Методические указания по определению диквата в семенах подсолнечника и масле из семян подсолнечника спектрофотометрическим методом

(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2073-79)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИКВАТА В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА И МАСЛЕ ИЗ СЕМЯН ПОДСОЛНЕЧНИКА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Настоящие Методические указания распространяются на определение содержания диквата в семенах подсолнечника и масле из семян подсолнечника. Указания предназначены для санитарного контроля.

    //   \\    //   \\       -
    \ ___ /    \ ___ /  х 2Br                             C  H  N Br H O
      ─── N      ─── N                                     12 12 2  2 2

Мол. масса 362,1.

          2           2

    Дикват - действующее начало препарата  "Реглон"  (преглон)-1,1'-этилен-

2,2'-дипиридилий дибромид — кристаллическое вещество слабо-желтого цвета, с

Т пл. 335 - 340 °С; при 20 °С в 100  г  воды  растворяется  70  г  диквата.
Нерастворим в несмешивающихся с водой органических растворителях.  Стабилен

в кислой и нейтральной среде, в щелочной среде образует окрашенный продукт. Применяется в форме 20-процентного водного раствора для предпосевной обработки с целью уничтожения сорной растительности и послевсходовой борьбы

с сорняками во фруктовых  садах  и  виноградниках,  для  борьбы  с  водными
сорняками  и  сорняками  в  лесоводстве,  для   обновления   пастбищ,   для
предуборочной десикации ряда культур.  ЛД    для  крыс  -  280  мг/кг.  ДОК

                                     50

диквата в семенах подсолнечника и масле из семян подсолнечника в настоящее время не установлены.

2. Методика определения диквата

2.1 Принцип метода

Метод основан на гидролизе анализируемой пробы в горячем растворе серной кислоты, ионообменной адсорбции диквата из нейтрализованного гидролизата на колонке с катионообменной смолой, элюировании диквата из колонки и его спектрофотометрическом определении в элюате после восстановления в виде свободных радикалов.

2.2 Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.

Таблица

Диапазон определяемых концентраций 0,05 — 0,1 мк/кг.

Анализируемая проба	Предел обнаружения, мг/кг	Число параллельных определений	Размах варьирования, %	Среднее значение определения, %
Семена подсолнечника, масло из семян подсолнечника	0,05	5	50 — 70	60

2.3 Реактивы и растворы

Бумага универсальная индикаторная, ТУ 6-09-1181-71.

Натр едкий, чда, ГОСТ 4328-66, 0,3 н водный раствор.

Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б), чда, ГОСТ 10652-63, 5-процентный водный раствор.

Метабисульфит натрия, чда, ГОСТ 10575-63.

Дитионит натрия, ч, ТУ МХП ГХП 126-56. Для приготовления восстанавливающего реактива растворяют 0,2 г дитионита натрия и 0,2 г метабисульфита натрия в 100 мл 0,3 н водного раствора гидроокиси натрия. Дитионит натрия нестабилен в присутствия влаги, поэтому он должен храниться в склянках с притертыми пробками в эксикаторе. Восстанавливающий реактив готовится непосредственно перед употреблением и может быть использован не более чем в течение 1 часа после приготовления.

Серная кислота, хч, ГОСТ 4204-66, 18 н водный раствор.

Хлористый аммоний, хч, ГОСТ 3773-60, 2,5-процентный и насыщенный водный раствор.

Хлористый натрий, чда, ГОСТ 4233-66, насыщенный водный раствор.

Целит-545.

Стеклоткань.

Стандартные растворы диквата в насыщенном водном растворе хлористого аммония (эти растворы стабильны в обычных лабораторных условиях; следует избегать попадания на них прямых солнечных лучей):

    а)  Основной  раствор,  250  мг/л.  Растворяют 0,1229 г чистого диквата
дибромида  (моногидрат  C  H  N Br H O,  молекулярный  вес  362,1;  50,9% -
                         12 12 2  2 2

катиона) в 250 мл насыщенного водного раствора хлористого аммония;

б) Раствор А, 10 мг/л. Разбавляют 10 мл основного раствора до 250 мл насыщенным водным раствором хлористого аммония;

в) Раствор Б, 1,5 мг/л. Разбавляют 15 мл раствора А до 100 мл насыщенным водным раствором хлористого аммония;

г) Раствор В, 1,0 мг/л. Разбавляют 10 мл раствора А до 100 мл насыщенным водным раствором хлористого аммония;

д) Раствор Г, 0,5 мг/л. Разбавляют 5 мл раствора А до 100 мл насыщенным водным раствором хлористого аммония;

е) Раствор Д, 0,25 мг/л. Разбавляют 2,5 мл раствора А до 100 мл насыщенным водным раствором хлористого аммония.

