Требования к проведению иммуногематологических исследований эритроцитов доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ. Методические указания № 2001/109

(утв. Минздравом РФ 11.04.2002)

ТРЕБОВАНИЯ К ПРОВЕДЕНИЮ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ЭРИТРОЦИТОВ ДОНОРОВ И РЕЦИПИЕНТОВ НА СПК И В ЛПУ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

№ 2001/109

АННОТАЦИЯ

Методические указания определяют порядок проведения иммуногематологических исследований у доноров при заготовке гемотрансфузионных сред, у реципиентов при поступлении в стационар, а также при постановке проб на совместимость перед проведением гемотрансфузионной терапии. Впервые приведено подробное описание организационных требований к исследованию антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител. Материал составлен с учетом международных требований, предъявляемых к иммуногематологическим исследованиям эритроцитов.

Методические указания предназначены для врачей и лаборантов СПК и лечебно-профилактических учреждений, а также всех специалистов трансфузионной медицины, занимающихся иммуногематологическими исследованиями крови доноров и реципиентов.

Организации-разработчики:

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии г. Санкт-Петербург.

Городская станция переливания крови г. Москва.

Новгородская областная СПК.

Авторы:

д.б.н. Минеева Н.В., к.м.н. Башлай А.Г., к.м.н. Скосырев Г.А., врач Бодрова Н.Н., Андреева А.В.

Список сокращений

АГТ — антиглобулиновый тест.

ОПК — отделения переливания крови.

РНИС — раствор низкой ионной силы.

СПК — станции переливания крови.

ВВЕДЕНИЕ

Типирование антигенов эритроцитов и исследование антиэритроцитарных антител необходимо для обеспечения иммунологической совместимости крови донора и реципиента при трансфузиях.

Ошибки при проведении исследований антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител могут быть как результатом нарушения методик исследования, так и применения неадекватных схем диагностики.

Неправильное заключение о наличии или отсутствии антигенов и антител у доноров и реципиентов может приводить к посттрансфузионным осложнениям гемолитического типа. Настоящие методические указания имеют целью установить требования к проведению иммуногематологических исследований эритроцитов в зависимости от категорий обследованных лиц.

ОПИСАНИЕ МЕТОДА

Формула метода

Впервые предложена система организационных требований к проведению иммуногематологических исследований реципиентов и доноров в результате чего обеспечивается правильность определения группы крови, резус-принадлежности, а также достоверность результатов постановки пробы на совместимость крови доноров и реципиентов.

Показания к использованию требований

Требования необходимо применять: 1. При определении группы крови и резус-принадлежности крови. 2. При исследовании антигенов эритроцитов другой специфичности. 3. При исследовании ауто- и аллоантител к антигенам эритроцитов. 4. При подборах совместимых пар донор-реципиент.

5. При исследовании причин посттрансфузионных осложнений гемолитического типа.

Противопоказания к использованию описанных требований отсутствуют.

Материально-техническое обеспечение методов

1. Реактивы для определения группы крови, резус-принадлежности, приготовленные в соответствии с требованиями приказа МЗ РФ № 2 от 09.01.98. «Об утверждении инструкций по иммуносерологии».

2. Стандартные эритроциты, заготовленные в соответствии с «Инструкцией по изготовлению стандартных эритроцитов и их применению в изосерологических исследованиях». Приказ МЗ РФ № 2 от 09.01.98.

ОПИСАНИЕ ПОРЯДКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

А. Организационные требования

А1.1. Иммуногематологические исследования проводятся лицензированными лабораториями, имеющими соответствующее оборудование и персонал, прошедший обучение.

А1.2. Иммуногематологическое исследование донорской крови проводится иммуногематологической (или резусной, или лабораторией стандартных сывороток, или клинической) лабораторией СПК или ОПК.

А1.3. Типирование крови больных по системе АВО и Резус, исследование аллоантител и тесты на совместимость перед трансфузиями проводятся на базе лечебно-профилактических учреждений.

