды и экстрагируют гетерофос из водно-ацетонового слоя гексаном порциями по 15 — 20 мл в течение 5 мин. 3 раза. Гексановые экстракты сушат безводным сернокислым натрием, упаривают.
Овощи. 30 г мелко измельченной ножом растительной массы (огурцы, картофель, томаты и т.д.) помещают в колбу емкостью 250 мл, заливают 60 мл ацетона и экстрагируют. Все операции — как и при экстракции из почвы.
2.6 Методы аналитического определения
Определение пестицида методом ТСХ.
После упаривания исследуемый раствор и стандартные растворы наносят на пластинку и хроматографируют. (Подвижный растворитель необходимо заливать в хроматографическую камеру за 20 — 30 мин. до начала хроматографирования.)
После поднятия фронта растворителя на 10 — 12 см пластинку вынимают из камеры, просушивают на воздухе до испарения растворителя и обрабатывают проявляющим реактивом. Гетерофос и O-метил-O-этил-S-пропилтиофосфат проявляются в виде сине-фиолетовых пятен на серо-синем фоне. Для закрепления пластинки сушат 10 мин. при температуре около 80 °C в сушильном шкафу и обрабатывают 5-процентным раствором лимонной кислоты. На желтом фоне проявляются четкие синие пятна. Окраска устойчива в течение нескольких суток.
Коэкстрактивные вещества, в небольшом количестве остающиеся в экстракте после переэкстракции из водно-ацетоновой среды в гексан, не мешают определению, так как остаются при хроматографировании практически на старте.
В качестве подвижных растворителей можно использовать одну из трех смесей, приведенных в таблице вместе с величинами R : s
| Подвижный растворитель | R s | |
| гетерофос | O-метил-O-этил-Sпропилтиофосфат | |
| Гексан + ацетон 5:1 Гексан + ацетон 3:1 Гексан + ацетон 1:1 | 0,70 0,83 0,92 | 0,58 0,76 0,81 |
Количество препарата и примеси вычисляют по следующим формулам:
А х (273 + t) х 760
Х = ------------------- (мг/куб. м); V х 273 х Р 0
А
А
где:
А — количество препарата, найденное путем визуального сравнения размера и интенсивности окрашивания пятен пробы и стандартных растворов, мкг;
V — объем воздуха, отобранного при анализе (t, Р), л; 0
Р — атмосферное давление в месте отбора пробы, мм рт. ст.;
t — температура воздуха в месте отбора пробы, °C;
V — объем отобранной для анализа пробы воды, мл;
М — навеска почвы или растительной массы, г.
Стеклянная колонка 1 м х 0,4 см, заполненная хроматоном N-AW-DMCS с 5% XE-60 (альтернативная колонка — 5% SE-30).
Расход газов: азота — 60 мл/мин., водорода — 23 мл/мин., воздуха — 200 мл/мин.
Температуры: колонки — 170 °C, испарителя — 220 °C.
Скорость протяжки ленты самописца 600 мм/час. -10
Рабочая шкала электрометра 1 х 10 А.
Линейность детектирования 0,01 — 20 нг в пробе объемом 2 мкл.
При указанных условиях время удерживания гетерофоса составляет 2,6 мин., O-метил-O-этил-S-пропилтиофосфата — 1,1 мин.
Количественное определение пестицида и примеси проводят путем сравнения площади пика исследуемого раствора гетерофоса с пиком, соответствующим эталонному раствору известной концентрации (при условии, что пики близки по величине и работа ведется в диапазоне линейности ТИД):
С
эт
А = V х С = --- х S х V , 1 х S х 1
эт
где:
С — концентрация исследуемого экстракта, мкг/мл; х
С — концентрация эталонного раствора, мкг/мл; эт
S — площадь пика раствора неизвестной концентрации, кв. мм; х
S — площадь пика эталонного раствора, кв. мм; эт
Площадь пиков определяют как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.
Времена удерживания других ФОП в приведенных условиях определению методом ГЖХ не мешают.
3. Настоящие Методические указания разработаны во ВНИИ химических средств защиты растений.
4. Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычные при работе с ЛВЖ. Кроме того, следует учесть, что гетерофос — высокотоксичный препарат, поэтому при работе с ним требуется особая осторожность.