Методические указания по определению витамицина А в воздухе методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 № 2071-79)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАМИЦИНА А В ВОЗДУХЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Настоящие Методические указания распространяются на метод определения витамицина А в воздухе рабочей зоны при проведении сельскохозяйственных работ.

1. Краткая характеристика препарата

Витамицин А — соединение, образуемое актиномицетом оранжевой группы Act. aureoverticillatus, относится к типу пиррил-дипиррил метеновых соединений. Структурная формула (Хохлова и др., 1964 г.):

          OCH   R   R

<pre class="legal-pre">               │ 3  │1  │2
    ┌┬─┬┐  ┌┬──┐    ┌───┐
    ││ ││  ││  │    │───│
    ││ ││  ││  │    │   │
    \   /──\   /\ //\  //-R                          R  + R  + R  = C  H  .
     \ /    \ /  \/  \//   3                          1    2    3    11 23
      N      N   CH   N</pre>
      │

  H

Суммарная формула: C H № O. Молекулярная масса 393. Точка плавления 25 35 3

192   -   194°.   По   внешнему   виду   витамицин   А  представляет  собой
оранжево-красные  призматические  кристаллы. Витамицин А хорошо растворим в

органических растворителях, нерастворим в воде.

Витамицин А является основным действующим началом препарата витамицина, применяющегося для повышения продуктивности животных и птиц.

ПДК в воздухе рабочей зоны 0,001 мг/куб. м.

2. Методика определения витамицина А в воздухе методом тонкослойной хроматографии

2.1 Общие положения

2.1.1 Принцип метода.

Метод основан на хроматографировании витамицина в тонком слое силикагеля в системе хлороформ — метанол (9:1) после экстракции с фильтров АФА-ХП-18 или АФА-ВП-10 этиловым спиртом, упаривании досуха и растворении в хлороформе.

Зоны локализации обнаруживаются визуально в виде розовых пятен.

2.1.2 Метрологическая характеристика опыта.

Диапазон определяемых концентраций от 0,2 мкг/куб. м до 3 мг/куб. м.

Чувствительность определения — 0,01 мкг в пятне.

Среднее значение определения стандартных препаратов витамицина 85%. Стандартное отклонение — 8,5%. Относительное стандартное отклонение — 2,6%.

Вещества, входящие в состав препарата, не мешают определению.

2.2 Реактивы и растворы

Этиловый спирт, ГОСТ 10749-64.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51.

Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-67.

Ацетон, ГОСТ 2603-71.

Стандартный раствор витамицина А с содержанием 40 мкг/мл: 0,0020 г витамицина А растворяют в хлороформе в мерной колбе емкостью 50 мл.

Рабочий раствор витамицина А с содержанием 4 мкг/мл: готовится из стандартного раствора.

2.3 Приборы и посуда

Воронки делительные, ГОСТ 8613-64, на 50 мл.

Микропипетки, ГОСТ 1777-64.

Колбы грушевидные емкостью 25 мл, ГОСТ 10394-63.

Цилиндры мерные на 10 мл.

Палочки стеклянные.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-63.

Хроматографические пластинки «Силуфол» производства ЧССР.

Весы аналитические, тип АДВ-200 м.

Испаритель ротационный, ГОСТ 1911-59.

Фильтры АФА-ХП-18, АФА-ВП-10.

2.4 Ход анализа

2.4.1 Отбор проб воздуха.

Воздух протягивают со скоростью 10 л/мин. через фильтр АФА-ХП-18 или АФА-ВП-10. Для анализа необходимо 50 л воздуха.

2.4.2 Экстракция витамицина с фильтров.

Фильтр переносят в делительную воронку на 25 мл, заливают 5 мл этилового спирта и экстрагируют 10 минут. Экстракт сливают в грушевидную колбу для отгонки, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр промывают еще раз 5 мл этилового спирта. Экстракты объединяют, упаривают на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 — 1,0 мл хлороформа и проводят хроматографическое определение витамицина.

2.4.3 Условия хроматографирования.

Разрезанную пластинку «Силуфол» размером 70 х 50 мм помещают в камеру, насыщенную ацетоном, и дают подняться растворителю до конца пластинки. Затем пластинку высушивают на воздухе.

    На  промытую ацетоном пластинку наносят стандартные растворы витамицина
А  в  количестве  0,04; 0,08; 0,16 мкг (соответственно 10, 30,  40  мкл)  и
растворы анализируемого  препарата 10 - 50 мкл. Пластинку помещают в камеру
для  хроматографирования с подвижным растворителем (хлороформ:метанол 9:1).
После  подъема  фронта  растворителя  на  высоту  6  см хроматографирование
прекращают.  Затем  пластинку вынимают и сушат на воздухе. Время разделения
10   -  15  мин.  (R   =  0,35  -  0,38).  О  наличии  витамицина  в  пробе

                f

свидетельствует появление  на  хроматограмме двух розовых пятен. Содержание
витамицина   А  определяют  по  нижнему  пятну,  площадь  пятна  определяют

денситометрически.

2.4.4 Обработка результатов анализа.

Расчет витамицина производят по формуле:

                               С х S
                                    х

Х = -------,

                                   S  х V
                                    о    о

где:

Х — содержание витамицина в пробе в мг/куб. м;

С — количество витамицина в стандарте в мкг;

S — площадь пятна пробы, кв. мм; х

S — площадь пятна стандарта, кв. мм; о

V — объем пропущенного через фильтр воздуха, приведенный к о атмосферному давлению 760 мм рт. ст. и 20 °С; или:

                                  А

Х = -, V

где:

---