А1.4. Первичное исследование групповой принадлежности крови больных проводит врач клинического отделения. Централизованное проведение иммуногематологических исследований крови больных организуется в соответствии с приказом главного врача ЛПУ на базе клинико-диагностической лаборатории, кабинета трансфузионной терапии или ОПК.

А1.5. Иммуногематологические отделы областных и городских СПК (лаборатории стандартных сывороток, резусные лаборатории) осуществляют организационно-методическое руководство ЛПУ, консультируют по вопросам определения специфичности аллоантител, определения сложных вариантов групп крови, проводят индивидуальные подборы крови сенсибилизированным больным.

А1.6. В сложных случаях идентификация антигенов и антител проводится иммуногематологическими референс-лабораториями Гематологического научного центра и Российского НИИ гематологии и трансфузиологии г. Санкт-Петербург.

А2. Требования к оборудованию и документации

А2.1. Необходимый набор оборудования и оснащения для выполнения иммуногематологических исследований:

• термостат на 46-48 град. С или водяная баня;
• термостат на 37 град. С;
• лабораторная центрифуга;
• микроскоп;
• сушильный шкаф;
• бытовой холодильник;
• тарелки или планшеты, пробирки и штативы для них, часы песочные на 3 и 5 минут, пипетки глазные и пастеровские, предметные стекла, термометры, лупа пяти или восьми кратного увеличения;
• стандартные сыворотки, реагенты, цоликлоны различной специфичности, антиглобулиновая сыворотка и др. реагенты;
• панели стандартных эритроцитов для определения групп крови системы АВО, для скрининга и идентификации аллоиммунных антител, их титрования, контроля определения резус-принадлежности;
• раствор 10% желатина, 5% раствор унитиола, 0,9% раствор хлорида натрия и др. необходимые реактивы.

А2.2. Необходимый набор специальной документации:

• журнал регистрации иммуногематологических исследований у доноров;
• журнал регистрации иммуногематологических исследований у больных;
• журнал регистрации постановки штампов в паспорта граждан и другие документы, удостоверяющие личность о групповой (АВО) и резус-принадлежности крови;
• бланки «Результаты исследования в лаборатории» для заключений о проведенных исследованиях;
• журнал регистрации учебных занятий с медперсоналом по вопросам иммуногематологии.

А3. Требования к персоналу. Врачебный и средний медперсонал, осуществляющий иммуногематологическое обследование, должны иметь специальную подготовку по вопросам иммуногематологии. Подготовка специалистов проводится на рабочем месте и на специализированных циклах обучения в институтах постдипломного образования или профильных НИИ (имеющих лицензию на педагогическую деятельность).

А4. Требования к применяемым реагентам и методам исследования.

Технические описания методик находятся: в приказе МЗ РФ № 2 от 09.01.1998; инструкциях по применению, прилагаемых к реактивам; соответствующих методических рекомендациях.

Все применяемые методики должны быть разрешены к применению МЗ РФ. В своей работе специалисты руководствуются приказом МЗ РФ от 09.01.98 г. № 2 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии».

Для исследования применяют реактивы, разрешенные к применению в установленном законодательством порядке.

Если используются реактивы собственного производства, они должны иметь результаты внешнего контроля качества.

Б. Иммуногематологические исследования крови доноров

Б1. Типирование

Кровь доноров должна быть типирована по антигенам системы АВО, Rh и антигену К системы Kell.

Б1.1. Исследование групповой принадлежности крови по системе АВО

Б1.1.1. Перед кроводачей исследование группы крови доноров проводится со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками (анти-АВ, анти-В и анти-А) или моноклональными антителами специфичности анти-А, анти-В (одной серией реактивов).

Б1.1.2. После каждой кроводачи определение группы крови проводится в лаборатории на маркированном образце крови донора, взятого без консерванта в пробирку-спутник, с применением перекрестного способа определения группы крови АВО изогемагглютинирующими сыворотками (анти-АВ, анти-В и анти-А) или моноклональными антителами специфичности анти-А, анти-В (одной серией реактивов). Исследование агглютининов в сыворотке проводят с эритроцитами А1, В и О. При необходимости дифференцированной диагностики антигенов А1 и А2 используют реактивы анти-А1 и анти-Н.