Катионообменная смола КУ-2, Na-форма, фракция 0,25 — 0,5 мм. Для приготовления ионообменной хроматографической колонки 3,5 г катионита КУ-2 в Na-форме, предварительно отмытого от примесей железа и органических примесей, переносят с водой в бюретку на 25 мл, на дно которой предварительно помещают комок стеклянной ваты или стеклоткани. Через колонку пропускают последовательно 20 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и 50 мл дистиллированной воды со скоростью 5 мл/мин. После этого колонка готова для использования. Для каждого определения приготавливается новая колонка.

н-Гексан, ч, МРТУ 6-09-2937-66.

Каприловый спирт (октанол), ч, МРТУ 6-09-5533-68.

2.4 Приборы и посуда

Делительная воронка на 1 л, ГОСТ 8613-75.

Круглодонная колба со шлифом на 1 л, КККШ, ГОСТ 10394-72.

Колба Бунзена на 2 л, ГОСТ 6514-75.

Мерные колбы на 50, 100, 250 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Стеклянный лабораторный холодильник, ХПТ, ГОСТ 9499-70.

Стеклянные пробирки градуированные со шлифом на 25 мл, ГОСТ 10515-75.

Стеклянный стакан на 2 л, ВН, ГОСТ 10394-72.

Спектрофотометр СФ-4А (любой другой спектрофотометр для измерения оптической плотности растворов в УФ-области спектра).

Воронка Бюхнера, диаметр 13 см, ГОСТ 9147-73 хроматографическая колонка — стеклянная бюретка на 25 мл (высота 50 см, внутренний диаметр 10 мм), ГОСТ 20292-74.

Электроплитка, ТУ 92-275-76.

Насадка для экстрагирования твердых веществ типа НЭТ, ГОСТ 9777-74.

Мельница электрическая для сельскохозяйственных культур, ТУ 46-22-236-76.

2.5 Проведение определения

150 — 200 г измельченных с помощью мельницы семян подсолнечника помещают в патроне из фильтровальной бумаги в насадку для экстрагирования (экстрактор Сокслета), приливают в круглодонную колбу на 1 л 200 — 300 мл н-гексана (в зависимости от объема насадки), соединяют колбу с насадкой и помещают на кипящую водяную баню. Экстракцию масла из семян проводят до тех пор, пока следующая порция слива н-гексана из экстрактора не становится бесцветной. После охлаждения содержимого колбы извлекают патрон из насадки и содержимое патрона сушат под тягой на листе фильтрованной бумаги, предотвращая попадание солнечных лучей. Упаривают гексан на ротационном испарителе и получают около 50 г масла.