Б1.1.3. Если групповая принадлежности крови донора определена дважды на образцах крови от разных кроводач двумя различными реактивами с использованием перекрестного метода исследования со стандартными эритроцитами и результаты совпали, то при последующих кроводачах допускается исследование группы крови в лаборатории проводить одной серией стандартных сывороток или моноклональных антител.

Б1.2. Исследование Rh-принадлежности крови доноров

Б1.2.1.Первичное исследование Rh-принадлежности крови доноров проводится в лаборатории двумя различными методами. Для проведения исследования используют экспресс- метод в пробирках без подогрева (универсальный реагент анти-D), либо метод агглютинации на плоскости с применением моноклональных антител (реактив цоликлон анти-D супер), либо другой утвержденный метод.

Реагенты анти-D супер, содержащие антитела класса иммуноглобулинов М, IV

не  выявляют варианты антигена D (например, D  ). Поэтому все образцы крови
доноров,  показавшие  отрицательный  результат  с  реактивом  анти-D  супер
необходимо   дополнительно   исследовать  с  реактивом  анти-D,  содержащим
неполные   антитела   (иммуноглобулины   класса   G)  желатиновым  методом,
экспресс-методом  в  пробирках с 33% полиглюкином, агглютинацией в геле или
антиглобулиновым   тестом   (реакцией   Кумбса).   В  сомнительных  случаях
проводится  непрямой  антиглобулиновый  тест  (АГТ). Доноры, имеющие слабый

           IV

антиген D или D фенотип, считаются Rh-положительными.

Б1.2.2. При последующих кроводачах, если резус-принадлежность донора определена дважды на образцах крови, взятых от разных кроводач каждый раз двумя сериями реагентов или сывороток, то исследования резус-принадлежности крови проводятся с применением одной серии реагентов.

Б1.2.3. Все D-отрицательные образцы крови доноров должны исследоваться на наличие или отсутствие антигенов С и Е с сыворотками или моноклональными антителами соответствующей специфичности. Допускается применение полиспецифических сывороток или реагентов анти-DCE, либо одновременно анти-DC и анти-DE. Типирование донорской крови по антигенам С и Е проводится двукратно во время разных кроводач разными сериями сывороток или реагентов. При последующих кроводачах данные исследования можно не проводить.

Б1.2.4. В каждую серию исследований должны быть включены «положительный» и «отрицательный» контроли: эритроциты D- и D+, (C-, C+, E-, E+).

Б1.2.5. Все данные типирования заносятся на карточки донора (и электронные носители).

Б1.3. Исследование антигена К

Б1.3.1. Определение антигена К (К1) системы антигенов эритроцитов Kell проводят с применением сывороток или моноклональных реагентов анти-К. Типирование донорской крови по антигену К проводится двукратно во время разных кроводач разными сериями сывороток или моноклональных реагентов. При последующих кроводачах типирование антигена К не обязательно.

Б1.3.2. Кровь К положительных доноров маркируется как «К+», кровь К отрицательных доноров маркируется как «К отр».

Б1.3.3. В каждую серию исследований должны быть включены «положительный» и «отрицательный» контроли: эритроциты К- и К+.

Б1.3.4. Эритроциты К положительных доноров (К+) могут быть использованы К отрицательным (К-) больным — мужчинам при условии отсутствия у них аллоантител к антигену К. Нельзя использовать К положительные эритроциты доноров женщинам детородного возраста и детям, имеющим К отрицательную принадлежность.

Б1.4. Фенотипирование

    Б1.4.1.  С  целью  формирования  штата  типированных  доноров и доноров
стандартных  эритроцитов  для  поиска  и  идентификации  аллоантител на СПК
необходимо  проводить  типирование антигенов эритроцитов доноров. Для этого
используют   сыворотки   или  реагенты  на  основе  моноклональных  антител

                                                      w

специфичности анти-с, анти-С, анти-Е и анти-е (и анти-С ) и др. Методики проведения типирования указываются в прилагаемых к реагентам инструкциях по применению.

Б2. Определение нерегулярных антиэритроцитарных антител

Б2.1. Проведение скрининга антител

Б2.1.1. Нерегулярные антитела подразделяют на имеющие и неимеющие клиническое значение. Под клинически значимыми антителами подразумевают антитела, способные вызывать in vivo разрушение эритроцитов, имеющих на мембране соответствующий антиген, и с существованием которых связано возникновение гемолитической болезни новорожденных, посттрансфузионные гемолитические осложнения или укорочение выживания перелитых эритроцитов. Антитела, реагирующие с антигенами в антиглобулиновом тесте имеют клиническое значение.

Б2.1.2. Тесты, применяемые для скрининга антител, должны выявлять клинически-значимые антитела и включают: антиглобулиновый тест при 37 град. С, либо его модификацию аналогичной чувствительности (РНИС, гелевые тесты), метод с применением 10% желатина и микроскопированием результата.

Б2.1.3. Эритроциты типированных доноров для исследования антител могут быть свежезаготовленными или консервированными.

    Фенотип  стандартных  эритроцитов:  обычно  панель,  состоящая  из трех
образцов  эритроцитов группы О. Например: один образец эритроцитов фенотипа
ccDEEK-,  второй  образец:  CCDeeK-,  третий образец: ccddeeK. Эритроциты в
                                                 a     b     a     b
панели  должны  так  же  содержать  антигены:  Fy ,  Fy ,  Jk ,  Jk ,  S, s
(желательно  гомозиготы  по этим генам). Для исследования антител у доноров
допускается  применение  смеси  трех  образцов  тест- эритроцитов указанных

фенотипов.

Б2.1.4. Сыворотка всех доноров исследуется на наличие антител к антигенам эритроцитов независимо от резус-принадлежности. У доноров, не имеющих в сыворотке антител к антигенам эритроцитов, повторные исследования проводят один раз в год, при отсутствии в анамнезе переливаний крови или беременностей. В случае обнаружения нерегулярных антител исследование по скринингу антител проводят при каждой кроводаче.

В крови всех доноров определяют титр антител к антигенам АВО. Если титр превышает значение 1:64, то проводится выявление иммунных анти-А, анти-В антител методом с применением унитиола. Кровь донора, используемая для изготовления тромбоцитов или плазмы, а также в качестве универсального компонента, не должна содержать иммунных антител в титре выше, чем 1:4.

В случае обнаружения нерегулярных холодовых антител к антигенам эритроцитов, экстраагглютининов, гемолизинов, цельная кровь или плазма донора не рекомендуется использоваться для переливания (допускается приготовление отмытых или размороженных эритроцитов). В случае неспецифической агглютинации эритроцитов или сыворотки донора, панагглютинации, кровь донора для переливания не используется.

Б2.1.5. В случае обнаружения нерегулярных тепловых антиэритроцитарных антител цельная кровь или плазма донора не должна использоваться для переливания (допускается приготовление отмытых или размороженных эритроцитов), такую плазму целесообразно использовать для изготовления типирующих сывороток.

Б2.2. Определение специфичности выявленных аллоантител

Б2.2.1. Определение специфичности выявленных аллоантител у доноров проводят так же как и в сыворотках реципиентов (см. п. В3.3.).

В. Иммуногематологические исследования крови реципиентов

В1. Общие требования к образцам, взятым на исследование.

В1.1. Предтрансфузионные тесты могут быть выполнены как с сывороткой, так и с плазмой больного. При использовании для исследования плазмы существует опасность не выявления слабоактивных антител за счет разведения стабилизирующим раствором. Не полностью коагулированная кровь может вызвать проблемы в проведении тестов и оценке результата. Гемолизированный образец должен быть заменен новым образцом. Хилезная кровь так же не используется.

На пробирках с кровью указывают Ф.И.О. больного (полностью), год рождения, дату взятия образца, № истории болезни.