50 г измельченных семян (для определения также могут быть взяты семена без предварительной экстракции из них масла в насадке для экстрагирования) помещают в круглодонную колбу на 1 л, приливают 450 мл дистиллированной воды, 15 мл 18 М раствора серной кислоты, 1 мл каприлового спирта, помещают несколько «кипятильников» (кусочки пористого материала, например, глины или кирпича), перемешивают, присоединяют к колбе обратный холодильник и кипятят на электроплитке в течение 5 часов. Для предотвращения перегрева содержимое колбы периодически перемешивают встряхиванием. После охлаждения через холодильник приливают 50 мл дистиллированной воды (на этой стадии анализ может быть прерван и продолжен в любое удобное время) и фильтруют гидролизат через фильтр, приготовленный следующим образом: на смоченный водой фильтр из фильтровальной бумаги, помещенный в воронку Бюхнера, приливают 150 мл водной суспензии, содержащей 10 г Целита-545, и при умеренном отсасывании фильтруют под вакуумом в колбу Бунзена; воду отбрасывают. После окончания фильтрации гидролизата остаток на фильтре промывают двумя порциями воды по 100 мл. При этом первая порция должна полностью пройти через фильтр перед прибавлением второй. (При отсутствии Целита-545 фильтрацию гидролизата можно осуществить через фильтр, приготовленный следующим образом: на смоченный водой фильтр из фильтровальной бумаги помещают фильтр, вырезанный из стеклоткани, и при умеренном отсасывании под вакуумом фильтруют гидролизат.) Весь фильтрат переносят в 2-литровый стакан и доводят рН фильтрата до 8 — 9 прибавлением твердой гидроокиси натрия (17 — 20 г) при медленном перемешивании. Затем прибавляют такое количество 5-процентного водного раствора трилона Б при перемешивании (50 мл), чтобы рН фильтрата было 6 — 7. Фильтруют содержимое стакана через фильтр из Целита-545 (или из стеклоткани), приготовленный так, как это описано выше, и промывают фильтр 100 мл дистиллированной воды. Фильтрат переносят в делительную воронку на 1 л, присоединяют ее к ионообменной хроматографической колонке и пропускают фильтрат через колонку со скоростью 5 — 10 мл/мин. Затем колонку промывают 25 мл дистиллированной воды, 200 мл 2,5-процентного водного раствора хлористого аммония и 50 мл дистиллированной воды. Скорость прохождения жидкости на этих стадиях через колонку 3 — 4 мл/мин. На этом этапе анализ может быть прерван и продолжен на следующий день при условии покрытия слоя ионообменной смолы водой. Затем элюируют дикват из колонки насыщенным водным раствором хлористого аммония со скоростью 1 мл/мин. Собирают первые 50 мл элюата в мерную колбу на 50 мл и перемешивают. Для определения 10 мл элюата помещают в стеклянную пробирку с притертой пробкой, приливают 2 мл восстанавливающего реактива, перемешивают и измеряют в течение 5 минут после прибавления восстанавливающего реактива оптическую плотность окрашенного раствора свободных радикалов диквата (окраска элюата зеленого цвета, образованная свободными радикалами диквата, стабильна в течение 5 — 7 минут и затем медленно исчезает) на спектрофотометре в кюветах с l = 5 см при 4-х длинах волн — 375, 379, 383 и 385 нм против раствора сравнения, состоящего из 10 мл насыщенного водного раствора хлористого аммония и 2 мл восстанавливающего реактива. Оптическую плотность элюата Е рассчитывают при помощи двух уравнений:

              I

                 Е    = 3,79Е    - 2,28Е    - 1,52Е   ;
                  379        379        375        385

                II

                379           379    375    383

                                                                  I

    Находят среднее значение оптической плотности элюата при 379 нм (Е    +
   II                                                                 379

• Е ) / 2 и по калибровочному графику определяют концентрацию элюата. 379

Для построения калибровочного графика 10 мл раствора диквата определенной концентрации (растворы Б, В, Г и Д) помещают в стеклянные пробирки со шлифами, приливают 2 мл восстанавливающего реактива, перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора свободных радикалов диквата в кюветах с l = 5 см на спектрофотометре при длине волны 379 нм. В качестве раствора сравнения используется смесь: 10 мл насыщенного водного раствора хлористого аммония и 2 мл восстанавливающего реактива. Оптическую плотность каждого раствора измеряют трижды, берут среднее арифметическое и строят график зависимости оптической плотности от концентрации растворов диквата. Полученный калибровочный график обрабатывают по методу меньших квадратов и в дальнейшем анализе используют уравнение калибровочного графика для нахождения концентрации элюата. Это уравнение имеет следующий вид:

Y = A + B X,

где:

Y — оптическая плотность растворов диквата;

X — концентрация растворов диквата, взятых для построения калибровочного графика, мкг/мл;

A и B — коэффициенты, получаемые при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

При определении диквата в масле для анализа берут 50 г и поступают так, как это описано при определении в семенах подсолнечника.

Перед проведением анализов необходимо проделать серию экспериментов по определению процента возврата диквата из проб семян и масла, к которым был прибавлен чистый дикват.

2.6 Обработка результатов анализа

Для определения содержания диквата в анализируемых пробах используют следующую формулу:

                                V   100

Q = — C ---, P R

где:

---