В направление на исследование вносят: название лечебного учреждения, отделение, № истории болезни, полное Ф.И.О. больного, пол, год рождения, трансфузионный и акушерский анамнез, данные о группе крови и Rh- принадлежности, диагноз, требуемое исследование, фамилия и подпись ответственного врача, дата, телефон отделения. Направление прикрепляют к соответствующей пробирке.

В1.2. Сроки исследования.

Образец крови больного, предназначенный для использования в пробе на совместимость или поиска антител, должен быть взят не более, чем за 3 дня перед предполагаемой трансфузией.

В1.3. Хранение образцов для исследования после переливания.

Образец крови реципиента и донорские эритроциты (остатки гемотрансфузионной среды, пробирка-спутник) должны храниться при температуре 4-8 град. С не менее 5 дней после переливания крови.

В2. Типирование крови реципиентов

В2.1. Определение групповой принадлежности по системе АВО

В2.1.1. Первичное определение группы крови по системе АВО проводит дежурный или лечащий врач стандартными гемагглютинирующими сыворотками анти-АВ, анти-В и анти-А или цоликлонами анти-А, анти-В.

В2.1.2. Повторное исследование антигенов эритроцитов системы АВО проводят в лаборатории перекрестным методом с применением стандартных гемагглютинирующих сывороток анти-АВ, анти-В и анти-А или цоликлонов анти-А, анти-В и стандартных эритроцитов О, А1 и В. Любые расхождения должны быть выяснены и разрешены до переливания. Заключение о групповой принадлежности крови делается на основании первичного и повторного исследований. Больные, имеющие экстраагглютинины анти-А1 не должны получать эритроциты доноров с антигеном А1.

В случае экстренных переливаний — см. п. В6.

В2.2. Определение Rh-принадлежности крови реципиентов

В2.2.1. Антиген D системы RH у больных определяют с помощью сывороток и реагентов анти-D с соответствующими контролями для исключения ложноположительных результатов следующими методами: методом агглютинации на плоскости с применением моноклональных реактивов, содержащих анти-D IgM антитела (Цоликлон анти-D-супер), методом конглютинации в пробирках с желатином или 33% полиглюкином, гелевым методом, антиглобулиновым тестом с использованием сыворотки анти-D или моноклональных анти-D IgG.

В2.2.2. Тест на наличие слабых антигенов или вариантов антигена D для реципиентов не проводят.

В2.2.3. Если резус-принадлежность крови реципиента определить не удается, больному переливают D-отрицательную кровь, пока резус-принадлежность не будет установлена.

В2.3. Определение Kell-принадлежности

Определение Kell-принадлежности крови больных сыворотками или моноклональными реагентами анти-K проводится при необходимости. Порядок проведения исследования аналогичен таковому у доноров.

ВЗ. Определение нерегулярных антиэритроцитарных антител

В3.1. В случае проведения плановой гемотрансфузии у реципиентов должен быть проведен предварительный скрининг антител (см. пп. Б2 и В1.2). Тест-эритроциты для скрининга антител у реципиентов не следует смешивать (пулировать).

В3.2. Результаты исследования образца должны быть сверены с записями предыдущего тестирования, если таковые имеются. Предыдущие записи просматриваются на предмет предсуществующих клинически значимых антител, наличия трудностей в тестировании, побочных реакций при трансфузиях.

В3.3. Идентификация антиэритроцитарных антител

В3.3.1. Нерегулярные антиэритроцитарные антитела могут быть обнаружены у больного на разных этапах иммуногематологического исследования: перекрестном определении системы АВО, пробах на совместимость, скрининге антител. В случае выявления у больного антиэритроцитарных антител, должна быть определена их специфичность.

В3.3.2. Для установления специфичности антител, выявленных первичным скринингом, необходимо использовать панель эритроцитов, включающую не менее

10  образцов.  Панель  стандартных  эритроцитов  должна  состоять из такого
сочетания  фенотипов,  который  позволяет определить специфичности основных
клинически  значимых антител: моноспецифических и полиспецифических анти-D,
       w                             a     b     a     b                 a
-С,  -C ,  -с,  -Е,  -е,  -К, -k, -Fy , -Fy , -Jk , -Jk , S, -s, (-M, -Le ,

-P1).

В3.3.3. При установлении специфичности рекомендуется расширенное типирование эритроцитов лица, в сыворотке которого обнаружены антитела.

В3.3.4. Если известно, что больной уже имеет антитела, специфичность их должна устанавливаться каждый раз при проведении исследования для исключения антител другой специфичности, которые могли выработаться дополнительно. Для выявления вновь образующихся антител дополнительной специфичности необходимо использовать для исследования эритроциты, не содержащие антигенов против антител, которые уже идентифицированы. Специфичность антител подтверждается 3-мя антиген-положительными и 3-мя антиген-отрицательными образцами эритроцитов доноров.

В3.3.5. При обнаружении антител к антигенам эритроцитов выписывается ответ, который переносится в историю болезни. В ответе обязательно указывается, что в случае необходимости проведения гемотрансфузионной терапии, индивидуальный подбор крови осуществляют с применением антиглобулинового теста. Бланк ответа остается у больного, хранится в течение жизни и предъявляется при госпитализации.

В3.3.6. Если у реципиента однажды были выявлены клинически значимые антитела к антигенам эритроцитов, такой реципиент всегда, даже, если в последствии антитела указанной специфичности перестали выявляться в сыворотке, должен получать гемотрансфузионную среду, не содержащую антигенов к антителам выявленной специфичности.

Подбор крови доноров для больных с нерегулярными антителами проводится в лаборатории. Эритроциты доноров, предназначенные для переливания, не должны иметь антигенов, одноименных антителам реципиента. Если типированные образцы крови доноров отсутствуют, для подбора используются образцы крови доноров, совместимые в непрямом антиглобулиновом тесте. Для переливания могут быть отобраны образцы крови, показавшие отрицательный результат в АГТ, хотя и взаимодействующие с сывороткой реципиента при комнатной температуре (при условии, что лабораторное исследование не выявило антител, имеющих клиническое значение).

В4. Предтрансфузионные тесты

За исключением экстренных ситуаций, должны быть выполнены тесты на совместимость крови донора и реципиента. Методы должны выявлять АВО-несовместимость и клинически значимые антитела (лучше использовать анти-глобулиновый метод или его аналоги). Все контрольные исследования выполняются на свежевзятом образце крови больного.

В4.1. Контроль группы крови АВО у больного

Непосредственно перед переливанием врач снова определяет АВО-принадлежность крови донора и больного и сверяет результаты с записью в истории болезни и с обозначением группы крови донора на контейнере (флаконе). Исследование проводят стандартными сыворотками или цоликлонами.

В4.2 Эритроциты донора, которые используют для определения АВО-принадлежности или в тестах на совместимость, получают из сегмента трубки от пластикатного мешка или из системы при первичном заполнении донорской крови.

В4.3. Холодовая проба на совместимость. Непосредственно перед переливанием врачом должна быть выполнена холодовая проба на совместимость между сывороткой больного и эритроцитами донора, выполняемая при температуре 15-25 град. С и четко выявляющая АВО-несовместимость (на плоскости без подогрева, агглютинация в геле, спин-методика).

В4.4. Тепловая проба на совместимость

Непосредственно перед переливанием врачом должна быть выполнена тепловая проба на совместимость между сывороткой больного и эритроцитами донора с применением метода конглютинации с желатином, 33% полиглюкина или антиглобулинового теста (гелевый тест).

В4.5. Постановка проб на совместимость в лабораториях

В случае сенсибилизации реципиентов, рекомендуется пробы на совместимость выполнять в условиях иммуногематологической лаборатории. В этом случае применяются чувствительные тесты, выявляющие клинически значимые антитела в тестах на совместимость, включающие антиглобулиновый тест или желатиновую пробу с микроскопированием результата. В случае выполнения предтрансфузионных тестов в лаборатории, заполняется «бланк совместимости», который вклеивается в историю болезни, а выполнение тепловой пробы на совместимость перед трансфузией не требуется.

В5.6. Индивидуальный подбор крови донора

Индивидуальный подбор крови донора проводит врач-лаборант ЛПУ, ОПК или СПК, имеющий специальную подготовку по иммуногематологии.

Больному проводится индивидуальный подбор крови донора при наличии следующих показаний:

• Отягощенный трансфузионный или акушерский анамнез (реакции и осложнения на прежние гемотрансфузии, беременности, закончившиеся рождением новорожденных с желтухой или другими признаками ГБН).
• Больные имеющие антиэритроцитарных аллоантител в сыворотке).
• Затруднения с определением группы крови.
• Положительный или сомнительный результат индивидуальных проб на совместимость.
• Больные, которым предполагается проведение многократных трансфузий.
• Новорожденные с признаками гемолитической болезни.

В5. Экстренные переливания

При иммуногематологическом исследовании реципиентов в экстренных случаях дежурный медперсонал, переливающий гемотрансфузионные среды, должен:

• определить группу крови системы АВО стандартными гемагглютинирующими сыворотками АВО или цоликлонами анти-А и анти-В;
• определить резус-принадлежность с использованием универсального реагента «анти-D» или с помощью цоликлона анти-D супер;
• провести пробы на совместимость.

Скрининг нерегулярных антител перед экстренной гемотрансфузией не проводится, а должен быть сделан ретроспективно, после переливания на предтрансфузионном образце крови больного.

В6. Посттрансфузионные гемолитические осложнения

В6.1. При обнаружении у больного признаков посттрансфузионного осложнения врач обязан:

• Остановить трансфузию, не вынимая внутривенной системы.
• Выполнить повторный контроль группы крови системы АВО больного и донора, сравнить обозначения на флаконе (мешке). В случае расхождения, немедленно осуществлять лечебные действия.
• Взять 2 образца крови больного, визуально оценить окрашивание сыворотки больного на предмет гемолиза. Один образец крови направить в клиническую лабораторию лечебного учреждения, другой образец крови больного вместе с предтрансфузионным образцом и остатками гемотрансфузионной среды в мешке (флаконе) направить в иммуногематологическую лабораторию СПК.
• Взять образец мочи больного, оценить и направить в клиническую лабораторию лечебного учреждения.

В6.2. В клинической лаборатории лечебного учреждения выполнить следующие исследования:

• Свободный гемоглобин в сыворотке (плазме).
• Сывороточный гаптоглобин.
• Билирубин.
• Гематокрит.

Результаты исследования сообщить в иммуногематологическую лабораторию СПК.

В6.3. В иммуногематологической лаборатории СПК выполнить следующие исследования:

• визуально оценить окраску сыворотки посттрансфузионного образца на предмет гемолиза;
• провести контроль ABO, Rh, Kell-принадлежности больного (пред- и посттрансфузионный образцы) и донора;
• выполнить пробы на совместимость;
• осуществить скрининг аллоантител;
• при обнаружении аллоантител осуществить их идентификацию;
• провести прямой АГТ на посттрансфузионном образце;
• провести исследование аллоантител в элюате;
• при необходимости произвести индивидуальный подбор крови донора.

Исследование группы крови, резус-принадлежности, аллоантител доноров и реципиентов в сложных случаях необходимо проводить в соответствии с методическими рекомендациями «Алгоритмы исследования антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях» № 99/181. Утв. МЗ РФ 17.05.2000 г.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА

Эффективность применения указанных требований подтверждена двухлетним опытом работы Российского НИИ гематологии и трансфузиологии при выявлении группы крови и резус-принадлежности у 16251 доноров и реципиентов, у 125 беременных и новорожденных, включая сложнодиагностируемые варианты антигенов АВО и Резус, для проведения исследования ауто- и аллоантител у 2192 реципиентов, имевших несовместимость с образцами крови доноров. Проведение иммуногематологических исследований в соответствии с изложенными требованиями позволило сократить количество ошибок при выявлении антигенов и антител (которые встречаются на практике в 0,05-0,1% случаев) и обеспечить отсутствие осложнений после трансфузий крови доноров.

---